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三叶青总黄酮的提取和纯化工艺研究
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冬奇子口服液总黄酮含量测定及稳定性研究-宋琳琳
第 1 8 卷 ?第 5 期 2016 年 5 月JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM辽宁中医药大学学报Vol. 18 No. 5 May，2016DOI： 10.13194/j.issn.16.05.024<b
r />冬奇子口服液总黄酮含量测定及稳定性研究宋琳琳， 沙靖全， 赵宏， 缪月英（佳木斯大学， 黑龙江 佳木斯 154007） 目的： 以麦冬、 五味子等药材为主药的冬奇子口服液， 对其进行质量标准和稳定性的研究。方法： 采用 摘? 要： 紫外分光光度法对冬奇子口服液中的成分――黄酮进行含量测定； 建立了该制剂中黄酮的含量测定方法。对冬奇 子口服液做影响因素实验， 测定其在高温、 高湿和光照条件下的稳定性。结果： 用紫外分光光度计测定黄酮的含量， 结果： 黄酮的线性范围 6~32 μg/mL， 相关系数 r =0.9993， 加样平均回收率 98.35%（n =5） ， RSD=1.35%， 样品中黄酮 的平均含量为 20.95%； 稳定性实验结果表明， 口服液在高温、 高湿和光照下稳定。结论： 冬奇子口服液质量标准科 学可控， 制剂稳定。 关键词： 冬奇子口服液； 总黄酮； 稳定性 (2016) 05-? 中图分类号： R284 文献标志码： A 文章编号： X?? 0075-?? 03Study on Stability and Flavonoids Content Determination of Dongqizi Oral Liquid SONG Linlin， SHA Jingquan， ZHAO Hong， MIAO Yueying （Jiamusi University， Jiamusi 154007， Heilongjiang， China） Abstract： Objective ： Based primarily medicine to Ophiopogon japonicus and Schisandra of Dongqizi Oral Liquid， carries on the quality specification and stability to it. Methods ： Adopted UV spectrophotometry to determine the content of flavonoids， established the method for determination flavonoids of Dongqizi Oral Liquid， and determined its stability at high temperatures， high humidity and light conditions. Results ： The result is： the flavanone linear scope is 6~32 μg/mL， correlation coefficient is r =0.9993， adds the type returnsratio is 98.35%（n =5） ， RSD=1.35%， the flavanone quality score is 20.95% in sample； Experimental results show it is stable under high temperature， humidity and illumination. Conclusion ： The quality specification science of Dongqizi Oral Liquid is controllable， and the preparation is stable. Keywords： Dongqizi Oral Liquid； flavone； stability 冬奇子口服液是以枸杞、 五味子和麦冬等药材 组成， 具有抗衰老、 提高机体免疫力等功效。枸杞、 五味子和麦冬为冬奇子口服液的主药， 枸杞黄酮类 具有止咳、 平喘、 祛痰之功效， 并能降低血胆固醇， 且 具有明显的抗氧化作用 [1-3]。 本课题以芦丁为对照品， 利用黄酮类化合物的 3， 5- 羟基与 Al3+ 生成络合物， 在可见光区有最大吸 收的特点 [4-5]， 采用紫外分光光度法测定黄酮的含 量， 为建立该口服液的质量标准提供了理论依据。 药物制剂稳定性对保证制剂安全有效是非常重要 的。因此， 我们进行了初步稳定性的研究， 进行影响 因素实验， 包括强光照射、 高温和高湿度实验。本课 题的实验结果为冬奇子口服液的进一步研究提供了 宝贵的资料， 它的研究开发将为人类的健康长寿作 出贡献。1　实验材料 1.1　冬奇子口服液制备 1.2　材料　1.2.1　仪器　KH-100DY 医用超声波清洗器； 惠宝 数码红外炉； FA2004 电子分析天平； 756MC 紫外分 光光度计； RE-52A 旋转蒸发仪。 