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细胞是污染了？还是太满了？
作者 yexswt
新人，求助！
这是我养的NCCIT（人杂交瘤细胞），昨天的时候已经长满了，但没进行任何处理，培养液透明，不浑浊，酸度也没有什么问题，长势很好。
但是今天突然就在培养基中出现了漂浮的白色团块，看着较光滑，也没有其他的情况，培养液也还是透明的。镜下观察就是图中显示的那样，一大团的，看不清有没有结构！
都不知道是怎么回事？求教，是污染了吗？还是说细胞长太快凋亡皱缩了？如果是污染，有人知道是什么类型的污染吗？
看这个样子不太像是污染，可能是细胞裂解了吧
看不清你的图， 培养基颜色正常，应该不是细菌污染的，照你描述的估计是细胞密度太大了。不清楚为什么是白色的团，我养的杂交瘤要是密度太大也会漂起来，死了的话应该是黑色的，我感觉呀。传代换液，看看细胞怎么样。
对了，你养的人的杂交瘤，形态是什么样的，是不是也是半贴壁，贴壁的时候还是圆的吗？
引用回帖:: Originally posted by 黄亚杰2013 at
看不清你的图， 培养基颜色正常，应该不是细菌污染的，照你描述的估计是细胞密度太大了。不清楚为什么是白色的团，我养的杂交瘤要是密度太大也会漂起来，死了的话应该是黑色的，我感觉呀。传代换液，看看细胞怎么样 ... 之前我也遇到过细胞长满了，换液的时候整片飘起来！应该是这个细胞本身很容易整片掉下来！贴壁的时候还是长梭型的，跟其他细胞区别不大。是贴壁细胞，不是半贴壁半悬浮的！
出现白色团块，同学有说可能是密度态度凋亡皱的缩，也有可能是无菌丝的真菌污染，就不知道是那种了，
引用回帖:: Originally posted by 黄亚杰2013 at
看不清你的图， 培养基颜色正常，应该不是细菌污染的，照你描述的估计是细胞密度太大了。不清楚为什么是白色的团，我养的杂交瘤要是密度太大也会漂起来，死了的话应该是黑色的，我感觉呀。传代换液，看看细胞怎么样 ... 不好意思，我才发现我自己写成了杂交瘤细胞，这其实是NCCIT（人畸胎瘤细胞）！人杂交瘤细胞我也养过，确实是半悬浮半贴壁状态的！
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###关于细胞的污染问题###
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最近有很多战友求助细胞污染的问题，“我的细胞是怎么了？”“大神，看看我这是什么污染”。大多数细胞污染不外乎细菌、真菌、支原体、病毒、“传说中的黑胶虫”（这个东西有点玄乎）
由于体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而在培养基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。一般在细胞受到污染早期或污染较轻时，能及时处理并除去污染物，部分细胞还有可能得到挽救。但当细胞持续在污染环境中生长时，轻者细胞生长缓慢，分裂相减少，细胞变得粗糙，轮廓增强，胞浆中出现较多的颗粒物质；较重的细胞增殖停止，分裂相消失，细胞质中出现大量堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。不同的微生物污染物对细胞的影响也有差别，微生物中支原体和病毒对细胞形态和技能的影响是长期的，缓慢的和潜在的。而霉菌和细菌增殖迅速，能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质杀灭细胞。
一般来说，高浓度的抗生素和抗霉菌素都可能对细胞或细胞系有毒性作用，对于想要处理污染的细胞，更多应该想想怎么预防！拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼，培养箱定期消毒加无菌水，个人卫生，环境卫生等等，都很重要。
从园子扒点图片，涉及版权的战友本人可以给转点叮当补偿。：）
细菌污染：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理。（如图）
霉菌污染：霉菌培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度培养箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2培养箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-90度灭菌。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，将环境彻底消毒，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。真菌污染：真菌一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。白色念珠菌黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。（黑胶虫的分类，学术界没有明确给予说法。关于黑胶虫的分类，目前大部分人认为黑胶虫污染是微生物感染。在一些文章论述上把黑胶虫归为生物污染类型，但是没把它归为确定的生物分类类型，只是把黑胶虫独立为一种未知生物。网上有一篇文章说，黑胶虫其实不是一种生物，是无机物，其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒。可影响细胞生长，细胞状态好时，不明显。细胞状态较差，数量少时才容易看到，最好的办法是用一次性培养瓶，可消除黑胶虫影响。这种问题，专家都没确定，想仔细了解的同学请百度）
支原体和病毒，光学显微镜是看不到的，电子显微镜是可以？（没用过电子显微镜） 可以用试剂盒检测，试剂盒问题自行解决。
