293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复
制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸
酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的
便捷方式。(许多真核如pcDNA3.1中含有病毒的复制起始位点，可以在表达病毒T抗原的中复制，从而提高的表达水平。&293T细胞就是一种表达病毒T抗原的，它来源于人胚胎293HEK，经改造后在其中插入了T抗原，因此用293T细胞做可以获得较高的表达水平。)
293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选的，不过它贴壁性差，容易脱落，不利于筛选。
是系，它具有明显的作用，所以易于识别已发生转化的细胞。
也用于包装病毒
形态特点:&上皮细胞&
致瘤性:&+&
产物或抗原:& 大T抗原&
染色体核型:&
亚三倍体人细胞系。染色体众数为64，30%的细胞有64&条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞&
der(1)t(1;15)&(q42;q13),&der(19)t(3;19)&(q12;q13),&der(12)t(8;12)&(q22;p13),还有四条标记染色体，&有的细胞另有5条标记染色体。der(1)与M8&(or&Xq+)常常成对出现。N17&与&N22各有四条。值得注意的是&多数细胞有三条X染色体，两条Xq+，一条Xp+。&
生长特性:&粘附&
文献评价:&
293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad&5)&DNA的永生化细胞。[RF32725]&表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]&
早期报道认为此细胞含有Ad&5基因组左端和右端[RF32764]，现已清楚仅含有左端序列。[RF50113]&
此细胞系人腺病毒滴度高。&
室温不贴壁，37℃几日后重新贴壁。&
表达由整合素beta-1&亚基与玻基结合素受体&alpha-v&亚基组成的玻基结合素细胞表面受体.&[RF33793]&The&Ad5&insert&was&cloned&and&sequenced,&and&it&was&determined&that&a&colinearseqment&from&nts&1&to&4344&is&integrated&into&chromosome&19&(19q13.2).
培养条件: ATCC培养基：90%的MEM&Eagle，加入2mM&L-谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，0.1&mM必需氨基酸，1.0&mM&丙酮酸钠；&10%加热灭活的马血清& 37℃培养&
传代: 293:弃培养基，含0.25%&胰酶,&0.03%&EDTA&消化液洗涤，弃去，加1-2ml消化液室温或37℃消化。&
加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。&
293T:生长快，通常倍增时间不到一天&。每3~4&天1：10至1：20稀释，5%&CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，&可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化
培养基更换: 每2-3天一次
冻存液: & 95%培养基；5%,DMSO；culture&medium&95%;&DMSO,&5%；
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【求助】293T细胞转染
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问题已解决悬赏丁当:2
最近再做慢病毒，有个问题想不通，在这里弱弱的问一下，为什么病毒先要去感染293T细胞产生病毒后再去感染目的细胞呢
不知道邀请谁？试试他们
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百度VS联通 编辑于
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1、第一次293T叫转染，其实是包被病毒的过程，第一次转染的时候只是几个质粒（一个主质粒，几个辅助质粒），其实它们不是病毒，需要转到293T中表达相应蛋白后进行包装才可以产生病毒，这个你好好了解一下病毒的结构和那几个病毒载体的组成就明白了。2、当转染主质粒和辅助质粒到293T细胞后，过段时间48-72h，就可以收集细胞培养上清，这里边就有病毒。3、这次你可以用这个病毒感染293T，这时候为了看看是不是真的产生病毒了，或者你的病毒滴度活力究竟如何，顺便也可以检测一下包装成病毒后你的目的物是不是表达了（确实有载体上表达但病毒不表达时候存在）。4、如果ok，你就可以用病毒感染你的目的细胞。如果不ok，要不浓缩病毒（或纯化），如果自身就没产生病毒，则寻找你质粒的问题，重新包被。
