缺铁性贫血，缺的真是只有铁么？
很多家长一看到宝贝是缺铁性贫血，第一时间就是想到给宝贝补铁，这种思路是对的，给宝贝不管是食补还是药补吃铁之缘片，都是围绕补铁来进行的，这种做法也是对的。在没有学营养之前，我和很多关心宝贝身体健康的宝妈一样，缺什么补什么，然而学了营养之后才发现，原来并不是那么简单。
在我们生活的空间，万事万物都是息息相关的，不可能单独存在，总是有着千丝万缕的关系，缺铁性贫血如果单纯的认为补充铁元素的话，那这种观念就有点狭隘，因为，在人体中，各种元素之间也是相到促进、相互帮助的，均衡共存，缺一不可，如果哪一种元素出现问题，就会反映出一系列的问题。如果我们在宝贝出现缺铁性贫血的情况下，只补充铁，而忽略了蛋白质、维生素C、维生素A、维生素B12、维生素B2、叶酸、铜、锌元素的摄入，那们单纯的补铁，并不会达到理想的效果。由此可见，它们之间是有着密切的联系。
蛋白质是组成红细胞中血红蛋白的重要成分，同时，也参与铁离子在体内的代谢，铁离子通过血清铁转动蛋白运转到骨髓参与造血，多余的铁离子则以铁蛋白形式储存起来。如果食物给我提供的能量很有限，而蛋白质参与的活动又多，就很容易引起缺铁性贫血。所以这时的宝贝要多摄入一些高质量的蛋白质。一般存在于肉禽类、鸡蛋、牛奶、豆类、菌类中。
维生素B12和叶酸是红细胞发育不可缺少的营养物质。而红细胞数量的多少，是检验宝贝是否贫血的一项重要指标。维生素B2 是机体中黄素酶系统的组成部分之一, 其缺乏可能通过影响小肠中NADH -FMN氧化酶(铁蛋白还原酶) 活力而影响铁代谢, 即维生素B2 缺乏可能影响到体内铁的吸收。而这三种维生素广泛存在动物性食物中，例如：肉类、动物内脏、鱼、禽、蛋等等。而奶类、谷类、蔬菜和水果中也存在大量维生素B2。
维生素C可以促使难吸收的三价铁还原成易吸收的二价铁, 而且能与铁络合成不稳定的抗坏血酸亚铁, 并能使铁从其他结合物中释放出来, 促进食物中铁的吸收。在我们日常所吃的新鲜蔬菜和水果中普遍存大，来源是非常经济实惠。
维生素A具有改善铁的吸收和铁在体内的运转、分布、促进造血功能的作用，间接影响到血红蛋白的水平。而且可能作为一种辅助因子或转录的激动剂, 参与运铁蛋白糖基的合成， 血清视黄醇当量与铁代谢的有关生化指标密切相关。喜欢存在于动物性食物中，例如：动物内脏、蛋类、乳类等。
矿物质铜参与铁的代谢和红细胞生成。铜蓝蛋白和亚铁氧化酶Ⅱ可氧化铁离子，使铁离子结合至运铁蛋白，对生成运铁蛋白起主要作用，并可将铁从小肠腔和贮存点运送到红细胞生成点，促进血红蛋白的形成。牡蛎、贝类海产品食物以及坚果都是它的良好来源。
微量元素锌，总是和铁形景不离，随着铁的缺乏，锌也会慢慢减少。所以缺铁和缺锌总是相依相伴。而锌主要分布在贝壳类海产品、红色肉类、动物内脏类，补锌也可以吃点新稀宝牌锌硒宝片，蛋白锌好吸收。
所以为了让宝贝拥有一个健康的体魄，我们在给宝贝准备饮食时要做到：营养搭配，科学饮食。多吃含铁丰富的食物，多吃含维生素C、终生素B族、蛋白质、给生素A的食物，促进铁的吸收。要多摄入一些高质量、高营养的蛋白；并养成不挑食、不暴饮暴食、静坐桌前吃饭的好习惯。
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今日搜狐热点血清铁低是怎么回事？
血清铁低是怎么回事？
血清铁低是怎么回事？我正常饮食，从来不挑食，这次检查大生化血清铁2，7。比正常值低很多很多，不知道为什么。
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擅长：白血病，溶血性贫血，骨髓增生异常综合症
共3条医生回复
因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
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专长：内科、
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问题分析：你好，那你应该是有缺铁性贫血的，可能是月经的原因，你需要多吃点枣，还有最好买点补血口服液吃，另外多吃蔬菜水果，避免熬夜劳累意见建议：你好，保持一个健康的生活习惯和饮食习惯，营养均衡补充，多休息，避免熬夜劳累，适当运动锻炼，没啥事的，多吃肉补充铁，祝你健康
职称：医师
专长：糖尿病足
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问题分析：清转铁蛋白减低见于：1.铁幼粒细胞性贫血、再生障碍性贫血。2.营养不良、重度烧伤、肾功能衰竭。3.遗传性转铁蛋白缺乏症。4.急性肝炎、慢性肝损伤等。意见建议：你好，铁蛋白低提示体内贮存铁减少，不过多吃点含铁多大食品即可。
职称：医师
专长：胃、十二指肠溃疡,面神经炎,低血压
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指导意见：你好，那你应该是有缺铁性贫血的，可能是月经的原因，你需要多吃点枣，还有最好买点补血口服液吃，另外多吃蔬菜水果，避免熬夜劳累，保持一个健康的生活习惯和饮食习惯，营养均衡补充，多休息，避免熬夜劳累，适当运动锻炼，没啥事的，多吃肉补充铁，祝你健康
问血清铁蛋白低是什么原因？无症状
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专长：高血压、心血管疾病
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病情分析： 你好，你的这种情况应该考虑是缺铁性贫血，建议你在当地医生的指导下正确治疗！意见建议：血清转铁蛋白减低见于：1.铁幼粒细胞性贫血、再生障碍性贫血。2.营养不良、重度烧伤、肾功能衰竭。3.遗传性转铁蛋白缺乏症。4.急性肝炎、慢性肝损伤等。
铁蛋白低提示体内贮存铁减少，不过多吃点含铁多大食品即可。
问血清铁低最容易引起的病是什么病？
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病情分析：白细胞偏少，淋巴细胞偏高，中性粒细胞偏低，血沉偏高，都是说明你抵抗力偏低，容易受病毒或细菌感染，或已经受病毒或细菌感染。
如果没有其他症状，注意营养均衡，适度锻炼，充足睡眠，注意饮水。祝您身体健
意见建议：
问血清铁蛋白偏低得注意什么
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铁蛋白降低说明体内缺铁或造血功能增强.只要补充最够的铁使缺铁性贫血得到改善铁蛋白就会正常.改善和预防最好最有效的方法，就是多吃含铁量高的食物，如海带,紫菜,木耳,西红柿,动物肝脏,瘦猪肉,鱼,虾,蛋黄,豆类和大米等,常吃水果,均有食疗作用.提倡用铁锅炒菜.这样就会好多了．
问宝宝血清铁偏低才7.6，铁蛋白正常是什么类型的贫血？
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意见建议：这是最常见的一种贫血.铁是合成血红蛋白的原料.缺乏铁质可引起低色素性贫血,即血红蛋白的减少比红细胞数的减少更为明显.正常人体制造血红蛋白的铁主要来源于衰老红细胞破坏后释放的铁,而铁的吸收和排泄量很少.一般饮食中的铁已足够补充人体的需要,不易发生缺铁现象.　
问血清铁正常，不饱和铁结合力和总铁结合力偏高，会是什...
