转染慢病毒转染细胞原理后的细胞能使用多久

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-04-10 16:56 标签： 腺病毒转染细胞步骤
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标题: 请教慢病毒转染的 一些问题
摘要: [请教慢病毒转染的 一些问题] 我最近在做慢病毒转染，96孔里转染后的细胞死的很多，而且都是孔中间死的很多，周围一圈细胞死的少，这是为什么呢？我加病毒液时是沿着侧壁打下去的……麻烦大家帮我分析下，你们是不是也有这种情况 关键词:[病毒 转染 侧壁 细胞密度 病毒液 滴度 梯度]……
我最近在做慢病毒转染，96孔里转染后的细胞死的很多，而且都是孔中间死的很多，周围一圈细胞死的少，这是为什么呢？我加病毒液时是沿着侧壁打下去的……麻烦大家帮我分析下，你们是不是也有这种情况回复细胞密度，你96孔板细胞均匀吗？回复挺均匀的啊，细胞密度大约为50%回复不知道你转染96孔板的目的是什么，是测滴度吗？如果只是检测转染效率，可以换成24孔板或12孔板，96孔太小了，细胞不容易铺匀！回复您的慢病毒是自己包的还是找公司包装的？病毒感染对细胞是有影响的，会造成细胞的死亡，您为什么要沿着侧壁加呢，这样的话病毒在96空中不就不均匀了吗？回复我用96孔板是测MOI值，要分很多组，设不同梯度，所以用96孔板可以省病毒，不然用不了几次就没了……种的细胞还挺均匀啊……我是先在EP管里混匀病毒和培养基以及polybrene后再沿侧壁加进去的，我怕直接打进去把贴壁细胞吹起来回复是公司给我包好的病毒
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大家知道慢病毒是复制缺陷性病毒，那慢病毒感染细胞后会不会随着传代而复制？0 G: D- q" S9 b" f
如果不会，随着细胞的传代，慢病毒阳性的细胞是不是越来越少？
最近看到有些文献报道说筛选建立慢病毒阳性细胞系，我感到很疑惑，所以在此问一问高人，请指点一下，谢谢了！
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慢病毒感染目的细胞几小时后就死掉了，由于其嵌入宿主细胞基因组的能力非常强大，所以慢病毒感染后类似稳定转染，但如果你转染的基因是抑制增殖的，随着细胞传代的增加，转染阳性的细胞由于增殖能力低下会被增殖快的未转染细胞给稀释掉。所以在ips的诱导中，慢病毒质粒也标记了抗性基因G418，达到稳定转染的效果。
注：慢病毒一般称为转导细胞，质粒脂质体为转染，上文中用转染系顺口言之，写文章时一定要写成转导。
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& & 多谢这位高人的指点！
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本帖最后由 sidalin301 于
21:23 编辑
& e' J8 j&&g1 u. _/ ~
jiays 7 B&&b1 \9 t3 ?0 F
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再请教一个问题，在测定慢病毒的滴度时， 根据下面的计算公式来看，每一个GFP+ cell里面是不是就只有一个慢病毒？会不会有2个或更多？如果是这样那这个计算公式- X+ p+ l# r4 e! f8 R
是不是就有误差？
有一个公式“TU/&l= (P × N / 100 × V) × 1/DF, where P = % GFP+ cells, N = number of cells at time of transduction , V = volume of dilution added to each well and DF = dilution factor ”。
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我的QQ，期待高人的指点！
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我们一般不测定病毒滴度，直接用包被了病毒的293T细胞的上清液（过滤除菌后）加入到要转染的目的细胞培养基中（1：1----1：3），6h后换液，24h后观察目的细胞的GFP强度，达到90%以上，即认为病毒包被成功。
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& & 感谢！
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慢病毒是随机整合到基因组中的，细胞分裂时会随着基因组的复制而复制，如果你的细胞是纯的即感染效率100%，理论上不会随着传代而慢慢减少，但如果不纯，被感染的增值较慢，是有可能越来越少的。
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学习学习····
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慢病毒转染后细胞慢慢死掉
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各位大神，本人用慢病毒自己包装了plko.1的空载体及其sh的病毒，感染后状态还好，没筛选，培养4天左右就发现空载体的细胞状态还挺好干扰了促癌基因的sh组细胞状态就会慢慢变差，最后甚至完全死掉求大神分析一下原因，为啥呢。。
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有无可能你的靶基因是维持细胞生命的，或者shRNA脱靶了
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有可能是密度问题或者过感。
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Fubio-GG 有可能是密度问题或者过感。请问您知不知道293t包装出的慢病毒滴度能有多少啊
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关于丁香园全部答案（共1个回答）
非增殖性细胞进行转染，比方说denditic cell等终末分化的细胞。曾经用过腺病毒载体Ad－easy。据观察细胞在体外4周可以稳定表达绿色荧光，而在体内用腺病毒感染的骨髓间充质干细胞也可以表达长达7周之久。感染细...
关于腺病毒的问题如下建议。腺病毒首先明确是一种瞬时转染的载体，它不整合到细胞的基因组内，也就不随着细胞的增殖分离而扩增。但是腺病毒比慢病毒和逆转录病毒最大的好处就是可以对一些非增殖性细胞进行转染，比方说denditic cell等终末分化的细胞。曾经用过腺病毒载体Ad－easy。据观察细胞在体外4周可以稳定表达绿色荧光，而在体内用腺病毒感染的骨髓间充质干细胞也可以表达长达7周之久。感染细胞的时候要摸索一个MOI，找到最适合的MOI是非常重要的。比方说用腺病毒感染骨髓间充质干细胞，找到的MOI为200，也就是说平均每个细胞内进入了200个病毒颗粒，而这些颗粒是无法自我复制的（因为是缺陷性病毒，其缺少E1），这就是说200MOI不会使细胞出现不好的反应，不会使细胞死亡，而又能达到最大的负载病毒数量。等细胞种到体内之后干细胞会自我增殖，那么我们假设7天增殖1代，那么1周后平均每个细胞内的MOI就是100。再过4周大约为20。当然在体内的增殖不像在体外那么快，这样我们在7周取出种植进去的细胞作组织切片观察荧光仍然能够观察到强烈的绿色荧光，说明7周这个时间是没有问题的。
答: 女贞、腊梅、银杏、紫荆、石楠、石榴、木槿、紫薇、玉兰、广玉兰。
除了以上植物之外，对其他植物都有害。
因为以上植物属于抗氨气树种
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答: 2008年4月在苏州举办第十八届中国园艺与盆景艺术培训
一、培训班由中国盆景艺术家协会、中国花卉盆景杂志社主办，苏州市盆景协会和苏州市虎丘山风景名胜区管理处承办...
答: 你好. 生物科学培养掌握生物科学的基本理论、基本知识和实验技能，能够在高等和中等学校进行教学和教学研究的教师及其他教育工作者，并输送部分研究生。
答: 看哪个专业了。毕竟是名校，所以生物教学质量也不错。举例说，微生物学山东大学、复旦、武大见长，细胞生物北大、山大、兰大见长。
相对来说，生物是它的软肋，但正在改善...
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