1.2.2　试剂　 化学试剂均为分析纯； 水为蒸馏水； 芦 丁 标 准 品 由 中 国 生 物 制 品 检 验 所 提 供； 95% 乙 醇、 甲醇、 氢氧化钠、 亚硝酸钠、 硝酸铝、 氯化钠、 硝酸 钾均由哈尔滨市新达化工厂生产。2　方法 2.1　对口服液的主要成分黄酮进行含量测定称取枸杞 30 g、 五味子 50 g、 麦冬 50 g 3 份药材， 于 500 mL 烧杯中加水浸泡静置 24 h。然后将浸泡 24 h 药材的烧杯置于超声波提取器中， 按药材与水 的质量比 1∶3 的比例加水， 然后超声波水提取 3 次， 每次 25 min（50 ℃） ， 最后将提取液浓缩至 130 mL， 得冬奇子口服液成品。2.1.1　对照品溶液的制备　 精密称取芦丁对照品 40.0 mg， 并于 120 ℃干燥至恒重后备用。将干燥后 的对照品置于 100 mL 具塞容量瓶中， 加入适量 60% 乙醇， 并将其溶解， 放冷后用 60% 乙醇稀释至刻度， 摇匀备用。 2.1.2　供试品液的制备　 精密吸取冬奇子口服液 50.00 mL， 用 80 mL 甲醇回流提取 4 h， 冷却， 放置过夜 后过滤， 回收甲醇至干， 用 60% 乙醇定容至 100.00 mL 即得。 2.1.3　吸收波长的选择　以芦丁为对照品测定冬奇 子口服液中总黄酮的含量。精密量取对照品溶液 和试品溶液适量， 分别置于 50 mL 容量瓶中， 加 0.5 mL 0.72 mol/L 亚硝酸钠溶液并摇匀， 放置 6 min 后加收稿日期：
基金项目： 国家自然科学基金项目 （） ； 黑龙江省卫生厅项目 （） 作者简介： 宋琳琳 （1982-） ， 女， 黑龙江佳木斯人， 讲师， 硕士， 研究方向： 天然药物研究与开发。75??辽宁中医药大学学报18 卷1.5 mL 0.47mol/L 硝酸铝溶液并摇匀， 放置 6 min， 加 4.0 mL 1.0mol/L 氢氧化钠溶液再加水至刻度， 摇匀， 放置 15 min， 并在紫外可见分光光度计上做全波长 扫描测定。 2.1.4　标准曲线的绘制　 精密吸取芦丁对照品溶液 0.0 mL、 1.0 mL、 2.0 mL、 3.0 mL、 4.0 mL 分别置 50 mL 容 量瓶中加60%乙醇至 4.0 mL， 加 0.5 mL 0.72 mol/L 亚硝 酸钠溶液并摇匀， 放置 6 min 后加 1.5 mL 0.47mol/L 硝酸铝溶液并摇匀， 放置 6 min， 加 4.0 mL 1.0mol/L 氢氧化钠溶液再加水至刻度， 摇匀， 放置 15 min， 用 第 1 份溶液作空白。 2.1.5　黄酮含量的测定　 精 密 吸 取 各 批 次 （批 号 150608、 150611、 150614） 供试品溶液 5 份， 每份取 5 mL 置于 50 mL 容量瓶中， 按标准曲线绘制方法分 别测定其吸光度 A， 平行测定 3 次。 2.1.6　精密度试验　精密吸取同一批 （批号 150611） 黄酮供试品液 5.0 mL， 按照 “标准曲线的绘制” 项下 方法测定吸光度 A 值， 平行测定 5 次。 2.1.7　稳定性试验　取供试品液 （ 批号 150611） 5 mL， 按照 “供试品液的制备” 及 “标准曲线的绘制” 项下 的方法， 每隔 5 min 测定 1 次吸光度 A 值。 2.1.8　回收率试验　 精密吸取芦丁对照品溶液 1.0 mL、 1.5 mL、 2.0 mL、 2.5 mL、 3.0 mL 分别加入到已 有 5 mL 供试品液 （批号 150611） 的 50 mL 容量瓶中， 按上述标准曲线绘制方法测定吸光度。2.2　冬奇子口服液稳定性的研究表 1　口服液中黄酮的含量测定 （n =3） 批号 620 150622 编号 1 2 3 4 5 含量 （%） 20.93 20.88 21.05 吸光度 0.219 0.215 0.215 0.217 0.214 RSD（%） 0.99 1.28 1.04 平均值 平均含量 （%） 20.95表 2　口服液的精密度试验 （n =5） RSD（%）0.2160.93在平行测定 5 次后， 见表 2， 测得 RSD 为 0.93%， 表明仪器精密度良好。 3.1.5　稳定性试验　见表 3。表 3　口服液溶液的稳定性试验 （n =7） 时间 （min） 0 5 10 15 20 25 30 吸光度 0.220 0.220 0.219 0.219 0.218 0.217 0.216 平均值 RSD（%）0.2180.692.2.1　 高 温 实 验　 将 同 一 批 样 品 （批 号 150614） 置小瓶中， 摊成 5 mm 厚， 分别于 40 ℃和 60 ℃恒 温 箱 内 放 置 10 d， 于 0、 5、 10 d 分 别 取 样 检 查， 和 0 d 样品对比， 记录产品的性状、 色泽和含量的变 化。 2.2.2　高湿实验　 将同一批样品 （批号 150614） 置 小瓶中， 摊成 5 mm 厚， 分别放置于含氯化钠饱和溶 液 （相对湿度为 75%） 及硝酸钾饱和溶液 （相对湿度 为 92.5%） 密闭容器中， 在 25 ℃的恒温条件下放置 10 d， 于 0、 5、 10 d 分别取样检查， 和 0 d 样品对比， 记 录产品的性状、 色泽和含量的变化。 