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意见建议：你好,你的情况可选择驴胶补血颗粒就可以的,
常见的补血食品有黑豆,发菜,胡萝卜,面筋,菠菜,金针菜,龙眼肉等,补血饮食有炒猪肝xe,猪肝红枣羹,姜枣红糖水,山楂桂枝红糖汤,姜汁薏苡仁粥,黑木耳红枣饮料等.可适当选用
问检查血清铁四项的目的是什么
职称：医生会员
专长：高血压、糖尿病、心血管疾病
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问题分析：主要问题是铁偏低，其他的都没关系。怀孕中晚期会有白细胞升高，以中性粒细胞升高为主，这是正常的生理变化。尿上皮细胞增多如果不伴白细胞升高，对于女性来说没什么意义。意见建议：建议在医生的指导下适当的补铁。在孕期是可以用补铁药的。饮食上注意多吃瘦肉。
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评价成功！一. 血清总铁结合力
血清总铁结合力(TIBC)是指能与100ml血清中全部转铁蛋白结合的最大铁量称为总铁结合力，正常人血循环中的转铁蛋白约30%被饱和，其余的转铁蛋白处于未饱和状态。通常用测定总铁结合力的方法来间接测定转铁蛋白的水平，如果在血清中加入过量的铁，使转铁蛋白与铁的结合达到饱和状态，未被结合的铁与碱式碳酸镁反应生成沉淀，离心后，检测上清铁的浓度，计算出总铁结合力。由于血清中还有极少量的铁与其他的蛋白质结合，故所测得的TIBC结果不能完全准确反映转铁蛋白的含量，TIBC与血清铁同时检测，其临床意义更大。
未饱和铁=总铁结合力-血清铁
转铁饱和度=血清铁/总铁结合力
二. 血清铁蛋白
血清铁蛋白（Ferritin，Fer）是人体含铁最丰富的一种棕色蛋白复合物，分子量约450000，其中含铁17%~23%，是铁的主要贮存形式之一。它存在于肝、脾、骨髓等网状内皮系统内，为骨髓合成血红蛋白供铁，并按机体的需要向血清中释放。当人机体某一系统出现疾病时，血清中Fer可出现异常改变。
三者关系：铁蛋白=转铁蛋白+血清铁 关系如同脂蛋白=载脂蛋白+脂质
三. 血清铁离子
血清铁离子是血清或血浆中铁离子的含量，血清或血浆中真正的铁离子是不存在的，都是和血浆蛋白（多为转铁蛋白）结合，形成&血清铁蛋白&而储备。血清铁增高：见于溶血性贫血，再障性贫血，巨红细胞性贫血等；血清铁降低：见于缺铁性贫血，慢性长期失血，恶性肿瘤等。在酸性条件下，高铁离子从转铁蛋白中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，做比色测定。
参考范围：
一. 健康成年人血清总铁结合力
男性：50~77umol/L
女性：54-77umol/L
铁饱和度：20%~55%
二. 健康成年人血清铁蛋白
男性: 15-200ng/mL
女性: 12-150ng/mL
三. 健康成年人血清铁离子
男性：10.6~28.3umol/L
女性：6.6~26umol/L
测定方法：
一. 血清总铁结合力
在pH8.4条件下，血清转铁蛋白与过量的铁标准液(Fe )反应，未结合铁与菲咯嗪发生显色反应。再加入酸性缓冲液，在 pH4.0条件下，结合的铁从转铁蛋白中释放，并与菲咯嗪发生显色反应，吸光度值的增加与TIBC浓度呈正比。
二. 血清铁蛋白
被测样品中的铁蛋白与试剂中相应抗体在液相中结合，形成抗原-抗体复合物，并产生浊度变化，该浊度变化的高低与样本中铁蛋白的含量成正比，通过测定其570nm波长下的浊度变化，与经过同样处理的校准品比较，即可计算出样品中铁蛋白的含量。
三. 血清铁离子
采用5-Br-PADAP显色终点法与铁离子结合生成紫红色配合物，反应形成的紫红色与样本中铁浓度成正比，通过测定546nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中铁的浓度。
临床应用：
一. 血清总铁结合力
1．生理性升高：口服避孕药、妊娠晚期。
2．病理性升高：缺铁性贫血。
3．病理性降低：(1)转铁蛋白的丢失，如肾病、尿毒症等；(2)转铁蛋白的合成不足，如遗传性转铁蛋白缺乏症；(3)铁蛋白减少，见于肝硬化、血色沉着症；(4)其他疾病，如慢性感染贫血、恶性肿瘤贫血、溶血性贫血、地中海贫血、铁中毒等。
二. 血清铁蛋白
1. 血清铁蛋白降低：⑴缺铁性贫血，具有早期诊断价值；⑵营养不良、严重慢性疾病体内贮存铁减少导致的继发性贫血。
2. 血清铁蛋白增高见于：⑴体内铁贮存过多，如长期接受输血和不恰当的铁剂治疗；⑵恶性肿瘤；⑶急性感染和炎症；⑷肝脏疾病如肝硬化、肝坏死和心肌梗死等。
三. 血清铁离子
1. 血清铁升高：（1）红细胞破坏增多时，如溶血性贫血；（2）红细胞的再生障碍或成熟障碍，如再生障碍性贫血、巨红细胞性贫血。
2. 血清铁降低：常见于缺铁性贫血、慢性长期贫血、恶性肿瘤等。
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血清铁蛋白偏高很多，严重吗
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与肝脏的受损程度呈现平行的状态。 2. 肝脏损害时引起铁蛋白偏高。铁蛋白偏高的数值和肝脏的受损程度密切相关临床上，血清铁蛋白是检查体内是否缺乏铁的最灵敏的指标?请参照以下几个方面。 长沙方泰肝病医院肝病专家许爱良主任指出，血清铁蛋白偏高多是由于肝脏病变引起的，如急性粒细胞白血病，铁蛋白偏高的幅度就越大，因此检测体内铁缺乏的最灵敏的指标对肝脏的转移性肿瘤的鉴别很有参考意义。那么，如病毒性肝炎、脂肪肝、肝癌等。当然血清铁蛋白非特异性，需结合其它检查综合判断。具体。 3. 恶性疾病引起铁蛋白偏高，?针对这个问题、淋巴瘤。肝脏受损越严重： 1. 肝癌、胰腺癌引起铁蛋白偏高。肝癌患者治疗有效者铁蛋白下降，而恶化和再发者升高，持续增高则予后不良，故铁蛋白测定可作为疗效监测手段之一，特别是对AFP阴性的患者尤有意义，我们还是来听听肝病专家是怎么说的吧
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临床生物化学及检验 重点解析及习题解析
临床生物化学及检验学科带头人肖忠华，男，硕士，副教授。1974 年出生，民革党员。2009 年毕业 于重庆医科大学药学院， 现任重庆三峡医药高等专科学校医学技术系 医学检验技术专业教师；长期致力于生物分析化学方向教学科研，曾 从事过《临床生物化学及检验》《临床免疫学与检验》《临床实验室 、 、 管理》等课程教学，主持《医学检验专业教学资源库构建的探索与实 践》等教改课题，主持或主研多项市级自然科学课题，发表学术论文 6 篇，其中，SCI 收录 2 篇，CDCD 或北大核心收录 3 篇，教改论文 1 篇。目第一章 绪论 第二章生物化学检验标本录第三章 生物化学检验实验室基本知识 第四章 生物化学检验的质量控制 第五章 常用生化检验技术 第六章 自动化分析技术 第七章 酶学分析技术 第八章 体液蛋白质检验 第九章 体液葡萄糖检验 第十章 血脂及脂蛋白检验 第十一章 钠钾氯及酸碱平衡 第十二章 钙镁磷及微量元素 第十三章 肝功能检验 第十四章 肾脏功能检验1第十五章 心脏标志物检验 第十六章 胰腺疾病检验（略） 第十七章 内分泌疾病检验 第十八章 妊娠及新生儿生物化学检验 第十九章 治疗药物浓度监测（略） 第二十章 肿瘤标志物检验2第一章 绪论一、学习目的1.了解生物化学检验进展 2.熟悉生物化学检验内容二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必须完成每章节后面的作业，并以书面形式在集中教学时检 查。 3、结合工作实际。 三、自学学时1 学时四、知识要点1. 临床生物化学检验的性质与任务是什么？ 临床生物化学检验既是一门研究人体健康和疾病时生理生化过 程的医学基础理论学科， 又是一门应用各种技术和方法分析机体健康 和疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科， 它在 医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位。 它的作用主要有两方面， 一方面阐明有关疾病的生物化学基础和 疾病发生发展过程中的生物化学变化； 在阐明疾病生化诊断的原理方 面，偏重于论述疾病的生化机制，故又称为临床生物化学。另一方面 开发应用临床生化检验的方法和技术， 对检验结果的数据及其临床价 值作出评价，用以帮助疾病的诊断以及采取适宜的治疗，偏重于临床 生化实验室的应用，国内称为临床生化检验学。 它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着 的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情 监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依3据。 2.当今临床生物化学检验的研究进展 近 20 年来，在疾病临床生物化学方面的研究进展主要表现在缺 血性冠状动脉疾病、 肝胆系统疾病、 肾脏疾患、 呼吸系统疾病、 脂 代谢疾病、神经与精神疾病 、 糖尿病及内分泌疾病以及骨代谢标志 物、电解质与酸碱平衡、 治疗药物监测、 自由基与 NO 测定等方面。 临床生化检验方法学的进展，主要表现在生化分离与分析技术、生化 自动化分析与酶法分析、 临床生化诊断试剂盒 、方法学的高新技术 含量、 全面质量管理、分子生物学技术等方面。 3.临床生物化学检验与临床医学的关系 运用现代科学技术的原理和方法，探讨疾病的发生发展规律，并 应用于临床诊断和疾病防治， 是临床医学和检验医学的共同要求和迫 切愿望。 （1） ．与探讨疾病发生机制的关系 临床生物化学检验从分子水平研 究人体内在疾病状态下的生化变化和代谢异常， 有助于从本质上阐明 疾病的发病机制,研究阐明了健康和疾病的某些特征，同时，健康和 疾病的多样性的研究又开拓了临床生化及检验学研究的新领域。 反过 来， 人类对健康和疾病的认识又将从孤立地研究生化过程变化的方式 改变为全面系统地研究细胞内复杂的网络式生化变化的模式， 这对临 床生物化学检验的研究来说是一种突破性进展。 （2） ．与临床疾病诊断和治疗的关系 目前，临床开展的生化检验项 目已达 300 余种，而且，许多检验项目已进入分子水平，对临床疾病 诊断和治疗的价值越来越高，主要表现为：①疾病诊断和早期诊断； ②判断疾病的严重程度和预后。③治疗效果监测。④治疗药物检测。 ⑤探讨疾病的机理。4五、课后作业（一） 、A1 1、生物化学检验技术是哪些学科相结合的边缘学科 A.生物学 B.免疫学 C.物理学 D.数学 E.以上都是2、临床生物化学的研究内容不包括（ ） 。 A.阐述疾病的生化基础 B.阐述疾病发展过程中的生化变化 C.结合临床病例的研究 D.开发临床生化检验方法与技术 E.疾病治疗方案的研究3、 临床生物化学为下列的医疗方面提供信息和理论依据， 不包括 ） （ 。 A.疾病诊断 B.病情监测 C.疗效评估 D.预后判断 E.细胞形态学观察5（二） 、简答题 1. 简述临床生物化学的发展史 2. 简述临床生物化学在医学中的应用价值 3. 简述临床生物化学检验和实验数据主要用于哪几方面? 4. 简述用于临床检验诊断项目的理论基础 5 简述用于临床检验诊断项目的标本种类 参考答案 （一） 、A1 1、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：临床生物化学除了要求具有应用化学和医学的理论知 识和技术外，还应该和生物学、物理学、免疫学、数学和电子学等各 学科的知识密切联系，广泛应用这些学科领域的新成就，来发展和充 实临床生物化学学科。 2、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：临床化学的主要作用有两个基本方面：①阐述有关疾 病的生物化学基础和疾病发生、发展过程中的生物化学变化。②开发 应用临床化学检验方法和技术，对检验结果及其临床意义做出评价， 用以帮助临床做出诊断和采取正确的治疗措施。