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【摘要】：胰岛素可以通过其免疫特异性，与被碱性磷酸酶标记的抗体结合成免疫复合物，发生酶联免疫反应，碱性磷酸酶是一种水解酶，它可以催化磷酸单酯类化合物进行水解，而磷酸单酯水解产物又可以被化学振荡检测。本论文的设计思路可以通过找到一种本身对化学振荡没有影响，但是其碱性磷酸酶催化的水解产物却可以直接扰动化学振荡，碱性磷酸酶又可以发生酶联免疫反应，所以用化学振荡去检测酶联免疫的生成物。 本论文提出建立一种新型的微量的B-Z振荡体系来检测酶联免疫分析中的胰岛素浓度。不同浓度的胰岛素与被碱性磷酸酶标记的抗体进行酶联免疫反应，利用此免疫生成物上的碱性磷酸酶，催化一定浓度的维生素C磷酸酯钠溶液发生水解反应，反应生成的维生素C可以直接用新型的微量的B-Z振荡体系进行测定，在特定条件下，不同浓度的碱性磷酸酶催化生成的维生素C的量不同，从而引起微量的B-Z振荡体系的振幅或周期的改变量不同，根据化学振荡的这种参数的改变量就可以对酶联免疫反应中的胰岛素进行浓度测定。 建立一种新型的微量的苹果酸体系的B-Z化学振荡，通过实验对其微量体系中的各组分浓度进行优化。结果表明，当这种微量的苹果酸体系的B-Z化学振荡的个组分浓度为：[H2SO4]=1.05mol/L，[NaBrO3]=0.60mol/L,[[CuL](ClO4)2]=2.21*10-3mol/L，[DL-苹果酸]=0.6mol/L时，维生素C对体系的扰动最大。当维生素C的浓度在0.5*10-9～1*10-7mol/L范围内，此振荡周期的改变量与log[VC]呈良好的线性关系，检出限为3.15*10-10mol/L(3δ)，最低检测量为7.875*10-17mol；加入维生素C后第一个电极电势的最高值与log[VC]呈良好的线性关系，检出限为3.95*10-10mol/L(3δ)，最低检测量为9.875*10-17mol。微量苹果酸体系的B-Z化学振荡对碱性磷酸酶的测定：当碱性磷酸酶的活度在1～16U/L范围内时，振荡振幅的改变量与log[ALP]呈良好的线性关系，检出限为0.59U/L(3δ)，最低检测量为1.475*10-7U；振荡周期的改变量与log[ALP]也呈线性关系，检出限为0.56U/L(3δ)，最低检测量为1.40*10-7U。 建立一种新型的微量的葡萄糖-丙酮体系的B-Z化学振荡检测体系，并且对其组分的各浓度进行优化。结果表明，当体系中各组分的浓度分别为：[H2SO4]=1.05mol/L，[葡萄糖]=0.06mol/L，[丙酮]=0.65mol/L，[[CuL](ClO4)2]=0.05mol/L，[NaBrO3]=0.08mol/L，维生素C对振荡的扰动最大。当维生素C的浓度在0.5*10-9～1*10-7mol/L范围内时,振荡振幅的改变量与log[VC]呈良好的线性关系，最低检测限为2.6*10-10mol/L(3δ)，最低检测量为6.5*10-16mol；振荡周期的改变量与log[VC]呈良好的线性关系与，最低检测限为2.7*10-10mol/L，最低检测量为6.75*10-17mol。用微量葡萄糖-丙酮体系的B-Z化学振荡对碱性磷酸酶进行定量分析，当酶活度在1～32U/L时，振荡振幅的改变量与log[ALP]呈良好的线性关系，最低检测限为0.57U/L，最低检测量为1.425*10-7U。 将不同浓度的胰岛素与被碱性磷酸酶标记的抗体双抗体夹心法进行酶联免疫反应，用上述两种微量的B-Z振荡体系对其进行定量分析，最后实现对胰岛素的测定。结果表明，当胰岛素在0.5*10-9～1*10-7g/L范围内时，用苹果酸体系的微量B-Z化学振荡对胰岛素进项检测，振荡振幅的改变量与log[INS]呈良好的线性关系，最低检测限为2.35*10-10gl/L(3δ)，最低检测量为5.875*10-17g；用葡萄糖-丙酮体系的B-Z化学振荡检测时，振荡振幅的改变量与log[INS]呈良好的线性关系，最低检测限为1.85*10-10g/L(3δ)，最低检测量为4.625*10-17g。 不同浓度的胰岛素通过亲和素-生物素与被碱性磷酸酶标记抗体的进行双抗体夹心法酶联免疫反应，通过这两种微量的B-Z化学振荡对其免疫生物进行测定，实现对胰岛素的定量检测。结果表明，当胰岛素在0.5*10-9～1*10-7g/L范围内时，用苹果酸体系的B-Z化学振荡检测胰岛素时，振荡振幅的改变量与log[INS]呈良好的线性关系，最低检测限为2.00*10-10g/L(3δ)，最低检测量为5.0*10-17g；用葡萄糖-丙酮体系的B-Z化学振荡检测胰岛素时，振荡振幅的改变量与log[INS]呈良好的线性关系，最低检测限为1.90*10-10g/L(3δ)，最低检测量为4.75*10-17g。 本论文的意义，首先是建立了两种不同体系的微量（总体积为1ml）B-Z化学振荡，这样就比常量将常量(总体积为40ml)的B-Z振荡检测的灵敏度提高了40倍，这就为微量物质的检测扩展了范围；其次，本论文采用微量的B-Z化学振荡对酶联免疫分析中胰岛素进行定量分析，形成一种新的检测免疫产物的方法，这将为酶联免疫分析技术注入了一股新的力量；最后，这种新型的酶联免疫检测方法不仅可以对胰岛素的浓度进行，而且为其它抗原抗体的测定方法扩展了研究领域。

