11-12-8 12:28
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通过配制MS母液，掌握贮备液的配制和保存方法。
配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选取培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存 ，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒， 电炉，微波炉
　　NH4NO3,
MnSO4.4H2O,
ZnSO4.7H2O,
CaCl2.2H2O,
Na2MoO4.2H2O,
MgSO4.7H2O,
CuSO4.5H2O,
CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2?EDTA?2H2O，KI,
FeSO4.7H2O，烟酸， 甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇,
⑴MS大量元素母液的配制
　　配制时先用量筒量取蒸馏水大约800ml，放入1000ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
　　⑵MS微量元素母液的配制
　　按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4 ?4H2O， ZnSO4?7H2O ，H2BO3 ，KI ，NaMoO4?2H2O， CuSO4?5H2O， CoCl2?6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
　　⑶MS铁盐母液配制
　　把FeSO4?7H2O和 Na2?EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解，然后将2种溶液混合，把pH值调到5.5，加蒸馏水到终极容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1－2min，在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
　　⑷MS有机化合物母液的配制
　　按配方表中用量依次称取：维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
　　⑸植物生长物质母液的配制
　　2，4-D母液：准确称量后先用少量（1-3ml）95%乙醇完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
　　MS培养基母液配方
　　数量(mg/L) 成分
数量(mg/L) 贮备液Ⅰ
NH4NO3 33000 KI 166 KNO3 3 1240 CaCL2 ? 2H2O 8800 MnSO4 ?4H2O 4460 MgSO4?7H2O 7400 ZnSO4?7H2O 1720 KH2PO4 3400 Na·MoO4?2H2O 50 贮备液Ⅳ
CuSO4?5H2O 5 烟酸
100 CoCl2?6H2O 5 维生素B6 100 贮备液Ⅲ
维生素B1 100 FeSO4?7H2O 5560 甘氨酸
400 Na2?EDTA?2H2O 7460 肌醇
实验二、培养基的配制与灭菌
　　学习用母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法。
　　组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
实验仪器设备和试剂
　　天平，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，移液管（10ml，5ml，2ml，1ml，0.5ml），药勺，称量纸，玻璃棒，吸耳球，酸度计或试纸，培养瓶，封口膜，耐热橡皮筋，线绳，高压灭菌锅，滴瓶
　　琼脂，蔗糖，蒸馏水，2，4-D，1mol/LHCl，1mol/LNaOH 实验步骤
　　⑴培养基的配制
　　每组配制培养基500ml，培养基组成为：MS+0.05mg/L 2,4-D+2%蔗糖+0.7%琼脂(pH5.8)
　　①将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。
　　本实验需配制的培养基所需吸取的各种母液的用量如表1所示：
　　母液浓度
500培养基吸取量
20 25 微量元素
②取50ml烧杯一个，用25ml量筒取大量元素母液25ml，然后用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，有机母液、铁盐母液和2，4-D母液，置于烧杯中备用。
　　③取500ml烧杯一个，加入300ml蒸馏水，称量琼脂3.5g倒入烧杯中，将烧杯置于电炉上或微波炉内煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g蔗糖，充分溶解后，将准备好的大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素母液混合液倒入烧杯中，用蒸馏水将装过母液混合液的烧杯洗三遍，一并倒入500ml烧杯中，并加蒸馏水定容。
　　④充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为5.8。
　　⑤把培养基分装到广口瓶中，每瓶约50ml。用封口膜封好瓶口。贴上标签，注明培养基名称，配制者姓名和配制日期，待灭菌。
　　⑵培养基灭菌
　　①检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。把分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内。盖上锅盖，上好螺栓后接通电源加热。
　　②排放冷空气，关闭放气阀，当灭菌锅盖上的压力表指针移至0.1Mpa(121℃)，控制电源，使压力表稳定在该压力下15分钟，即达到灭菌目的。