3、 【正确答案】 ：E6【答案解析】 临床化学检验及其在疾病诊断中的应用为疾病的诊断、 ： 病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供理论和试 验依据，也促进了临床医学的发展。 （二） 、简答题 1.临床生物化学是由生物化学、分析化学、临床医学等学科交叉 渗透逐渐形成的一门独立学科。追溯历史，20 世纪 40 年代，是生物 化学进入蓬勃发展的阶段。 ，其间的遗传中心法则、PCR 开创了分子 生物学时代，这一系列辉煌成就，将生物化学和分子生物学大大地向 前推进，也促进了临床疾病的基因诊断和基因治疗。国内临床生物化 学学科也与国际同步发展， 年代的 80 《生理生物化学与医学》 和 、 《临 床生物化学和生物化学检验》等系列教科书或参考书出版，记录着我 国临床生物化学科学工作者的辛勤劳动和科研成就， 为创立和发展临 床生物化学学科做出了杰出的贡献。 2. 有疾病的发生，就有生物化学反应异常表现，既要掌握和熟 悉健康人的生物化学反应过程， 又要明确和了解疾病状态下人体代谢 异常的过程，以此探讨发病机制，为临床提供诊断和治疗提供依据。 临床生物化学和生物化学检验不同程度地渗透到临床医学的各个领 域。 随着医学的发展， 用于判断病情和诊断疾病的实验方法大量涌现。 为临床诊断提供了客观的实验室依据。 3. 临床生物化学检验和实验数据主要用于以下几方面：①揭示 疾病基本原因和机制；②根据发病机制，建议合理的治疗；③诊断 特异性疾病；④为某些疾病的早期诊断提供筛选试验；⑤监测疾病； ⑥治疗药物监测；⑦辅助评价治疗效果；⑧遗传病产前诊断。 4. 应用于临床生物化学检验诊断的项目，分别利用糖、脂肪、 蛋白质、酶、电解质、激素和维生素等相关理论建立起来的。用作基 因诊断疾病的理论基础,主要是采用分子生物学技术,分析 DNA 和 RNA。 5. 进行临床生物化学检验诊断的项目的标本， 已不单限于血液、 尿液等体液成分， 而是扩大到生物体的任何组织如骨骼、 牙齿、 发干、 发球、肌肉、皮肤、脱落细胞等均可用于检测标本。监测对象已不限 于出生后的病人，还扩大到妊娠期体内胎儿，采用羊水、绒毛、妊娠 期母体外周血浆残留的 DNA 或胎儿有核红细胞等标本进行检验。 检验 项目丰富多彩，为疾病的诊治提供了多种途径。78第二章 临床生物化学检验基本知识一、学习目的1.熟悉生物化学检验标本和实验室基本知识 2.熟悉生物化学检验质量控制流程二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必须完成每章节后面的作业，并以书面形式在集中教学时检 查。 3、结合工作实际。 三、自学学时2 学时四、 知识要点（一）抗凝剂的种类及抗凝原理是什么？ 1、抗凝和抗凝剂： 2、肝素： （1）原理：对抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集。 （2）用量：10g/L 的肝素溶液 0.5ml 抗凝 5ml 血液。 （3）用途：血气分析、电解质的测定。 3、草酸钾-氟化钠： （1）原理：草酸钾和钙离子结合形成草酸钙沉淀，阻止血液凝固； 氟离子可以抑制葡萄糖酵解过程中的关键酶活性。 （2）用量：草酸钾 6g+氟化钠 4g 配成 100ml 溶液，取 0.2ml 可以抗 凝 5ml 血液。 （3）用途：血糖测定9（二）、防腐剂种类有哪些及用途？ 1、浓盐酸：酸性防腐；适用尿液激素的测定，如儿茶酚胺等。 2、甲苯：在尿液表面形成薄膜，防止细菌繁殖；适用尿液肌酐、蛋 白质、糖和丙酮的测定。 3、冰醋酸：酸性防腐；用于 24 小时尿醛固酮的测定。 4、麝香草酚：抑制细菌生长；适用尿钾、钠、钙、氨基酸、尿胆原、 醛：固定作用；用于尿中有形成分的防腐。 6、碳酸钠：用于尿液扑啉的检测。 （三）影响检验结果的生物学因素有哪些？ 生理因素的影响 1、年龄 2、性别 3、体型 4、妊娠 5、昼夜节律的变化 6、运动 药物和食物的影响 1、饮食的影响 2、药物和毒物的影响 （四）、全过程质量控制的主要工作包含哪些方面？ 有专人负责全面质控工作。 对工作人员进行医德医风教育和业务培训，普及质控知识。10科学的管理和严格的规章制度是质控方案得以实施的保证。 有标准化的操作规程。 仪器量器的定期鉴定、校正和正确使用。 实验用水、试剂、质控品及校准品的质量符合要求。 所采用的各种测定方法的准确度、精密度等技术性能良好。 有分析前和分析后的质量控制程序。 选择合适的室内质量控制方法，常规开展室内质控，对失控结果及时 采取相应的处理措施。 参加实验室间的质量评价活动或能力比对检验，认真分析回报结果， 对失控的项目要及时检查原因，并采取相应的改正措施。 （五）、全过程质量控制的内容 全面质量控制的内容主要包括标本分析前的质量保证、 分析中的质量 控制和分析后的质量评估三个主要过程的质控。 （一）分析前质量控制 ① 人员的素质和稳定性 ② 实验室的设置和工作环境 ③ 实验仪器的质量保证 ④ 检测方法的选择和评价 ⑤ 试剂盒的选择与评价 ⑥ 病人准备 ⑦ 标本的采集、处理和储存 ⑧ 实验室用水等11(二)分析中质量控制 ① 标本的正确处理和应用 ② 项目操作规程的建立 ③ 室内质控和结果分析 ④ 登记和填报告等 （三）分析后的质量评估 ① 运送实验报告 ② 室内质控的数据管理 ③ 参加室间质评 ④ 病人投诉调查 ⑤ 临床信息反馈等五 课后作业（一） 、A1 1、危及值指的是（） A、急诊标本的测定值 B、医学决定水平的测定值 C、高于正常参考区间的上限值 D、低于正常参考区间的下限值 E、危及患者生命的检验数值 2、对于危及值检验结果的报告（） A、应立即报告检验结果 B、如是急诊方立即报告检验结果12C、按常规报告时间报告检验结果 D、医师询问时报告检验结果 E、不一定，按情况而定 3、室间质量评价和室内质量控制的目的是为了解决以下那个问题？ A、准确性 B、重复性 C、可比性 D、抗干扰性 E、线性 4、检测系统校准的主要目的是为了解决以下那个问题？ A、准确性 B、重复性 C、可比性 D、抗干扰性 E、线性 5、下列各项中最易出现问题、潜在因素最多、也是最难控制的环节 是（） A、分析前的质量管理 B、分析中的质量管理 C、分析后的质量管理 D、全过程的质量管理 6、分析过程质量保证，是指从临床医生开出检验医嘱开始到实验室13完成分析结束前的步骤，分析前和分析后质量保证不包括（） A、检验申请 B、患者的准备 C、样本检测 D、临床的咨询 E、临床的调查 7、样本采集时间要依据血循环中分析物水平的变化决定，保证每天 样本采集时间恒定对于消除由日内变异造成的影响很重要。 样本采集 选择实践的最佳原则中不正确的是（） A、最具“代表性”的时间 B、检出阳性率最高的时间 C、症状最稳定的时间 D、诊断最有价值的时间 E、以清晨空腹为佳 8、下列说法不正确的是（） A、生长期儿童的碱性磷酸酶的活性比健康成人高 B、成人的红细胞计数高于新生儿 C、肌酐和肌酸激酶，男性的水平明显高于女性的水平 D 皮质醇一般早上高于晚上和午夜 E、输液患者标本应在未输液的另一侧臂取血 9、检验报告的完整性是指（） A、检验报告的内容14B、检验结果审核的步骤 C、检验申请的步骤 D、检验申请单验收的程序 E 检验报告单发放的程序 10、为保证检验结果准确，每批检测的检验结果可否发出，重要依据 之一是（） A、室内质控是否在控 B、操作者/审核者有无签字 C、有无漏项 D、检验结果有无涂改 E、检验日期有无错误 （二） 、名词解释 1.危及值 2.参考区间 3.生理变异 4 昼夜节律 5.校准 （三） 、简答题 1.合格的检验申请单包括那些内容？ 2.患者的生物学变异主要包括那些内容？ 3.现代临床实验室管理流程再造主要体现在那几个方面？ 参考答案15一、A1 1、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：危及值指的是危及患者生命时候的检验值 2、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：危及值报告应当立即电话报告，以便医师采取措施 3、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：EQA 和 IQC 的主要目的是可比性，即不同实验室之间 的再现性 4、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：检测系统校准是为了方法、仪器、试剂盒组成的检测 系统的准确性，以进行量值溯源 5、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：分析前、中、后质量管理之中，最难以控制的是检验 前控制，受到生理因素等生物学因素影响 6、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：样本检测属于分析中质量保证167、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：症状最稳定时间不是最佳原则之一 8、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：患者生物学变异影响，其他几个都对。 9、 【正确答案】:A 【答案解析】 ：检验报告的完整指的是内容的完整10、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 检验结果是否在控是分析中质量保证必须的一个环节。 ： 二、名词解释 1、危及值指的是检验结果如不及时处理，随时会危及患者生命的检 验值。遇到这种情况时，应迅速将检验结果报告给临床医师，避免对 患者诊治的贻误。 2、参考区间：一般将参考值在中央 95%分布区间的分布称作参考值 区间。 3、生理变异：生理变异是体内的固有变异，不可人为进行控制。如 年龄、性别、采血时间、季节、海拔高度、妊娠、月经周期和生活方 式，以及患者服用药物及其代谢等因素。174、昼夜节律：某些检验指标 存在昼夜节律变化，即在一天内有所波 动。时间节律变化影响最大的检验项目是激素类，因此，对这些检验 项目需要规定统一采集标本的时间。 5、校准：指在规定条件下，为确定检测系统所指示的量值，与对应 的由检测系统所复现的值之间关系的一组操作。 三、简答题 1、检验申请单应包括足够的信息，以识别患者和申请者，同时应提 供相关的临床资料。 检验申请单或其他电子申请表应留有空间以备填 入下述内容，但不局限于下述内容：患者的唯一标识如姓名 科室 床 号 住院号；医师或经授权提出检验申请者的姓名；原始样本的类型； 申请的检验项目；患者的相关临床资料，至少应包括性别和年龄，以 备解释检验结果用；原是样品采集日期和时间；实验室收到样本的日 期和时间。 2、患者的生物学变异直接影响检测结果的准确性，这些影响因素主 要包括：生理性变异如年龄、性别、采血时间、季节、海拔高度、妊 娠、月经周期和生活方式以及患者服用药物及其代谢等因素。 3、现代临床实验室在检验流程再造过程中主要体现在解决检验前、 中、后流程等问题上①标本检验前流程包括医嘱申请、患者信息、患 者的唯一标识、标本管的正确选择、标本管的唯一性标志、标本的传 递等；②实验室标本前处理流程包括标本的签收、标本的分类整理、 编号、 核对标本及医嘱申请、 患者信息登录、 标本离心及血清分离等； ③标本检验流程包括各类分析仪器的检测能力、 各类分析检测的应变18能力、各类分析检测的备份能力及人员的培训等。④标本检验后处理 流程包括：检验结果审核、报告打印、签名确认、报告分发、派发等。19第三章 临床生物化学常用检验技术一、学习目的1.熟悉临床生物化学检验常用检验技术的原理方法 2.了解检验技术的发展动态即分子生物学诊断技术二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必须完成每章节后面的作业，并以书面形式在集中教学时检 查。 3、结合工作实际。 三、自学学时4 学时四、知识要点（一） 、光谱检验技术原理种类及其应用 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以 此来确定物质性质、结构或含量。