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百度VS联通 谢谢，那我可不可以直接转染我的目的细胞，这样有没有可能就直接把目的基因转到目的细胞，我觉得理论上应该可行吧理论上其实都是不可行的。如果你用自己的目的细胞包病毒，第一次产生病毒时候，其实细胞是要死掉才成把病毒释放出来的，这个时候你细胞就没了，然后你可以用这个病毒再感染你的目的细胞，这样就跟用293T类似了。但是，这里边一个效率问题，你的目的细胞能产生病毒也许效率非常非常低，另外，你的目的细胞可能是非常非常难以转染，所以才包病毒用（这是病毒的优点了）。所以，如果你的细胞很好转染【就是用转染试剂把质粒转到细胞中，效率就很高的话】，这时候你不用包病毒，用一些其它的真核载体，比如pcDNA3.1系列，转然后通过G418就可以筛出转基因的细胞，而不用病毒了。所以，你那质粒如果是病毒载体，没法直接转染，这个主质粒上一般是不带那个整合序列的，所以它不能实现基因组整合。293T是工程细胞，因为非常容易转染，所以采用它做包病毒的宿主细胞的。这个其实说白了就是真核细胞中的“大肠杆菌”，就跟你做原核时候用大肠杆菌做工程细胞一样的。
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1、第一次293T叫转染，其实是包被病毒的过程，第一次转染的时候只是几个质粒（一个主质粒，几个辅助质粒），其实它们不是病毒，需要转到293T中表达相应蛋白后进行包装才可以产生病毒，这个你好好了解一下病毒的结构和那几个病毒载体的组成就明白了。2、当转染主质粒和辅助质粒到293T细胞后，过段时间48-72h，就可以收集细胞培养上清，这里边就有病毒。3、这次你可以用这个病毒感染293T，这时候为了看看是不是真的产生病毒了，或者你的病毒滴度活力究竟如何，顺便也可以检测一下包装成病毒后你的目的物是不是表达了（确实有载体上表达但病毒不表达时候存在）。4、如果ok，你就可以用病毒感染你的目的细胞。如果不ok，要不浓缩病毒（或纯化），如果自身就没产生病毒，则寻找你质粒的问题，重新包被。
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关于丁香园293、293T细胞培养及转染一点经验_word文档在线阅读与下载_无忧文档
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293、293T细胞培养及转染一点经验
个人293、293T细胞培养经验及图片
HEK-293是用DMEM培养基培养吗？
HEK-293细胞是我在锐赛生物实验室做项目时常培养的细胞，DMEM+10%血清+双抗+谷氨酰胺，这类的细胞贴壁性不是太强，所以不要消化过久，容易损伤细胞。
状态较好的293细胞
细胞生长较快，一般1:3~1:5传代，30%~50%融合度2-3
天即可长满。
细胞状态不好后会变瘦、产生大量黑点（细胞碎片）。
网友咨询：我们这里的293转染质粒效率一直不高，
各种方法均试过了，很少能达到50%，老板说他在
国外做293转染很容易达到80%以上。我想问一下哪里有好的293细胞卖？非常感谢。答：293系列的细胞都是非常好转染的：注意点：
1.转染前细胞的铺板密度、细胞状态2.转染的时间3.转染试剂与质粒的比值
干扰载体转染293T细胞48h的图片，供参考。
293T细胞生长速度更快，形态较293A细胞小，贴壁性比293细胞弱很多，消化时间更要注意，没培养
过的刚接手细胞要在注意留种的同时多试验消化几次，掌握经验值。
细胞常用于腺病毒包装、
细胞常用于慢病毒包装。
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24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?我在24孔板里做293细胞的转染,转染试剂是Invitrogen的Lipofectamine2000.奇怪的是,每次加完DNA- Lipofectamine complex,24个孔当中的后面几个孔(比如最后6个孔)里的细胞就明显有一部分死亡,死亡率是10-30%,通常最严重的是最后两个孔.但是前面的孔里的细胞总是没有问题.用不同的DNA做实验,都发生同样的问题,就是总是后面的孔里细胞死亡,而前面的孔里细胞没问题.是怎么回事呢?
博凌科为也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.
与《24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?》相关的作业问题
先洗,再加0.25毫升Trizol或类似产品,用移液枪头在细胞生长表面上上下左右来回刮几次.注意要用处理过无RNase的枪头.细胞trizol萃取物保存在－80C.
铺板时没铺匀 铺板后可以平行晃培养板 中央有死细胞 是不是你每次都是对着中间加试剂,将细胞冲死了,要沿壁加液!其它的不懂了
可以在孔里取点 为啥不可以?除非孔里不是精加工的 不过作为基准孔基本都是精加工的
每个孔种10万细胞就差不多了吧.