【学位授予单位】：华东交通大学
【学位授予年份】：2014


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【摘要】： 背景与目的 卵巢癌发病率位居女性生殖器官恶性肿瘤第三位,但其病死率却位居各类妇科肿瘤的首位,据统计,70%的患者直到晚期才被诊断,对广大妇女的生命健康造成了严重威胁。原因是卵巢恶性肿瘤由于位置较深而难以做到在早期发现、诊断、治疗。近年来有关抑癌基因发生甲基化和杂合性缺失的诸多研究结果提示这两种机制在恶性肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用,可能为将来恶性肿瘤的诊治提供新的思路、方法。 TES是一个新型抑癌基因,位于人类染色体7q31.2上的FRA7G脆性位点,在上皮来源的肿瘤中行使抑癌基因的功能。TES基因在卵巢中的作用尚未见报道。本实验拟通过检测卵巢癌组织中TES基因启动子区域甲基化和杂合性缺失的情况,分析两者与TES基因表达的关系,以求进一步证实TES基因的抑癌功能,为卵巢癌的防治提供新的靶标。 方法 应用免疫组织化学方法,研究卵巢癌组织中TES蛋白的表达水平；应用甲基化特异性聚合酶链反应检测卵巢癌中TES基因启动子区域的甲基化状态,并分析启动子甲基化状态与该基因表达的关系；应用聚合酶链反应和变性聚丙烯酰胺凝胶技术检测卵巢癌组织中杂合性缺失情况,并分析TES杂合性缺失与TES基因表达之间的关系； 结果 免疫组织化学染色结果显示：卵巢癌组织中TES蛋白表达阳性率为43.9%(18／41)； 36.5%(15／41)的卵巢癌组织中检测到了TES基因启动子区域甲基化,经统计学分析表明TES蛋白表达水平与其发生启动子区域甲基化有关(p=0.001)； 我们检测到34.6%(9／26)的卵巢癌组织发生了杂合性缺失,与TES蛋白表达有相关性(p=0.037)； 结论 1.卵巢癌组织中TES基因表达水平明显降低； 2.TES基因启动子区域发生甲基化与杂合性缺失是其在卵巢癌中低表达的两个机制；

【学位授予单位】：山东大学
【学位授予年份】：2010

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【摘要】：随着经济的迅猛发展，纺织印染行业排放的染料废水和工业生产产生的重金属污染已经成为水体污染的主要来源。为了有效的解决染料废水和重金属对水体造成严重污染问题，研发一种水处理材料对于水资源的保护和水污染的治理具有重要的意义。α-Fe2O3是最稳定的铁氧化物，在水处理方面有潜在的应用，α-Fe2O3纳米材料的吸附能力主要是由于其高表面积和多孔结构。因此，制备不同形貌和高比表面积的α-Fe2O3引起人们的广泛关注。 本课题首先采用高温液相法，通过不同反应体系获得三维微纳米氧化铁。然后，将其应用于水污染处理实验，考查其对铬离子和刚果红染料的吸附性能。 （1）采用操作简单、经济环保的实验方法，在乙二醇溶剂内，2mL乙二胺为碱源，回流30min，获得尺寸约为1.5μm的花形α-Fe2O3。通过变量实验确定了产物形貌的主要影响因素是乙二胺用量、乙二醇用量和回流时间，此外得出了三维花形形貌的可能生长机制。在水处理实验中，花形α-Fe2O3对刚果红和Cr(VI)的最大吸附量达到212和14.7mg/g。将不同制备条件所得样品进行刚果红染料吸附对比，饱和吸附量分别达到为188、191.2、107.6和210.1mg/g。 （2）在2.5g表面活性剂PV P辅助下，2.7g尿素为碱源，回流6h，获得由多孔纳米片组装形成的、尺寸2-3μm的、新颖的花形α-Fe2O3。通过变量实验得出，产物形貌非常依赖PVP用量和回流时间。由于新颖花形α-Fe2O3的高表面积和多孔结构，其对刚果红和Cr(VI)的最大吸附量高到628.9和25.1mg/g。此外，两种吸附等温线符合Langmuir吸附模型。

【学位授予单位】：中北大学
【学位授予年份】：2015


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