在临床生物化学检验中，光谱分析 是一类十分重要的技术，应用极为广泛。它既可以研究物质的结构分 析， 也可以对特定物质进行定性或定量的分析根据物质对光谱响应特 征的不同，可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析 技术和散射光谱分析技术三大类。 可见-紫外光分光光度法利用朗伯－比尔定律作为化学反应定量 的基础，应重点掌握该定律的应用、使用条件和各个变量间的关系， 从而根据已有的结果计算需要的变量。 吸光系数是表示物质特性的常数，是物质鉴定的基础，根据物质 的吸光系数可以进行定量测定，但应注意其使用的条件。在化学反应 中尽量选择吸光系数大的物质，可以提高测定的灵敏度。 在分光光度法的建立中，应掌握波长的选择、双波长测定的原理20和抗干扰的原理。在可能的情况下应选择灵敏度高、选择性好的显色 剂，同时需要应用适当的校准方式和计算方程式。 在定量分析中，大量使用分光光度计。该类仪器属于比较精密的 分析计器，使用要求比较严格。其中单色光的纯度和波长的准确性直 接影响到测定结果的准确性和精密度。 在使用前和使用过程中应进行 光源的检查和波长的校正。 原子吸收分光光度法是基于光源辐射出具有待测元素特征谱线 的光，通过原子化器，被其中待测元素的基态原子所吸收，根据吸收 而导致辐射特征谱线光被减弱的程度来测定待测元素的含量。 与其它 分析方法比较，它具有灵敏、准确、分析速度快、干扰少、无需化学 反应和测量元素含量范围较广等优点。由于其检测灵敏度较高，操作 环节比较多，而且每种元素需要一种的光源灯，因此在临床实验室一 般较少应用于常规分析。 荧光分析法是利用某些物质吸收了一定波长的光能后， 分子从基 态跃迁到激发态，此类电子经与同类分子或它种分子相互碰撞，消耗 相当，而下降至第一电子激发态的最低振动能阶。最低能阶下降到基 态，同时发射出比原来所吸收的频率较低，波长较长的光能，称为荧 光。利用元素的原子所发射的共振荧光波长的差异，可确定元素的种 类或物质分子中某种结构，从荧光的强弱可以测定物质的含量。荧光 分析定量是基于荧光物质的稀溶液，在一定的温度下，当激发光的波 长、强度、荧光测定波长以及液层厚度一定时，所测得的荧光强度 F 与该溶液中荧光物质的浓度 C 成正比，F=kC。采用标准曲线法或直接 比较法，对荧光物质进行定量。 荧光分析法灵敏度高，可以进行微量分析和定量测定较微量的物质。但该方法影响因素较多，因此， 在进行荧光分析时应严格控制各种条件才能获得灵敏、 准确的分析结 果。21（二） 、电化学分析技术原理种类及其应用 电化学传感器在临床生化分析的应用中占据着主导的地位。 其原 理是将电极浸入待测溶液中组成原电池， 其中一支电极的电极电位与 待测离子的活度有关，其关系服从 Nernst 方程，此电极称为指示电 极；另一支电极是电位已知并且恒定的所谓参比电极,目前最常用的 参考电极有甘汞电极和银-氯化银电极。 离子选择电极法根据标本情况又可分为直接法和间接法。 直接法 是用离子选择电极直接测定生物体液中的被测物质； 间接法则是将标 本进行预稀释，然后再进行测定，使得标本的使用量更少。间接法由 于将标本进行了预稀释，可以控制其离子强度，也就是控制其活度系 数，但间接法由于标本被稀释，测定结果比直接法低。 ISE 具选择性好、灵敏度高， 、线性范围宽、溶血、脂血及黄疸 不影响测定，对有色、浑浊溶液都可进行分析、设备简单，分析速度 快，易于自动化，标本用量少等优点，在临床上应用广泛。 （三） 、电泳技术原理种类及其应用 电泳技术应用广泛，在生物化学实验技术中占有重要地位，主要 用于蛋白质、核酸等的分离、鉴定和定量。目前已经发展到自动化的 电泳系统，整个电泳过程包括点样、电泳、脱色、扫描定量都实现了 自动化操作。同时用半干胶技术取代液体缓冲液，使得电泳操作更规 范简便，电泳结果重现性更好。 应掌握电泳的原理、影响因素、各种电泳的特点和使用范围。 （四） 、常用免疫分析技术原理种类及其应用 随着单克隆抗体的开发和使用、 各种标记技术的发展使得免疫学 进入了一个新的时期。由于免疫分析技术具有特异性好、快速、灵敏 度高等，使得荧光分析法其应用范围十分广泛，在临床生物化学中可 以对内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、肿瘤标志22物、血药浓度等血清微量物质进行定量测定。 免疫比浊分析分为散射免疫比浊分析和透射免疫比浊分析， 应掌 握它们的原理、适用条件、影响因素和临床应用。 酶免疫分析是将酶催化的放大作用与抗原、 抗体的免疫反应相结 合的一种标记免疫分析技术。 与放射免疫分析相比其最大优势在于避 免了放射性核素对人体的损害、核素标记的抗原或抗体批间差异大， 酶标记物具有明显较长的有效期和不需特殊设备等。 近年来在 EIA 中 又引进了放大系统，派生出荧光酶免疫分析、增强化学发光酶免疫分 析等，使检测的灵敏度大大提高，应用范围不断扩大。应掌握均相 EIA 和非均相 EIA 的原理，各种方法的优缺点和应注意的问题。 化学发光免疫分析近十年来得到了很大发展， 与微粒子发光免疫 分析生物发光免疫分析、 增强化学发光分析和电化学发光等以其灵敏 度高、检测速度快、操作简便、所用试剂对人体无危害的优点，成为 非放射性免疫分析技术中最具有发展前途的方法之一。 主要掌握它们 的原理和在临床中的应用。 时间分辨荧光免疫分析以镧系元素为标记物， 是一种全新的非放 射性标记免疫技术和超灵敏度的检测技术。 其主要特点是以稀土元素 铕（Eu3+）标记抗原或抗体为示踪剂。利用增强液的荧光放大作用和 时间分辨荧光测量法排除样品或试剂中非特异性荧光物质的干扰， 最 大限度地提高了荧光信号测量的特异性和检测方法的灵敏度、 操作方 法简便、标记物制备容易、稳定性好、不污染环境和易于自动化等优 点。 （五） 、实验室其他检验技术有哪些及其发展趋势 离心机是利用物质的高速旋转时产生强大的离心力， 使置于该旋 转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮， 从而使某些颗粒达到浓缩或与其 他颗粒分离的目的。离心机的种类繁多，用途各异。在使用中应掌握23离心力的换算，沉降系数的意义和表示方法，离心机使用中应注意的 问题。 高效液相层析法是用特制微粒（&10um）充填的层析柱作为固定 相， 通过高压使液体流动相快速通过层析柱而达到快速有效分离液相 中各种物质的层析技术。它具有分离效果好、分析速度快，检测灵敏 度高等特点。在医药卫生和生物化学中得到广泛的应用，蛋白质、糖 类、核酸、氨基酸、生物碱、类固醇和类脂等大分子以及高分子聚合 物度能用 HPLC 测定。 放射免疫分析是利用了现代放射性测量技术的高度敏感性和精 确性，灵敏度高，是一种超微量的分析技术。同时，由于其分析原理 是基于抗原与抗体间高度专一性的结合反应， 因而它具有很高的特异 性， 能从组分十分复杂的样品中准确地测出某一特定组分的含量而不 受其它组分的干扰。 其分析原理是： 用放射性核素标记配体或结合剂， 在配体与结合剂之间竞争性或非竞争性的可逆性结合反应， 形成配体 －结合剂复合物，其反应遵循质量作用定律。放射免疫分析根据结合 反应原理及方法学设计原理的不同有许多类型。主要用于激素、微量 蛋白等的定量测定，在临床中应用较广。 生物传感器是指固定化的生物体内成分(酶、抗原、抗体、激素 等)或生物体本身（细胞、细胞器、组织等）为敏感元件组成的传感 器。 生物传感器这种新的检测手段与传统的生物化学相比具有以下的 主要特点为①生物传感器是用选择性好的生物体材料作为敏感材料， 因此一般不需要进行样品的前处理，一般也不需另加其他试剂，使用 简便、快速、准确； ；②由于它的体积小，可以实现连续在位检测， 联机操作；③响应快，样品用量少，且由于敏感材料是固定化的，可 以反复多次使用；④传感器连同测定仪器的成本远低于大型的分析 仪，便于推广普及。24生物传感器根据利用的生物物质的不同可分为两类。一类是利用酶、 细胞内小器官、细胞、组织等具有辅酶特性物质的生物催化传感器。 酶传感器、 微生物传感器和组织传感器属于此类； 另一类是利用抗体、 结合蛋白质、激素受体、DNA、RNA 等具有亲和性物质的传感器。免 疫传感器、受体传感器、DNA 传感器属于这类。 生物芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法， 将大量生物 大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有 序地固化于支持物 （如玻片、 硅片、 聚丙烯酰胺凝胶、 尼龙膜等载体） 的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶 分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效 地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量、种类等信息。根据芯片 上的固定的探针不同，生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯 片、组织芯片，另外根据原理还有元件型微阵列芯片、通道型微阵列 芯片、 生物传感芯片等新型生物芯片。 如果芯片上固定的是肽或蛋白， 则称为肽芯片或蛋白芯片； 如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或 DNA，就是 DNA 芯片。 生物芯片技术应用于疾病的诊断、新药开发、基因测序、基因表 达分析、寻找新基因、突变和多态性研究等诸多方面。生物芯片技术 虽然还处在初期发展阶段， 它的飞速发展正在逐步改变着人们对生物 体的认识，随着这一技术的深入发展，它将对临床疾病诊断、疾病发 生机理的认识和新药开发都将是一个重要的研究手段。 但仍然存在着 许多难以解决的问题，例如技术成本昂贵、复杂、检测灵敏度较低， 重复性差、 分析泛围较狭窄等问题。 这些问题主要表现在样品的制备、 探针合成与固定、分子的标记、数据的读取与分析等几个方面.五 课后作业A1251、对分子量相同而电荷不同的蛋白质分离宜采用的电泳技术为 A.醋酸纤维薄膜电泳 B.琼脂糖凝胶电泳 C.转移电泳 D.等电聚焦电泳 E.SDS PAGE2、下列方法中哪些属发射光谱分析法 A.火焰光度法、荧光法、化学发光法 B.火焰光度法、原子吸收分光光度法、分光光度法 C.火焰光度法、分光光度法、原子吸收分光光度法 D.火焰光度法、荧光法、分光光度法 E.火焰光度法、化学发光法、原子吸收分光光度法3、下列何种方法可用于获得某种纯蛋白质 A.琼脂糖凝胶电泳 B.透析 C.离子交换层析 D.免疫固定电泳 E.亲和层析4、凝胶层析分离蛋白质所应用的原理是 A.蛋白质所带电荷的多少 B.蛋白质是清蛋白还是球蛋白 C.蛋白质所含酸性氨基酸的多少 D.在某个体系内该蛋白质的含量的多少26E.蛋白质的分子大小5、10mmol/L 的氯化钙中氯离子的浓度应为 A.6.7mmol/L B.5mmol/L C.10mmol/L D.20mmol/L E.30mmol/L6、测定光束通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的定量方法 是 A.荧光定量分析法 B.散射光谱分析法 C.发射光谱分析法 D.吸收光谱分析法 E.原子吸收光度法7、下列电泳属于区带电泳的是 A.琼脂电泳 B.琼脂糖电泳 C.聚丙烯酰胺电泳 D.以上都是 E.以上都不是8、可见－紫外分光光度法的理论基础为 A.Lambert－Beer 定律27B.Rayleigh 方程式 C.Nernst 方程式 D.Heidelberger 曲线 E.ROC 曲线 参考答案A1 1、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：等电聚焦电泳是利用有 pH 梯度的介质分离等电点不 同的蛋白质的电泳技术， 特别适合于分离分子量相近而等电点不同的 蛋白质组分，在区带电泳中分辨率最好。 2、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：光谱分析技术分为发射光谱分析（荧光分析法、火焰 光度法和化学发光法） 、吸收光谱分析（可见及紫外光分光光度法、 原子吸收分光光度法）和散射光谱分析（比浊法） 。 