博凌科为周围细胞密集,中间细胞稀少这种情况一般是种板时培养液过少,液面总是呈一凹面,如果液面过低,孔中间就基本上没什么细胞,所以种板时一定不能吝啬培养液,待贴壁后可以用比较 少量的培养液处理周围细胞稀少,中间细胞密集:这种情况一般是种板后过于晃动,特别是旋转着晃动.有人才用十字方向的晃动方法使细胞分散均匀.但我个人认为
博凌科为吹细胞时注意不要把枪头打空,不要吸进空气,一般就不会有泡沫了,少量泡沫也不会影响很大.中间细胞多可能是由于你摇匀细胞时,板子是圆周运动的,这样细胞就会聚集到中间.最好用十字运动摇匀,注意用力均匀.
与你用的细胞系有关.G418杀细胞慢一些,所以细胞密度不要太高. 再问： 用的hela细胞，有人说是20000，有人说是1000，到底是哪个呢？谢谢 再答： 1000太少了，20000可以。
那至少说明你的细胞开始接种时没有摇均匀,不过24孔板确实很难摇匀.此外,染色得多操作几次,根据经验可以慢慢调整,操作的多了自然就会染得好了 再问： 看过有些资料说，接种细胞后，用枪混匀后朝培养板四个方向依次分别倾斜，再十字摇晃，这样是不是好些，而且细胞都有迁移能力，培养时也发现细胞老往角落或者是边上生长，用6孔板是不是
可以的,每孔加培养基200ul的话48小时都没问题的.若每孔加100ul培养基的话,要看你细胞接种的密度了,密度适中的话培养36小时是没问题的.
用细胞计数版,具体操作可以百度搜一下,搜索血细胞计数版,看不懂的操作可以追问我 再问： 谢谢你的答案，我刚开始做细胞方面的实验，遇到很多问题，请问可以给你的Q号我吗？呵呵~
这个和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.但是有些蛋白表达时间比较早,24h就可以检测到了.如果时间实在排不开,取一部分先做了,就当摸索时间点了.
用的脂质体太多了,导致细胞膜大量破裂,所以细胞死亡,也有可能是每个孔的溶液体积太少了我用lipofectamine 2000,DNA只用0.8微克,2微升的lipofectamine 2000无血清培养基用的50微升加50微升,总共是100微升,然后每个孔其实还放了500微升的低血清培养基,所以总体积是600微升
请教：如何清洗6孔板、24孔板和96孔板?需要泡酸吗?用清水洗净后---泡酸---按常规清洗步骤清洗--泡于酒精中,用之前紫外照几小时,这种步骤后就可以放心使用乐,基本没有问题Search!Too much information in DXY form!泡酸,如果是新配制的酸泡2到3个小时,旧酸则多泡2-3个小时,这
空间比较小吧 再问： 谢谢回答。我将您的说法理解为因为培养孔板空间小，其内的细胞数量也较少，没有达到细胞与细胞之间正常交流的要求，因而细胞生长状态较差，请问这样理解正确与否呢？或者您的确切意思是？麻烦了！ 再答： 对，是这样~
制备（复制的~）1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养. 2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h. 3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4000rpm下离心10min收集菌体. 4.弃上清,用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细
24板长满了细胞大约有3X10（5）个细胞.如果你一天后要长到70％（2.1x10（5））,建议你放1.2－1.4X10（5）个细胞.因为细胞刚放进去的前几个小时需要粘在生长表面及适应新的生长条件,不会达到24小时翻一倍的速度.这个只是粗略估计,先试试.
这节诗里用（旗帜）（旗杆）等特写的镜头表现诗人无比激动与无比自豪的心情.
生物实验报告姓名_________ 同组人姓名_________ 实验名称：观察植物细胞实验目的：1.制作植物细胞的临时装片,学习制作临时装片的基本方法. 2.认识植物细胞的基本结构. 实验器具：洋葱鳞片叶,清水,稀碘液,镊子,刀片,滴管,纱布,吸水纸,载玻片,盖玻片,显微镜.实验步骤：一、制作洋葱鳞叶片表皮细胞临时装