重组单克隆抗体制备过程哪个牌子好？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-11-03 09:41 标签： 单克隆抗体的制备
用于重组抗体生产的细胞大规模培养技术_百度文库
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【精华】浅谈“用于重组抗体生产的细胞系构建技术”
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这个帖子发布于4年零343天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
笔者根据自己的工作经验和学习心得，将用于重组抗体生产的细胞系构建技术总结如下，欢迎版主加分，同行拍砖！开篇语
构建生产细胞系是重组抗体产业化制备的第一步。目前国际上用于重组抗体生产的工程细胞系表达水平可达20-70pcd。多种动物细胞细胞（如CHO、NS0,SP2/0等）根据其特性的不同，在抗体药物生产中有着不同的应用实例。近年来，工程细胞系的构建技术发展主要集中在以下三个方面：利用细胞工程技术提高宿主的生长、表达能力，新型载体功能元件和定点整合技术克服载体随机整合时发生的“位置效应”，以及应用流式细胞分选术和高通量筛选机器提高了重组细胞的筛选通量和效率。
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用于抗体生产的工程细胞系构建流程抗体分子具备四聚体糖蛋白的复杂分子结构，其胞外表达又遵循着“分泌蛋白”的一般规律：全抗体分子的轻、重链各自翻译后，经折叠、组装，糖基化修饰后才具生物活性。已上市抗体的临床研究也表明，宿主细胞对重组抗体的“翻译后修饰”，直接影响到抗体药物的临床疗效和免疫原性。在常用的异源蛋白表达系统中：大肠杆菌不适合全抗体分子，只能表达单链抗体或者抗体片段；酵母细胞、昆虫细胞、转基因植物等由于缺乏翻译后修饰能力，其所表达的重组抗体与人天然抗体存在着显著的质量差异。只有哺乳动物细胞适宜重组抗体的异源表达。因此，目前已上市的治疗性抗体中，除了少数抗体片段（如：LucentisTM）外，均由哺乳动物细胞生产。用于抗体药物生产的宿主细胞哺乳动物细胞中，CHO、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞、PerC.6、HEK293等均有用于重组抗体生产的实例，这其中CHO、NS0及sp2/0细胞由于具备相对成熟“平台化开发技术”应用较为广泛。上述动物细胞由于其生长、代谢特性的不同，对重组抗体的表达、修饰能力也不尽相同
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“工程细胞”的概念与构建流程用于抗体药物生产的工程细胞系需具备以下特性：生长特性良好，无血清悬浮培养密度高（1~2×107cell/ml）；异源蛋白表达能力强（20~70 PCD），具备正确的翻译后修饰能力；宿主及重组细胞系遗传背景清晰、表型稳定，符合相关法规要求。目前，业内细胞系构建中常用的筛选体系为“Dhfr-”和“GS”系统，基于此技术的工程细胞构建流程如下：携带有目的基因和筛选标记（Dhfr、GS，或其他抗性基因neo、hygro）的质粒转染至宿主细胞后，使用相应的条件培养基筛选出重组细胞。为提高重组细胞的表达水平，可采用加压多轮筛选的策略，增加目的基因拷贝数。初筛得到的候选克隆，经悬浮、无血清驯化后，在反应器中对其生长能力、表达水平，产物质量综合评价，选择具有产业价值的细胞系冻存。最终，建立符合cGMP要求的主细胞库、工作细胞库。
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高表达载体的构建与优化在用于抗体的表达的载体构建过程中，目的基因的简化、轻重链比例优化，顺式作用元件的应用等，都能提高重组抗体的表达水平。这其中载体的构建策略与载体的功能元件，对于细胞的表达能力、遗传稳定性影响最为显著，也是此领域研究的热点。3.1用于全抗体表达的载体构建策略生物合成四聚体IgG结构，需要协调表达抗体分子的轻链、重链基因。以下三种载体构建策略均有用于抗体表达的报道 单顺反子（mon-cistronic）载体轻链、重链基因分别使用不同的载体，共转染至宿主细胞。该策略对质粒要求不高，且转染效率较高，是表达重组抗体最为常用的载体构建策略。也可将轻链基因、重链基因串联到同一载体，分别使用各自的启动子、终止子转录翻译，该方法理论上可实现轻链、重链基因的等摩尔表达。双顺反子（bi-cistronic）载体在载体构建中使用核糖体内部进入位点，在其两端串联轻链、重链基因，可实现轻、重链基因同时转录。也可在载体中使用2A肽结构，在同一阅读框架内表达氢、重链基因。反式互补（trans-complementing）载体表达轻链、重链的两个载体分别含有编码筛选标记DHFR基因的不同序列。只有当含有轻链、重链的两个载体同时转染至宿主细胞时，筛选标记DHFR才能正确表达。以此提高重组细胞的筛选效率。
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重组抗体 内容简介
重组抗体技术使制备人源化抗体和人源抗体成为可能，而这是其他常规的多克隆或单克隆抗体制备方法所不可能做到的。本书共分为22章，向读者介绍了四个方面的技术：抗体库技术，包括组合抗体库、噬菌体抗体库、细菌和酵母展示的抗体库、核糖体展示的抗体库及其抗体库的筛选技术；重组抗体基因的改造和表达，包括抗体亲和力成熟、抗体人源化改造和稳定性改造，以及抗体基因在原核、酵母、昆虫、哺乳动物细胞、植物及转基因动物中的表达；重组抗体效应功能的提高，涉及抗体与同位素、药物、毒素结合的"导向药物"、双特异性抗体、抗体一酶融合蛋白、免疫细胞因子及细胞内抗体；抗体特异性分析和鉴定，主要介绍抗体的分离和纯化、抗体标记技术、抗体亲和力测定、抗体的抗原表位分析、抗体基因测序和结构模建，以及常用的抗体鉴定技术，如ELISA、免疫组化、FACS分析、免疫沉淀和Western blot等。
本书涵盖了当前重组抗体制备和改造中的大部分技术，因此对从事抗体研制的技术人员、生物技术公司及有关专业的大专院校师生均有一定参考价值。
重组抗体 目录
diyi章 抗体基因的克隆
第二章 组合抗体库
第三章 天然噬菌体抗体库构建和筛选技术
第四章 核糖体展示技术
第五章 其队展示技术用于体库的构建
第六章 抗体库的筛选
第七章 抗体亲和力成熟
第八章 抗体人源化改造
第九章 重组抗体的稳定性改造
第十章 抗体表达
第十一章 转基因小鼠产生人源抗体
第十二章 免疫结合物
第十三章 双特异性抗体
第十四章 抗体事例蛋白
第十五章 免疫细胞因子
第十六章 细胞内抗体
第十七章 抗体的分离和纯化
第十八章 抗体标记
第十九章 抗体亲和力测定
第二十章 抗 体的抗原表位分析
第二十一章 抗 体基因测序和结构模建
第二十二章 抗体鉴定技术
出版社-科学出版社 ...更多
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海淀公安分局备案编号：

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