3、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有 特异的亲和力，从而达到分离的目的。亲和层析可用于纯化生物大分 子、稀释液的浓缩、不稳定蛋白质的贮藏、分离核酸等。 4、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：凝胶层析的固定相是多孔凝胶，各组分的分子大小不 同，因而在凝胶上受阻滞的程度也不同。285、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 分子氯化钙可电离出 1 分子 Ca2+和 2 分子 Cl－。 ：1 6、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：透射和散射光谱分析法主要测定光线通过溶液混悬颗 粒后的光吸收或光散射程度，常用法为比浊法，又可称为透射比浊法 和散射比浊法。 7、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作 为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。 8、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：Lambert－Beer 定律可见－紫外分光光度法。29第四章 临床自动化技术一、学习目的1.熟悉临床生物化学检验自动化仪器种类原理组成结构 2.熟悉自动化仪器及试剂盒的性能评价、评估与确认二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必须完成每章节后面的作业，并以书面形式在集中教学时检 查。 3、结合工作实际。 三、自学学时4 学时四、知识要点（一 ）自动生化分析仪基本组成及分类 自动生化分析仪将生化分析中的取样、加试剂、混匀、保温反应、 检测、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗等步骤组合在 一起自动操作。 按其工作方式不同分为连续流动式或管道式、 分立式、 离心式和干片式。 （二）分立式自动生化分析仪的结构 1 样品盘或样品架 样品盘是能放置样品杯或采血试管的转盘；样品 架是能放置样品杯或采血试管的架子，可通过样品传送带进行移动， 其优点是可不断追加新的样品架， 以及能将样品传送到另一分析模块 甚至另一分析仪上再进行分析。 2．试剂室和试剂瓶 试剂室内可装有放置试剂瓶的转盘，转盘转动时 某一试剂瓶内试剂被吸取；或摆放许多试剂瓶，每个试剂瓶内引出一 条试剂管路及其喷嘴。试剂室均具有冷藏装置。大型分析仪常有第一 试剂室和第二试剂室。303．反应杯和反应盘 反应杯即作反应管又作比色杯，由透光性好的硬 塑料或石英玻璃制成，反应杯围成一圈组成一个反应盘，在测定过程 中作恒速圆周运动，静止时向反应杯中加入样品、试剂或进行搅拌混 匀，相对静止时经过检测窗口的比色杯可进行吸光度检测。 4．取样和加试剂装置 取样装置由取样针、取样臂、取样管路、取样 注射器和阀门组成，取样针尖具液面感应功能，并设有防撞装置。取 样针大多数采用水洗方式，也有采用化学惰性液的方式。加试剂装置 有两类，一种类型的组成与取样装置类似，其液面感应系统能检测并 提示试剂剩余量。另一种类型为灌注式，每种试剂单独使用一条试剂 管路和喷嘴，因而不存在各试剂间的交叉污染。 5．混匀与搅拌装置 样品与试剂通过棒搅充分混匀。 6．温控和定时系统 反应杯浸浴在恒温循环水或恒温空气中。检测吸 光度有一定间隔时间，总反应时间一般在 8-10min 内。 7． 光路和检测系统 光源一般为卤素钨丝灯， 也有采用长寿命的氙灯。 单色器采用干涉滤光片分光系统， 或光栅分光系统， 常用波长有 340、 380、405、500、550、600、660nm 等。光栅分光有前分光和后分光 两种方式，后分光是光源先透过比色杯中的反应液再照射到光栅上。 检测器由光敏二极管及放大电路组成。 8．数据处理系统 能计算测定结果、判断结果准确性、保存各种数据 和自我诊断功能等。 9．清洗系统 反应和检测结束后反应杯就被冲洗系统及时冲洗，然后 做杯空白吸光度检查；样品针、试剂针和搅拌棒一般在用于下一个样 品、试剂或反应杯前即清洗一次；在一批检测完成后，则自动进行清 洗剂清洗，清洗剂可配有 1 至 3 种。 （三）组合式自动分析仪结构 组合式自动生化分析仪将相同或不同的两台或两台以上的分析部分，31采用样品架方式使样品通过传输线在不同分析模块间进行传递并检 测。实验室自动化系统组合各自动分析系统如生化分析系统、免疫分 析系统以及血液分析系统等，可包括样品前处理系统、样品输送系统 和各样品分析系统。四 生化分析方法类型有哪些 1．终点法 被测物质在反应过程中完全被转变为产物，根据终点吸光 度的大小求出被测物浓度，实际上称为平衡法更为恰当。 一点终点法是在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点 吸光度值计算结果。 两点终点法则在被测物反应或指示反应尚未开始 时选择第一个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度， 将两点吸光度之差计算结果。该法能有效地消除溶血、黄疸和脂浊等 样品本身光吸收造成的干扰。在双试剂分析中，如果将第一吸光度选 择在第二试剂加入前，此时指示反应一般尚未开始，则能容易设置两 点终点法。 2．固定时间法 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既 非反应初始吸光度亦非终点吸光度， 这两点的吸光度差值用于结果计 算。该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题，例如苦味酸法 测定肌酐。 3．连续监测法 又称速率法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物 时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期的吸光度值，并以此期单位 时间吸光度变化值（ΔA/min）计算结果。该法的优点是可以确定线 性期并计算 ΔA/min，从而可准确计算酶活性。连续监测法也可用于 测定呈线性反应的代谢物浓度，一般是某些基于酶法测定的代谢物。 4．透射比浊法 抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物，在反应液 中具有一定的浊度，进行透射比浊测定，可用于某些蛋白质和药物浓32度等的测定。 （五）常用生化检测项目分析方法举例 1．终点法检测 总胆红素、结合胆红素、血清总蛋白、血清白蛋白、 总胆汁酸、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法） 、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、 高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法） 、钙、磷（紫外法） 、镁等。 2．固定时间法 苦味酸法测定肌酐等。 酶活性如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转3．连续监测法移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ 谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌 酸激酶等。一些代谢物酶法测定如葡萄糖（己糖激酶法） 、尿素（脲 酶偶联法）等。 4．透射比浊法 载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗&O&、类风湿 因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白 等。 （六） 、自动生化分析仪性能评价 生化分析仪有全自动和半自动之分。 全自动分析仪将取样至出结果 的全过程都自动完成。半自动分析仪的工作原理为连续流动式分析， 不同样品反应液之间互染率大， 每个样品检测后均需冲洗才能进行下 一个测定，某些步骤如加试剂、取样、混合、保温等需手工完成。 生化分析仪的分析性能也包括准确度、 精密度、 检测范围等， 另外， 分析速度是自动生化分析仪最重要的分析性能。 （一）分析速度 影响 分析速度的因素有通道数量、取样周期、反应杯数量、一次能容纳的 样品数量、试剂瓶容量、合适的项目组合等。分析仪性能指标 自动生化分析仪的性能可包括五个方面：准确度、精密度、检测能 力（包括检测方法、检测时间、加试剂次数、检测范围等） 、分析速 度和检测成本， 分析仪生产厂家关于其分析仪的介绍资料中通常列出 许多性能指标，这些指标实际上是这五方面性能的解释。33（七） 、液体试剂盒的分类和特点 商品试剂与标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试 剂盒，或叫试剂组合。 1.液体型试剂 (1)液体单试剂 所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的 试剂科学地混合在一起，组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试 剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用适当的方法检 测结果。应用十分方便。 (2)液体双试剂 所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的 试剂，按用途科学地分成两类，分别配成两种试剂，通常第一试剂加 入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用， 第二试剂为启动 被检测物质反应的试剂， 两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化 反应。然后用适当的方法检测结果。 2.粉（片）剂型试剂 所谓粉剂型及片剂型试剂， 即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉 剂或混合后压成片剂，使用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。 干粉试剂如果用固体原料研磨后制成粉剂或片剂，则存在许多问题： ① 要使试剂各组分混合得非常均匀，技术难度很大；② 分装过程中的 称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差；③ 水质优劣对 试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响。 3.其它类型试剂 (1)快速反应试剂盒 主要是加大效应酶用量缩短反应时间，提高工作 效率,是一种发展趋势。 (2)一步法试剂盒 这是利用特异性抗体参与反应的新型试剂。 (3)多项同测组合试剂盒 这类型试剂主要是用于三点双项同测终点 法、 三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点速率法测定的试剂34盒。方法是在同一比色杯中，先后加入两种试剂与检品中的两种被检 物发生反应，在各反应达到平衡期时分别测定，整个测定过程进行三 次比色，测定两个项目，称为三点双项同测终点法。 (4)卡式试剂盒 试剂首先装入试剂瓶，瓶上充分使用编码技术，而后 根据编码启动调配、使用及更换储存。其特点是：① 卡式试剂瓶上条 码令使用者可快捷准确地输入试剂数据， 如测试数量、 批号、 有效期， 保证正确识别试剂。② 试剂装载后能自动调配，可消除潜在误差，并 节省操作时间。③ 持续不断地监察仪器上已装载的试剂存量，并在供 应量不足时通知使用者。