　　③灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。
　　④刚灭过菌的培养基应在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长的方可使用。
　　要求：每人准备培养基2瓶。
　　提前准备实验三所需的无菌材料。
　　稀酸和稀碱的配制方法
　　1mol/LHCl 　　取浓盐酸8.25ml，加蒸馏水至100ml，即为1mol/LHCl。
　　1mol/LNaOH 　　称取氢氧化钠4g，加入蒸馏水100ml，即为1mol/LNaOH。
实验三、植物组织无菌培养的一般步骤---胡萝卜愈伤组织的诱导
　　一、实验目的
　　培养材料的灭菌与接种是组织培养过程中一个很重要的环节。通过以胡萝卜根组织为外植体进行组培，领会无菌培养对试验材料消毒、接种的要求，初步掌握植物材料消毒、接种的无菌操作技术以及外植体愈伤组织诱导的方法。
　　植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至是细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织。
　　三、材料、试剂和用具
　　材料：直根胡萝卜
　　培养基：MS+0.05mg/L 2,4-D 　　用具：
　　无菌器材：
　　20张吸水纸
　　2个不锈钢托碟，2套直径90mm的培养皿
　　1升无菌水 　　大号、中号、小号镊子各2把
　　2把解剖刀
　　1个打孔器
　　2个500ml烧杯
　　非无菌材料：
　　大约20%（体积比）浓度的次氯酸钠的消毒液1L
　　玻璃烧杯（1000ml）或搪瓷缸(装废液用) 　　1个500ml消毒缸
　　1台酒精灯及火机
　　1个锥形瓶（150ml），内装95%酒精100ml 　　1个广口瓶(500ml)，内装75%酒精及棉球
　　橡皮筋若干
　　标签纸、记号笔、1把大号镊子
　　四、实验步骤
接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种间紫外灯，照射约30，然后关闭紫外灯，透风20后，打开日光灯即可进行无菌操作。
　　先将胡萝卜根用流动的自来水冲洗干净，切成大约100mm长的片段放进500ml有盖消毒缸中，倒入次氯酸钠的消毒液将植物材料淹没浸泡约30分钟。
　　灭菌过程中在每个培养瓶上标记培养基名称、培养日期。
　　把灭了菌的胡萝卜转移到无菌室。用无菌水将胡萝卜洗3次，每次2分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除往次氯酸钠，并用吸水纸吸干。
　　取1条胡萝卜，在无菌托碟上从两端各切往20mm，用解剖刀将余下的根切成一系列5mm厚的横切片，将每一切片转移到无菌培养皿中，通过形成层用打孔器切成小圆柱，这样每块外植体都包含韧皮部、形成层和木质部三部分。重复这一程序直到为实验积累了足够数量的外植体。
　　取下培养瓶的封口膜，用火烧灼瓶口。用镊子转移5块外植体插入到琼脂上。注意将近根尖的一面接触培养基。立即用封口膜封好瓶口。
　　在对植物材料进行消毒处理的同时，对所要使用的器械进行消毒，方法是把它们浸入95%酒精中，取出后再置酒精灯火焰上灼烧，待冷却后即可使用。所有操作器械往往需要在每次使用后消毒一次。
　　将培养瓶放到培养架上，在25℃下的黑暗中培养6－8周，获得充分生长的愈伤组织。
　　实验报告：接种2-6天后观察污染情况，计算污染率。每周观察并记录胡萝卜外植体产生愈伤组织的情况，包括出现愈伤组织前培养物形态的变化，愈伤组织出现的时间以及愈伤组织的形态特征（愈伤组织的颜色、质地等），计算愈伤组织诱导率。
　　污染率=污染的材料数/总接种材料数×100% 　　诱导率=形成愈伤组织的材料数/总接种材料数×100% 实验四、愈伤组织的器官分化
　　通过实验，掌握运用植物生长调节物质调控植物愈伤组织分化的方法。
　　离体的植物组织在一定条件下，可发生“脱分化”，即已经分化了的植物细胞重新分裂生长，形成均一的无组织结构的细胞团，即愈伤组织。这种愈伤组织在一定条件下，又能“再分化”出根和芽等器官。在该过程中，植物生长调节物质起着决定作用，调控着愈伤组织的芽或根的分化。
实验材料、试剂和用具
　　材料：实验3获得的胡萝卜块根愈伤组织
　　试剂：NAA、6-BA、琼脂、蔗糖
　　器具：
　　无菌：镊子、解剖刀、无菌纸、无菌培养皿
　　非无菌：超净工作台、酒精灯
　　⑴愈伤组织芽或根分化培养基的配制
　　首先按实验2的方法，制备下列供胡萝卜块根愈伤组织芽分化的培养基：MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L，MS+6-BA1.0mg/L；胡萝卜愈伤组织根分化培养基：MS+NAA0.5mg/L。
　　⑵转接
　　在超净工作台上，将实验3所获得的胡萝卜块根愈伤组织，分别转入愈伤组织芽分化培养基和根分化培养基中，并置于26℃、在2000lx、每天14h光照下培养，并逐日观察记录胡萝卜块根愈伤组织的形态变化，并在3-4周后统计愈伤组织的幼芽或幼根的分化率。
　　观察并记录胡萝卜块根愈伤组织在根分化培养基上培养10-15天后的不定根发生情况，并计算生根率；观察并记录胡萝卜块根愈伤组织在芽分化培养基上培养3-4周后的生长和幼芽分化状况，并计算愈伤组织的幼芽分化率。
　　生根率=生根愈伤组织块数/接种愈伤组织总块数×100% 　　幼芽分化率=生芽愈伤组织块数/接种愈伤组织总块数×100% 植物组织培养实习
实习目的意义
　　营养繁殖可获得在遗传上与其亲本植株完全相同的后代，从而使品种的特性代代相传。植物组织培养作为植物营养繁殖的一个新手段，与常规方法相比其最显著的优点是：可以用较短的时间和较少的空间，由一个个体开始产生大量的植株。植物组织培养既是一门科学，又是一门技术。作为科学，它以植物学、植物生理学、遗传学为理论基础，研究植物在离体条件下的建成、营养生理、体细胞遗传等规律。作为一门技术，它既是植物细胞工程和基因工程的技术基础，又是植物快速无性繁殖的重要技术。