支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，支原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。电镜照片支原体污染电镜照片(X30k),煎蛋状
想要不污染怎么办？预防！细胞真的污染了怎么办？丢掉！因为一个细胞把其他的细胞都给污染了就得不偿失了。。。（个人建议）
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cell培养新手 编辑于
常见的污染也就这样了，最近有些这样的污染可能用显微镜观察细胞时，对焦不是在细胞层面上，有可能是培养板的底部。用粗准焦螺旋大概确定细胞位置，再用细准焦螺旋调清细胞观察形态，密度
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还有一些这种的，长条状，在细胞层面上，不影响细胞状态。也有其他的颜色的，这种有可能就是衣服的纤维，棉絮，酒精灯芯的飞灰，头发都有可能。
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学习了。无菌很重要！
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关于丁香园防治细胞污染的一些心得_细胞吧_百度贴吧
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防治细胞污染的一些心得收藏
无论新人还是熟手，细胞污染都是必须要面对的，那对于细胞污染，我觉得最好的措施就是预防为主，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，污染严重的话即便救活，细胞状态也会差很多。所以我先来说下我是怎么预防细胞污染的。生物安全柜是处理细胞的主要场所，也是细胞发生污染的主要场所，所以安全柜的正确使用是预防细胞污染的第一步。首先，所有进入安全柜的东西在进入前都要用75%的酒精消毒。实验耗材尽量放置在合适的容器内用报纸包好后灭菌，如枪头插入枪头盒，其他不规则的耗材可放入铝制饭盒内。枪头插入枪头盒时要带手套，因为灭菌可能无法去除枪头上可能粘附的油脂或其他杂质。再次，由于使用安全柜的过程中手和前臂都是要进入安全柜的，所以有条件的战友应该准备至少一件细胞房专用连体洁净服（装入布袋消毒后烘干，在细胞房中取出，非更换前不得穿出细胞房），没有条件的战友则至少准备一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。细胞培养离不开各种试剂，诸如培养基、血清等，所以预防细胞污染的第二步就是正确处理和使用这些试剂。如果实验室条件允许，那么最保险的莫过于直接都买商业化试剂，例如比较知名的Gibco、Hyclone、ScienCell等，这些品牌的试剂只要是正品，品质都没有问题。当然对于一些学校，特别是条件相对艰苦的实验室，可能需要自己买干粉配制，那么在试剂配制中的无菌操作就格外重要。另外建议每次试剂配制量不宜过多，比如培养基以1-2周内用完为宜，另分装成小瓶时可考虑再用针头滤器过滤一次，减少细菌污染的可能性。在准备工作一切就绪后，细胞的处理过程也是大家需要注意的。细胞处理前应将当次实验需要的各种试剂、耗材准备齐备，尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜使用前最好紫外照射30min灭菌，然后通风5min保证换气到位。实验过程中，所有试剂最好不用就盖上瓶盖，如果需要打开瓶盖，则除了干净的枪头，其他任何东西都不要从瓶口的正上方经过，防止试剂污染。细胞培养若使用培养皿，则最好不要长时间打开皿盖。另外移液器也是细胞污染的一个隐藏途径，特别是使用无滤芯枪头的战友，在吸取试剂时，很容易不小心将试剂倒吸入移液器，如果发生这种情况，要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂，特别是培养基，极易成为细菌生长的温床。一把污染的移液器可以轻松污染战友的所有细胞，甚至整个实验室的细胞，所以友情推荐有条件的战友在处理细胞时一定要使用带滤芯的枪头。当然即便是使用带滤芯的枪头，也要尽量避免试剂倒吸，因为想要彻底去除倒吸入移液器的试剂非常困难。培养箱作为细胞培养的场所，也需要战友留心。由于培养箱内的温度和湿度很高，是很适宜细菌生长的，所以如果有条件（实验室有2个或以上培养箱），最好定期用75%酒精擦拭培养箱，及时定期更换培养箱内水槽。那么细胞如果还是不幸污染了，那又该怎么办呢？我把细胞污染分为早期和晚期两种。早期污染是细胞状态变差，但依旧能保持生长，显微镜下（光镜）不可见明显微生物或可见少量微生物，这时候我们在换液时建议多用PBS洗几次，然后用双抗原液侵润细胞1-2min，吸去，再加入正常培养基。早期污染只要发现及时，处理得当，救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细胞形态发生明显改变，细胞停止生长，显微镜下可见明显微生物。这时候我建议大家及时清理掉相关细胞，以免污染其他细胞，重新复苏更早批次的细胞。所以大家会发现，新细胞收到后，不应急于开展实验，而应该先小心培养，冻存1到2个批次的早期细胞，然后再开展实验，这样实验细胞一旦出现问题，可以有库存细胞保证实验还能继续进行。 以上是我对防治细胞污染的一些心得，大家如果觉得不错，就给个赞吧，谢谢！ 中洪博元生物技术有限公司协助广大医务人员实验设计评估整体课题外包，其中包括细胞学技术，蛋白学技术、基因学技术、组织学技术、病毒学微生物服务动物实验等。 联系电话：
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