试剂装载使用时间可长达一个月。④ 所有卡 式试剂盒大小划一，有利储存。卡式试剂设计较独特，可防止试剂蒸 发及降解，能确保试剂装载后的稳定性更长，从而节省成本。⑤ 标签 根据测试类别以颜色编码，便于使用者识别。 (5)浓缩试剂盒 上述卡式试剂盒就是采用的浓缩试剂，使用时自动完 成稀释，而后用于测定。浓缩试剂便于工作、储存、运输、装载等优 越性是很明显的， 浓缩试剂便于监控、 减少校正次数、 提高工作质量。 （八） 、液体双试剂盒的特点 液体双试剂与其它类型试剂比较具有液体试剂和双试剂的优点。 1．提高了抗干扰反应的能力 在临床生化测定过程中，血标本除了含 有待测物质外，还含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都 会干扰或参与测试反应，引起非特异性反应干扰，而双试剂型试剂盒 设计的一个主要目的就是为了克服这种干扰反应。在测定过程中，首 先让试剂Ⅰ 与标本中的干扰物质反应，反应 5 分钟后，再用试剂Ⅱ 启 动真正的测试反应，从而使测定结果更加准确。 2． 使测定更科学合理 由于液体双试剂的使用， 使测定更加科学合理。 3．稳定性能优良 全液体酶法试剂从分配上解决了干粉、片剂型复溶 后稳定性的影响：① 用户可根据每次标本量多少按一定比例配制适量35工作液，当天配制当天用完，这样便可减少试剂损失。② 如果用户使 用的自动生化分析仪有双试剂测定功能，那么，就不必把双试剂混合 成工作试剂进行测定，试剂的有效期一年便是工作液的有效期。 对于干粉、片剂型等需复溶的生化试剂，水质的好与坏直接影响了复 溶后工作液的稳定性和测定重复性。如① 水中 F 会引起某些酶失活； ② 水中的重金属离子会影响酶活力； 水中某些微生物会引起酶失活， ③ 除了水中某?杂质&会引起试剂中酶失活、部分失活而导致稳定 性、重复性下降外，有些&杂质&会直接影响测定结查，如水中含有 NH4 便会直接影响尿素氮测定的准确度。 4． 试剂组分高度均一 试剂中每一组分均一性是影响试剂测定重复性 的一个重要因素。在干粉、片剂与冻干生化试剂生产过程要使每一试 剂中十几种组分（有的组分含量相当微量）分布相对均匀也是一个技 术难度较高的课题。在每一种试剂生产过程中必须解决：① 原料干粉 生产过程中每一组分的均匀性 （冻干生化试剂在冻干分装前由于是液 体的，每个组分是相当均匀） 在分装过程中由于加样误差引起的 。② 均匀性问题。③ 在使用过程中，由于需加入复溶水，复溶水的加样误 差也会造成瓶与瓶之间同一组分浓度不尽一样。 （九） 、临床生化诊断试剂盒的性能指标 1.准确度 通常以回收率、定值血清的靶值范围、对照试验及干扰试 验的结果来判断。 (1)回收试验 回收率越接近 100%，准确率越高，一般以 100%± 5%为 合格。 (2)定值血清的测定 对于某些无法准确加入标准物的试剂盒，可用 低、中、高浓度的定值血清进行测定，测得值符合定值血清的靶值范 围（ ± 2S）为合格。 (3)对照试验 将被检试剂盒与公认的参考方法同时测定若干样本（一36般要求 100 份，最少需 30 份） ，计算两组结果的相关系数和直线回归 方程。相关系数 γ 越接近 1.0、斜率 b 越接近 1.0，截距 a 越接近 0， 则准确度越高。相关系数要求在 0.9～1.0 之间，γ 值符合要求不等于 准确度都符合要求。b 表示比例偏差，a 表示恒定偏差。 （1-b）× 100% 表示比例偏差的大小。 值/样品含量）× （a 100%表示恒定偏差的大小。 (4)非特异性与干扰试验 对维生素 C、黄疸、溶血、乳糜等因素的耐 受程度，干扰值越小越好。 2.精密度 试剂的瓶间差异、批内精密度和批间差异三组测定的平均 值之间应无显著差异，否则，试剂盒的均一性不符合要求。 (1)瓶间差异 同一试剂盒，取 10 瓶试剂复溶，测定同一样品的含量， 求平均值、标准差、变异系数。 (2)批内精密度 同一样品用同一瓶试剂测定 10 次，求平均值、标准 差、变异系数。 (3)批间差异 同一样品，用不同批号的 10 瓶试剂测定，求平均值、 标准差、变异系数。 3.线性范围 指该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。被检样 品的含量超出测定线性范围，必须改变样品与试剂体积的比例，重新 测定才能得到准确结果。 试剂盒的测定线性范围是衡量试剂盒质量的 一个指标，也是正确使用该试剂盒的关键之一。试剂盒测定线性范围 要求能覆盖该项测定的常见医学决定水平。 4.抗干扰作用 双试剂型试剂盒主要优点是抗干扰作用。如 ALT 双试 剂盒的第一试剂能排除内源性丙酮酸干扰。 此种试剂盒的第一试剂加 入被检血清后，37℃ 分钟内显示 NADH 被消耗、340nm 吸光度值下 5 降的曲线，当内源性丙酮酸被消耗完，吸光度曲线平坦，加入第二试 剂后，340nm 吸光度立即上升，当 ALT 酶促反应发生后又下降。这 种反应曲线显示了 ALT 双试剂具抗干扰作用。甘油三脂测定双试剂37的排除游离甘油的作用，可加入甘油标准液后进行试验，以证实排除 游离甘油的能力。 5.灵敏度 在终点法灵敏度以特定波长下 1cm 光径时单位浓度的吸光 度值表示，如胆固醇酶法测定试剂盒要求其灵敏度 A500nm0.005 时 的胆固醇浓度相当于 0.08mmol/L。连续监测法以特定波长下 1cm 光 径单位酶活性的吸光度值表示，试剂盒质量合格时，其灵敏度值与理 论计算的 ΔA/min×因数值一致。试剂盒的质量与灵敏度密切相关，灵 敏度达不到要求的试剂盒不宜使用。 6.稳定性 试剂盒稳定性是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其性能 指标的期限。 (1)原包装试剂的稳定性 按说明书的保存方法储藏，于不同时期取出 一瓶复溶，测定试剂吸光度值、标准品含量、定值血清含量、线性范 围、酶促反应时间曲线或化学反应速度时间曲线及其他性能指标，直 到这些指标变化超出规定值的 10%以上的期限， 为原包装试剂的稳定 期。 (2)复溶后试剂的稳定性 将复溶试剂分别放在 4℃ 、25℃ 保存，逐日与 新复溶试剂对比，观察上述指标，直到测定结果与新复溶试剂的差 值&10%以上，这一期限为复溶后试剂的稳定期。 (3)不同温度下的保存期 将原包装试剂盒置 25℃ 、37℃ 、45℃ 、4℃ 保 存，以出现说明试剂变质的指标来确定在不同温度下的保存期。 （十） 、试剂盒质量检查与性能评价 1.说明书审查 审查内容包括：① 试剂名称；② 用途；③ 测定原理和技 术要求；④ 试剂盒内的包装内容；⑤ 适用仪器；⑥ 标本要求；⑦ 测定步 骤及注意事项；⑧ 贮存的条件及有效期；⑨ 性能特征，包括准确度、 精确度、特异性、受干扰的程度、线性范围、参考范围；⑩ 生产单位 名称、地址、邮编及电话。382.理学检验与评价 理学检验的内容有：① 外包装应完整牢固，封口严 密，标签清晰；② 有详细的用户说明书，卫生部批准的生产文号，生 产日期，有效期和保存条件；③ 粉剂型应均匀无凝块，不粘附瓶壁； ④ 液体型试剂应无沉淀，无混浊，无渗漏；⑤ 复溶后或液体试剂的 pH 应符合标准规定。 3.性能指标的检验与评价 (1)线性范围的测定 试剂盒的线性范围，既是衡量其质量的重要指 标，也是保证正确使用和鉴定试剂盒的关键指标之一。一旦线性范围 变窄即应废弃。造成线性范围变窄的原因常见的有：① 生产中组份投 料量不足；② 生产后组分稳定性差；③ 运输和贮存不当等。 2.观察时间反应曲线 (1)终点法 ① 试剂空白的吸光度是否符合规定标准，否则会影响测定 的精密度和准确度；② 试剂空白的时间反应曲线应平坦，且无明显波 动，否则，说明试剂本身不稳定，会导致测定偏差；③ 反应能否在规 定的时间内达到平衡， 达到平衡的时间应在终点法读取测定吸光度的 时间之前。反应速度慢的原因，常为试剂中酶量不足或酶质量不好， 或反应条件不是最适条件；④ 反应达到平衡后，吸光度最大并维持不 变，这一期间为反应平衡期，终点法测定应在这一期间读取吸光度。 (2)连续监测法 ① 试剂空白值是否符合规定，吸光度下降型的反应， 试剂空白吸光度应在 1.5 左右，吸光度上升型的试剂空白吸光度越低 越好，不符合说明书中规定值者不宜使用；② 试剂空白的时间反应曲 线应平坦，吸光度变化（△A/min）应≤0.001，若大于此值，表明试剂 本身分解变化，会使测定结果产生误差；③ 延迟期、线性反应期与设 定的实验参数是否相符，若不相符应予修改；④ 观察时间反应曲线的 斜率，通过定值血清，分析试剂盒的灵敏度。当试剂盒中底物浓度不 足，辅助酶或指示酶的酶量不足或质量不好，反应条件不是最适条件39等情况时，时间反应曲线斜率下降，灵敏度低，测定结果有严重比例 误差，这种试剂盒无法纠正，不能使用。 3.稳定性试验 评估试剂盒的稳定性应包括原包装和工作液在试剂盒 指定条件下的稳定性。试剂盒的稳定性与贮存条件密切相关，工作液 的稳定性还和使用中污染与否有关，在评估时，须保持指定贮存条件 并要严防污染。(十一)选购试剂盒的要求和注意事项 1.选购试剂盒的一般要求 (1)所采用的测定方法特异性好，灵敏度、准确度、精密度符合卫生 部临床检验中心、IFCC、WHO 等推荐的方法性能。 (2)试剂盒的储存期至少为 1 年。 (3)水溶性、低粘性、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、不污染环 境。 (4)所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO 推荐的标准和要求。 2.选购试剂盒的注意事项 (1)首先要仔细阅读试剂盒的说明书，对试剂盒选用方法有所了解， 科学研究工作时应选择参考方法试剂盒， 医疗预防工作应选择推荐的 常规方法试剂盒，或选择公认的测定方法试剂盒。此外，对试剂盒的 组成、方法性能指标加以分析，是用于手工操作，还是用于自动分析 仪。 属于后者， 其实验参数是否与本单位自动分析仪的实验参数相符。 (2)有无卫生部的批准文号。凡已列入卫生部临床检验体外诊断试剂 审批管理范围的试剂盒，没有生产批准文号的，不应使用。对有生产 批准文号者，也需考察生产厂家的信誉。 (3)对试剂盒的包装、理学性能、方法学性能指标进行考察和检测，40并经实际应用。符合说明书规定及本室实验要求者方可选购。 (4)根据本单位的日工作量、分析仪试剂用量、试剂复溶后 4℃ 稳定期 等因素综合分析，应选购合适包装，近期出厂的产品。 (5)注意季节对试剂质量的影响。一般在气温较低的季节购买试剂， 防止试剂盒在运输途中变质。 (6)在确保试剂盒质量前提下，应选购价格低的产品。五 课后作业（一）A11、全自动分析仪可用来测定 A.特种蛋白 B.微量元素 C.药物监测分析 D.以上都是 E.以上都不是2、干化学分析使用的仪器是 A.分光光度计 B.反射式分光光度计 C.浊度计 D.比色计 E.荧光计3、以下说法错误的是 A.干化学分析是用反射式光度计测定的 B.管道式分析仪测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反 应，在各自管道中完成41C.分立式分析仪按手工操作的方式编排程序， 各个样品和试剂在各自 的试管中起反应 D.离心式分析仪的化学反应器装在离心机的转子位置 E.自动生化分析仪需要做日保养、周保养、月保养和年保养（二） 、A3/A4 1、某三级甲等医院检验科生化室采用日立 7600 型全自动生化仪，2 个反应模块设置， 反应速度离子 800 项/小时， 比色部分 1600 项/小时。&1&、仪器的标准化发展方向不包括以下哪个方面 A.测定方法 B.校准 C.双试剂 D.通用性能 E.可比性&2&、此分析仪的分析方法不可能的是 A.终点法 B.连续监测法 C.两点法 D.离子选择电极法 E.层析法&3&、此分析仪属于 A.管道式分析仪 B.离心式分析仪42C.干片式分析仪 D.分立式分析仪 E.血细胞分析仪 参考答案 （一） 、A1 1、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：全自动分析仪尚可应用免疫浊度法来测定特种蛋白、 微量元素和药物监测分析。 