　　影响组织培养的因素很多，既有内因，也有外因。就内因来说，主要是植物自身生长、发育与繁殖的特点。一般植物都具有扦插生根、根蘖出芽等营养繁殖的能力，但不同植物的难易程度不同，对环境条件的要求也不同。对于能否生根、生根难易等植物自身的内因来说，我们在组培过程中是无法改变的；组培研究的主要目的是找出最有利的环境条件。
　　首先要确定的是外植体。查阅相关参考资料后，结合实际确定外植体的种类和性质。
　　有了合适的外植体，一般按下列步骤筛选培养条件。
　　⑴生长素和细胞分裂素 生长素一般采用IAA、NAA、IBA，细胞分裂素一般采用BA、KT、ZT，浓度范围均为0.5-2.0毫克MM升
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组培实验室设计及基本设备
组培实验室的组成及其功能准备室（基本操作实验室）基本功能常用仪器和设备
无菌操作室⒈功能⒉组成缓冲室（间）：接种室（间）：⒊无菌操作室的消毒⒋主要设备超净工作台金属器械消毒器培养室功能主要设备环境条件温室功能组培实验室的布局1 布局基本要求
便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。
2 基本布局规律根据实验操作程序排列实验室；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；灭菌室与接种室相邻；其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。
设计组培实验室时的注意事项为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；
无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。
组培实验室的基本设备器皿和器械类⒈玻璃器皿
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体视显微镜普通光学显微镜
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植物组织培养室规划设计方案二
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二、实验室组成
（一）基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万，需3-4间实验用房，总面积60平方米。
1、准备室（化学实验室）功能：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。 分类： 分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。 通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计，从而减少规模化生产的人工劳 动，更便 于无菌条件的控制和标准化操作体系的建立。 设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。
2、洗涤灭菌室功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还 应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并 排水良好。 设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。
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接种室要求在适当位置吊装 1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理，处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期灭菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周，或每次使用前照射10-30min。 设备：紫外灯、空调、解剖镜、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针），实验台、和搁架，还有超净工作台和整套灭菌接种仪器、药品等。
4、培养室 功能：对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养，无论是研究性实验室还是生产性实验材料进行培养的场所。要求：约需 10-20平方米左 右，培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。基本要求是能够控制光照和温度，并保持相对的无菌环境，因此，培养室应保持清洁和适度干燥；为满足植物培养材料生长对气体的需要，还应安装排风窗和换气扇等培养室的换气装置；为节省能源和空间，应 配置适宜的培养架，并安装日光灯照明。 研究用实验室，通常可根据光照时间设置成长日照、中日照、短日照培养室，也可以根据温度设置成高温和低温培养室，每一个培养室的空间不宜过大，便于对条件的均匀控制。进行精细培养类型如细胞培养和原生质体培养，可采用光照培养箱或人工气候箱代替培养室。
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高 1．7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长I．3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。日光灯一般用40W，固 定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为lx。 培养室最重要的因子是温度，一般保持在20—27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，也有的 需要连续照明。短日照植物需要短日照条件，长日照植物需要长日照条件。
现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、转床、自动控时器、紫外灯、光照培养箱或人工气候箱、生化培养箱、边台实验台用于拍摄培养物生长状况，除湿机、显微镜、温湿度计、空调等。