2、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：采用干式试剂片，用反射式分光光度计检测的方法称 为干化学法。 3、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：管道式分析仪测定项目相同的各待测样品与试剂混合 后的化学反应，是在同一管道中经流动过程完成的。 （二） 、A3/A4 1、 &1&、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：自动分析仪的发展方向之一是标准化，包括测定方法、 校准、通用性能、可比性等。 &2&、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：自动分析仪分析方法有：终点法，连续监测法，两点43法，离子部分多采用离子选择电极法。 &3&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 分立式分析仪是各种样品和试剂在各自试管中起反应， ： 是当今大型生化仪的主流类型。44第五章 检测系统的评价与验证一、学习目的1.熟悉检测系统评价与验证方法 2.熟悉实验室方法分级及量值溯源二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必须完成每章节后面的作业，并以书面形式在集中教学时检 查。 3、结合工作实际。 三、自学学时4 学时四、知识要点（一） 检验方法分类有哪些 、 临床生化检验方法根据其准确度与精密度的不同可以分为决定性 方法、参考方法、常规方法等三级。 1．决定性方法 是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究， 没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。 用于发展及 评价参考方法和一级标准品。 2．参考方法 是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因 素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的 灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法在条件许可的实验室中 应经常使用。用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。 3．常规方法 指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密 度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。这类方法经 有关学术组织认可后可称为推荐方法， 推荐方法应具有足够的实验证 据。45（二）参考物定义及分类 国际标准化委员会将标准品（参考物）的定义暂定为：它的一种或 几种物理或化学性质已经充分确定； 被用于校正仪器或用于评价一种 测定方法的物质，并将其分成三级。 1．一级标准品（原级参考物） 是一种稳定而均一的物质，它的数值 已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已 经定量，且有证书；用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及 为二级标准品定值。 2．二级标准品（次级参考物） 也称校准品，包括用于常规分析的标 准液。这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须用一 级标准品和参考方法并由训练有素的， 能熟练掌握参考方法的操作者 确定； 主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结果计 算。 3．校准品 用二级标准品和常规方法测定得到校准品，用于常规测定 中的标准。 国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具有实用性和可靠性 两方面的性能指标，至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准， 可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。 （1）实用性：一般应具备微量快速，便于急诊；费用低廉；应用安 全。 （2）可靠性：一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范 围。精密度即变异系数（CV%）一般应小于 5%。准确度是指测定值 与&真值&的符合程度，一般偏差系数（CB）应小于 5%。特异性是指 只对待测物质起化学反应，不与其他结构类似的化合物发生反应。检 测能力即&检测限度&或&检出限&。检出限通常是指能与适当的&空白& 读数相区别的待测物的最小量。46（三） 、临床生化检验方法学评价基本内容与要求 方法学评价的基本内容是通过实验途径， 测定并评价方法的精密度 与准确度，在实验中测定的是不精密度与不准确度，无论是精密度还 是准确度，强调的都是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。 精密度评价 1． 目的要求 评价方法给出结果的可重复程度即精密度。 2．评价前的准备 ① 对于评价对象和评价方案均应熟悉。② 实验用试 剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处 于良好的工作状态。③ 实验用标本一般选择 2 个（亦可更多） ，一个 在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值，被测物在疾病 时增高者用高值， 降低者用低值； 实验标本的介质应与临床标本一致， 并应妥善保存，应保证在整个实验过程中稳定。④ 先作一个初步的批 内精密度测定，即一个标本重复测定 20 次，计算出均值，标准差和 变异系数。 3．评价步骤 用 2 个标本每天测定 2 次（2 次测定间隔不得少于 2 小 时） ，每次测定均作双份，共测定 20 天。每次测定至少做一个质控。 准确度评价 1．方法比较试验 目的是评价方法所给出的结果是否准确，在实验的 范围内两方法间的平均差异，并确定偏差。 (1)要求 方法比较试验理论上是两种方法间的差异均作为试验方法 的偏差。因此比较方法应是参考方法或推荐方法，如该测定没有参考 方法或推荐方法亦可用公认的常规方法。但须具备：① 比较试验方法 有更好的精密度。② 干扰影响已知。③ 与试验方法使用相同的计算单 位。 (2)比较前准备 ① 实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和 评价方案。② 实验标本应收集新鲜的正常和异常的临床标本，应有足47够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。 (3)方法比较步骤 ① 样本数至少为 40 个标本， 每个标本用 2 种方法分 别作双份测定。② 每天测定 8 个标本，双份测定时第一次按顺序 1， 2……7，8，第二次 8，7……2，1，共测试 5 天。 2． 回收试验 所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯 分析物的能力。 目的是测定比例系统误差， 以衡量候选方法的准确度。 （1）方法：将被分析的纯品标准液加入样品中，成为分析样品，原 样品加入同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析， 两者测定结果的差值为回收量。 （2）回收率计算：理想的回收率为 100%，如某法测血钙的回收率为 95.7%，有 4.3%的比例误差，表明一个含钙真值为 2.5mmol/l 的标本, 若 用 该 方 法 测 定 , 约 为 2.39mmol/l(2.5× 95.79% ) ， 误 差 为 0.11mmol/L(2.5Χ4.3%)。 （3）注意事项：① 准确吸量； ② 样品中加入标准液后,总的浓度必 须在方法的分析范围内， 一般须加入高、 低不同浓度做回收试验， 中、 计算平均回收率；③ 加入标准液后，最好使实验样品的被测浓度达 到医学决定浓度； ④ 加入标准液的体积一般在 10%以内。若稀释过 大，误差将发生改变，甚至消失。 线性评价 1． 目的要求 线性范围能判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与 设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。 常规方法应具有较宽的 分析范围，一般应覆盖临床可能出现的高值。 2．评价前准备 ① 熟悉仪器、评价方案和试剂。② 评价标本的介质应 与实际测定的标本相一致，理想的标本是病人的低值或高值标本。③ 浓度范围应以分析项目的线性要求为准。线性评价应有 5 个不同浓 度，可选择低值和高值标本各一个，低值标本为 1 号，高值标本为 548号，二者 3：1 混匀为 2 号，等份混匀为 3 号，1：3 混匀为 4 号，2-4 号标本的浓度按下式计算： 标本浓度 = （C1V1 + C5V5）/（V1 + V5）C = 浓度，V = 体积。 干扰试验 1． 目的要求 判断评价方法给出的结果是否受非分析物影响及影响程 度。① 干扰是指在测定某分析物的浓度或活性时，受另一非分析物影 响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰） 干扰物质可 。② 分为内源性（标本中存在的）和外源性（外界污染的）两类。③ 干扰 的机理，可有物理作用、化学作用以及非特异反应等。④ 干扰可能是 造成误差的一个重要原因，如果干扰物是恒定的将引起恒定误差，如 干扰物随病理生理因素影响，将引起随机误差。 2．试验前准备 ① 应做的主要干扰物为病人标本中常常出现的黄疸， 脂血和溶血；某些药物如维生素 C 等；实验常用的抗凝剂，防腐剂 和稳定剂。② 质量保证，不存在系统误差；批内精密度在可接受范围 内；应不存在前后结果的交叉污染；实验过程有质控监督。 3．干扰试验方法 (1)&配对差异&试验:即将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后 分别测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物 浓度与偏差程度的关系。 (2) 用病人标本作偏差分析: ① 本分析用来证实某类病人标本中是否 存在未知的干扰物；进一步肯定加入干扰物实验的结论。② 选择 2 组病人标本，一组含疑似干扰物为测定组，另一组不含疑似干扰物作 为对照组，两组的分析物浓度范围应大致相同，每组标本需 20~40 个。③ 两组样品分别用试验方法和比较方法（参考方法）双份测定， 并在 2 小时内完成。④ 分别比较每组样品，两种方法间的差异，如 测定组有差异，对照组无差异说明存在干扰，如两组均无显著差异说49明不存在干扰。 4．试验步骤 ① 实验材料应选择混合血清 1 份，分成 2 份，1 份加入 干扰物，含量为临床标本中可能出现的最高含量，另一份不加，按比 例混合成 5 个不同干扰物浓度。 （见线性评价）② 每份标本重复测定 n 次。统计分析及评价 1．精密度统计评价 (1) 离群点的检查 如每次双份测定的差值超过初步精密度测定时± 标准差的 5.5 倍（是 99.99%的上限值） ，这时数据为&离群点&，应弃 去或重做。 (2) 统计分析 见计算公式。 例如日平均均值=0.949 , S 日间(B) = 0.033. CV 日间 = B/日平均均值× 100% = 3.48% S 批间（A）= n = 测定天数 CV 批间 = A/日平均均值× 100% = 2.46% S 批内（A）= CV 批内 = S 批内/日平均均值× 100% = 2.23% S总 = CV 总 = S 总/日平均均值× 100% = 4.19% 2．