5、缓冲间 功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩，才能进入无菌室和培养室。 进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。要求：缓冲间需3-5平方米，可建在准备室外或无菌操作室外，应保持清洁无菌；备有鞋架和衣帽挂钩，并有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服；墙顶用1-2盏紫外灯定时照射，对衣物进行灭菌。 缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。设备：1-2盏紫外灯、水槽、实验台、鞋帽架、柜子、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩。
（二）辅助实验室 根据研究或生产的需要而配套设置的专门实验室，主要用于细胞学观察和生理生化分析等。
1、细胞学实验室 功能：用于对培养物的观察分析与培养物的计数，对培养材料进行细胞学鉴定和研究，由制片室和显微观察室组成。制片是获取显微观察数据的基础，配备有切片机、磨刀机、温箱及样品处理和切片染色的设备。应有通风橱和废液处理设施。显微观察室主要是显微镜和图像拍摄、处理设备。 要求：明亮、清洁、干燥、防止潮湿和灰尘污染。 设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。
2、生化分析实验室 功能：培养细胞产物为主要目的的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时对培养物成分进行取样检查。大型次生代谢物生产，还需有效分离实验室。
三、仪器设备和器皿用具
一、基本设备配置
（一）常规设备
1、天平 组织培养实验室需要2-3台不同精度的天平。 感量0.001g的天平（分析天平）和感量0.0001g的天平（电子天平）用于称量微量元素和一些较高精确度的实验用品。 感量0.01g和0.1g的天平，用于大量元素母液配制和一些用量较大的药品的称量。
2、冰箱 各种维生素和激素类药品以及培养基母液均需低温报存，某些试验还需植物材料进行低温处理，一般普通冰箱即可。
3、酸度计 用于测定培养基及其它溶液的pH，一般要求可测定pH范围1-14之间，精度0.01即可。
4、离心机 用于细胞、原生质体等活细胞分离，亦用于培养细胞的细胞器、核酸以及蛋白质的分离提取。根据分离物质不同配置不同类型的离心机。 细胞、原生质体等活细胞的分离用低速离心机；核酸、蛋白质分离用高速冷冻离心机；规模化生产次生产物，还需选择大型离心分离系统。
5、加热器 用于培养基的配制。研究性实验室一般选用带磁力搅拌功能的加热器，规模化大型实验室用大功率加热和电动搅拌系统。
6、其它 纯水器、分装设备
（二）灭菌设备 维持相对得无菌环境是组织培养实验室的基本要求。
1、高压灭菌锅 用于培养基、玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌，根据规模大小有手提式、立式、卧式等不同规格。
2、干热消毒柜 用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀，以及玻璃器皿的灭菌。一般选用200℃左右的普通或远红外消毒柜。
3、过滤灭菌器 用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压灭菌试剂的灭菌，主要有真空抽滤式和注射器式。
4、紫外灯 方便经济的控制无菌环境的装置，缓冲间、接种室和培养室必备。
（三）无菌操作设备
1、接种箱 是使用较早的最简单的无菌装置，主体为玻璃箱罩、入口有袖罩，内装紫外灯和日光灯，使用时对无菌室要求较高。
2、净化工作台 其操作台面是半开放区，具方便、操作舒适优点，通过过滤的空气连续不断吹出，大于0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留，保持了较好的无菌环境。由于过滤器吸附微生物，使用一段时间后过滤网易堵塞，因此应定期更换。
（四）培养设备 培养设备是指根据需要所选用的不同规格和控制精度的用于植物细胞、组织和器官培养的设施和设备。
1、培养架 目前所有植物组织培养实验室植株繁殖培养的通用设施。成本低、设计灵活、可充分利用培养空间，以操作方便、最大限度利用培养空间为原则。一般有4-5层，层间间隔40-50cm，光照强度可根据培养植物特性来确定，一般每架上配备2-4盏日光灯。
2、培养箱 细胞培养、原生质体培养等要求精确培养的实验，可用光照培养箱、CO2培养箱、湿度控制培养箱等培养。
3、摇床 进行液体培养时，为改善通气状况，可用振荡培养箱或摇床。
4、生物反应器 进行植物细胞生产次生产物的实验室，还需生物反应器。
（五）其他设备 可安装时间程序控制器、温度控制系统或空调；实体显微镜、倒置式生物显微镜及配套的摄影、录像和图像处理设备；电泳仪、萃取和层析设备、紫外分光光度计、高效液相色谱仪、气相色谱仪、酶联免疫测定系统。
四、培养容器与用具 培养容器指盛有培养基并提供培养物生长空间的无菌置，培养用具指培养物接种封口所用的各种金属或塑料制品，实验室必备。
（一）培养容器 包括各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。玻璃容器，一般用无色并不产生颜色折射的硼硅酸盐玻璃材质。塑料容器材质轻、不易破碎、制作方便，广泛使用。一般为聚丙烯、聚碳酸酯材料的培养容器。
（二）金属用具
1、镊子 植物组织解剖用小的尖头镊子，分株转移繁殖转接用枪型镊子，16-22cm长。
2、剪刀 不锈钢医用弯头剪，做取材和切段转移繁殖，14-22cm。
3、解剖刀 组织切段，多用短柄可换刀片的医用不锈钢解剖刀。
4、其他用具 接种铲、接种针在花药培养、花粉培养中有用。
（三）塑料用具 各种风口膜、盖、塑料盘及其它实验用具。
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