准确度统计评价 (1) 方法内双份测定的离群点检查 计算每一标本的 DX 和 DY 以及 DX′和 DY′。如分别超过 DX 和 DY 以及 DX′和 DY′值的 4 倍为离群 点，应剔除，如出现一个以上离群点，应查找原因，必要时重做。 (2) 试验方法（Y）与比较方法（X）相关性 如 r≥0.975 或 r2≥0.95 说明二法的相关良好。 3．线性评价方法50(1) 测定结果 5 个不同浓度的标本，随机排列，每个标本测定 4 次， 因此标本应有足够的量，并且分析要求在当天完成。 (2) 离群点检查 将每个标本（X1 到 X5）4 次测定的结果排列在 Y1-Y4，如数据超过界限值 P0.05 = 0.765 和 P0.01 = 0.889 为离群点。 (3) 线性评价统计 采用回归分析。 (4) 稀释变异试验 界限值 P0.05 = 0.6841; P0.01 = 0.7814；如&P0.05, 稀释变异为可接受。 (5) 线性失拟检查 界限值 F0.05 = 3.29; F0.01 = 5.42；如& F0.05 说明 线性良好。 4．干扰实验统计评价 计算分析干扰 各组均值 - 未加干扰物相应组的均值 = 干扰值。对 照这一浓度± 1.96 s，可得出某浓度内有无干扰。 如 Bias&允许误差（EA）的临界值（EA 为可允许误差的 95%限度） ， 表明由于干扰物引起的偏差对临床诊断和治疗不产生不良的影响， 是 可以被接受的。（四） 方法学性能评价内涵 方法学性能标准也称分析目标， 由允许分析误差和医学决定水平这 两项内容决定。① 允许分析误差 用 EA 表示，它被规定为 95%样品 的允许误差限度；② 医学决定水平 用 XC 表示，是临床判断结果具 有意义的被分析物浓度。制定的性能标准，既应反映临床应用与解释 结果的要求，称为医学效用限度，又应基本符合实验室所能达到的技 能状态。 候选方法可否被接受，最后根据评价方案中的误差结果进行归纳， 作出判断。任何一项指标大于可允许误差，该方法都不能接受。如果 候选方法被得出可接受性的结论，那么接着就要进行评价后实验，包51括参考值的制定，制定的参考值及其范围应符合以前公认的调查报 告；质控观察，应符合室内质控的要求；临床病例的观察等。最后进 入方法应用阶段。五 课后作业（一） 、A11.用于评价检测系统的分析方法是 A 决定性方法 B 参考方法 C 常规方法 D 经典方法 E 文献方法 2.用于评价及校正参考方法的是 A 质控标准品 B 基准品 C 校准品 D 一级标准品 E 二级标准品 3.根据检测系统评价方案，某候选方法得出可接受性的结论，那么接 着就要进行 A 分析后补充 B 建立质控系统 C 方法应用测试 D 试剂盒的选择与评价 E 评价后实验524.某检测系统经反复测定得出的结果很接近于真值，说明该方法 A 准确度高 B 线性范围宽 C 灵敏度高 D 精密度高 E 重复性好 5.检测系统精密度统计评价时，离群点为每次双份测定的差值超过初 步精密度值± 标准差的 A 2.5 倍 B3倍 C 3.5 倍 D4倍 E 5.5 倍 6.检测系统评价比较试验时的样本数至少为 A 20 个 B 30 个 C 40 个 D 50 个 E 100 个 7.用于发展及评价参考方法和一级标准品的是 A 决定性方法 B 参考方法 C 常规方法 D 经典方法 E 推荐方法 8.性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、特异性和53适当的分析范围，而且经济实用的是 A 决定性方法 B 参考方法 C 常规方法 D 经典方法 E 文献方法 9.评价实验的过程就是评价检测系统的 A 精密度 B 准确度 C 不精密度 D 不准确度 E 误差 10. 反映整个检测系统可重复程度的是 A.总 CB B.批内 CV、 C.批间 CV、 D.日间 CV E.总 CV， 11.检测系统评价方案不包括下列 A 精密度评价 B 准确度评价 C 变异指数测定 D 干扰实验 E 线性评价 12.关于医学决定水平下列哪种说法是错误的 A 又可称之为参考值上限54B 是临床判断结果具有意义的被分析物浓度 C 对于每一医学决定水平都应规定相应的性能指标 D 对于某个项目可以有两个或三个医学决定水平 E 临床上可用来排除某种疾病 13.关于检测系统性能标准，下列说法错误的是 A 由允许分析误差和医学决定水平这两项内容决定 B 根据不同的应用目的而异 C 对于每一医学决定水平都应规定相应的性能标准 D 允许分析误差是 90%样品的允许误差限度 E 制定的性能标准基本符合实验室所能达到的技能状态 14.下列不属于外源性干扰物质的是 A 抗凝剂 B 防腐剂 C 稳定剂 D 治疗药物 E 塞子的污染 15.关于常规方法的性能指标下列说法错误的是 A 常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标 B 实用性一般应具备微量快速、便于急诊、应用安全等优点 C 可靠性一般应具有较高的精密度和准确度 D 精密度即 CV，一般应小于 5% E 检出限通常是指能与适当的&空白&读数相区别的待测物的最大量 （二）A31.国际标准化委员会将标准品的定义暂定为：它的一种或几种物理或 化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或评价一种测定方法的物55质， &1&.一种稳定而均一的物质， ，数值已由决定性方法确定，这种物质 是 A 一级标准品 B 二级标准品 C 标准品 D 质控标准品 &2&..主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结果计 算的物质是 A 一级标准品 B 二级标准品 C 定值血清 D 质控品 &3&..用二级标准品和常规方法测定得到的物质是 A 一级标准品 B 二级标准品 C 标准品 D 质控品 2.精密度评价是检测系统评价方案中的一个项目 &1&..反映精密度好坏的指标是 A 标准误 B 变异系数 C 平均值 D 标准差 &2&..代表整个检测系统可重复程度的是 A 批内变异系数56B 批间变异系数 C 日间变异系数 D 总变异系数 &3&.检测系统评价前的准备不包括 A 对于评价对象和评价方案均应熟悉 B 实验用试剂应是同批次配制 C 去除标本中的主要干扰物 D 先做一个初步的批内精密度测定3.干扰实验是判断评价检测系统给出的结果是否受非分析物的影响 及影响程度 &1&..下列不属于内源性干扰物质的是 A 胆红素 B 脂类物质 C 蛋白质 D 稳定剂 &2&.检测系统干扰实验的实验前准备的质量保证不包括 A 实验过程应由质控监督 B 实验用试剂应是同批次的 C 批内精密度在可接受范围内 D 应不存在前后结果的交叉污染 &3&..干扰实验方法有两种，&配对差异&实验的不足之处是 A 病人通常用多种药物，难以确定干扰物 B 不是所有的参考方法都能在临床实验室中开展 C 参考方法可能受某些物质干扰 D 实验标本的介质可能与病理标本的介质不一样574..对检测系统的干扰实验进行评价， &1&..不论是方法特异性差或是受干扰，其所产生的误差都是 A 操作误差 B 方法误差 C 随机误差 D 系统误差 &2&..偏差等于 A 两组干扰样品测定值之差 B 两组基础样品测定值之差 C 干扰样品测定值与基础样品测定值之差 D 以上都不是 &3&..要使干扰物引起的偏差对临床诊断和治疗不产生不良的影响， 则 A 偏差&EA 的临界值 B 偏差 = EA 的临界值 C 偏差&EA 的临界值 D 偏差≥EA 的临界值 参考答案 （一） 、A1 1、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：评价常规方法和检测系统的是参考方法 2、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：一级校准品是用来评价参考方法或为二级参考品赋值 3、58【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：检测系统评价完后，应进行评价后的检验项目性能测 试到呢个试验项目或质控测试 4、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：接近于真值，表明不准确度低。 5、 【正确答案】 ：E【答案解析】 ： 6、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：比较试验样本数量至少应为 40 7、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：决定性方法是用来评价参考方法和一级标准品的。 8、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：经济适用有适当的灵敏度 精密度的是决定性方法。 9、 【正确答案】E： 【答案解析】 ：总得来说评价试验是评定检测系统的随机误差和系统 误差。 10、 【正确答案】:E59【答案解析】 ：变异系数反映的是系统的精密度，整个检测系统的可 重复程度是总的 CV. 11、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ： 12、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：医学决定水平是对临床疾病进程进展相关的截断值。 13、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：允许分析误差不是指样品，指的是每次分析结果。 14、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：治疗药物既不属于外源性干扰物质也不属于内源性干 扰物质。 15、 【正确答案】 ：E 【答案解析】 ：检出限是检测系统能响应待测物的最低限，反映检测 系统的灵敏度 （二）A3/A4 1、 ,&1&、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：稳定而均一的物质，数值已由决定性方法确定的物质 是一级标准品 ,&2&、60【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：二级标准品是用来评价常规方法的，并为控制品赋值。 ,&3&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：质控品往往是生产厂家以二级标准品和常规方法得到 的物质以用来进行室内质控。 2、 ,&1&、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 ：精密度通过不精密度来评价，变异系数是反映不精密 度的指标。 ,&2&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：反映整个检测系统的可重复程度的当然是总的变异系 数。 ,&3&、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：干扰实验也是评价检测系统误差的一项，如去除了干 扰物，将无法得到准确结果。 3、 ,&1&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：稳定剂是外源性干扰物质。 ,&2&、 【正确答案】 ：B 【答案解析】 干扰试验主要是排除外源性和内源性干扰物质的影响。 ：61,&3&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：基质效应 4、 ,&1&、 【正确答案】 ：D 【答案解析】 ：此误差总是存在，表明是系统误差。 ,&2&、 【正确答案】 ：C 【答案解析】 ：偏差的基本概念 ,&3&、 【正确答案】 ：A 【答案解析】 ：偏差小于总允许误差，是检测系统评价的最终目的。62第六章 酶学分析技术一、学习目的1.熟悉酶活性及单位、常用工具酶和酶学分析技术 2.熟悉诊断酶学应用 3.了解酶促反应动力学二、学习要求 1、要求学生自学要有笔记，按照作业评价指标体系接受检查。 2、必