2.2.3　 光 照实 验　 将 同 一 批 样 品 （批 号 150614） 置小瓶中， 摊成 5 mm 厚， 放置于光橱内， 于光照 4000 LX 灯下光照 10 d， 于 0、 5、 10 d 分别取样检查， 和 0 d 样品对比， 记录样品的性状、 色泽和含量的变 化。3　结果 3.1　对口服液的主要成分黄酮进行含量测定每隔 5 min 测定 1 次， 结果见表 3。测得 RSD 为 0.69%， 表明供试品 30 min 内稳定。 3.1.6　回收率试验　 由表 4 可以看出， 本实验数据 通过计算得出平均回收率为 98.35%， RSD 为 1.35%。表 4　回收率试验 （n =5） 编号 1 2 3 4 5 含量 （mg） 0.85 0.85 0.85 0.85 0.85 加入量 （mg） 0.4 0.6 0.8 1.0 1.4 实验测 回收率 值 （mg） （%） 1.21 95.29 1.43 97.65 1.64 98.82 1.84 98.82 2.22 96.47 平均回收 率 （%） RSD （%）98.351.353.2　冬奇子口服液稳定性的研究3.2.1　高温实验　见表 5。表 5　高温实验 时间 性状 性状 内容物色泽 （d） （A） （B） （A） 0 液体 液体 红棕色 5 10 液体 液体 液体 液体 红棕色 红棕色 内容物色泽 （B） 红棕色 红棕色 红棕色 含量 （%） 含量 （%） （A） （B） 99.52 99.65 99.28 99.31 99.31 99.45注： A： 40 ℃， B： 60 ℃。3.1.1　吸收波长的选择　 作全波长扫描测定， 结果 在 500 nm 波长有最大吸收， 故选择 500 nm 波长处测 定黄酮的含量。 3.1.2　标准曲线的绘制　 对所测定结果线性回归， 线性回归方程为 y=5.9， r =0.9993。由测 定数据表明本品在 6~32 mg/mL 的范围内浓度与吸 光度成良好线性关系。 3.1.3　黄酮含量的测定　 按样品测定方法， 对3批 样品 （批 号 150618、 150620、 150622）进 行 测 定。 经 计算， 求得供试品中黄酮的平均含量为 20.95%。见 表 1。 3.1.4　精密度试验　见表 2。实验结果表明： 在本品分别在 40 ℃和 60 ℃高 温条件下放置 10 d， 各项指标均无明显变化。 3.2.2　高湿实验　见表 6。表 6? 高湿实验 时间 性状 性状 （d） （C） （D） 0 5 10 液体 液体 液体 液体 液体 液体 内容物色泽 （C） 红棕色 红棕色 红棕色 内容物色泽 （D） 红棕色 红棕色 红棕色 含量 （%） 含量 （%） （C） （D） 99.52 99.23 98.82 99.58 98.37 97.58注： C： 氯化钠的饱和溶液， D： 硝酸钾的饱和溶液。实验结果表明： 在高湿条件下放置 10 d， 吸湿 性强但仍在 5% 之内， 其它各项指标均无明显变 化。76第 1 8 卷 ?第 5 期 2016 年 5 月JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM辽宁中医药大学学报Vol. 18 No. 5 May，2016DOI： 10.13194/j.issn.16.05.025均匀设计法优选木芙蓉凝胶膏剂处方及其质量标准研究吴玉梅， 陈晓兰， 魏文珍， 缪艳燕（贵阳中医学院， 贵州 贵阳 550002） 目的： 优选木芙蓉透皮凝胶膏剂的基质处方及其质量标准的初步研究。方法： 采用均匀试验设计法， 摘? 要： 以黏附性、 皮肤追随性、 膜残留量和赋形性为评价指标， 对各种成分的用量进行优选， 该文通过对木芙蓉透皮凝胶膏 剂质量控制方法的研究， 确定木芙蓉透皮凝胶膏剂中基质的最佳配比， 初步制定其质量标准。结果： 优选出木芙蓉 透皮凝胶膏剂的最佳配比为： 甘油∶纯水 ∶NP-700∶ 酒石酸 ∶Al （OH） =0.0∶0.1∶0.0051 （质 3 量比） 。木芙蓉透皮凝胶膏剂中芦丁的含量稳定， 为 0.0969 mg?g-1， 其含膏量和赋形性符合要求。结论： 优选的凝 胶膏剂制备工艺稳定可行， 建立的质量控制方法准确、 可靠、 专属性强， 可用于该制剂的质量评价， 为其临床应用提 供参考依据。 关键词： 木芙蓉； 均匀设计法； 质量标准 (2016) 05-? 中图分类号： R284 文献标志码： A 文章编号： X?? 0077-?? 04Optimization of Matrix Formulation of Mutabilis Transdermal Gel Ointments with Uniform Design and Study on Quality Standards WU Yumei， CHEN Xiaolan， WEI Wenzhen， MIU Yanyan （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， Guizhou， China） Abstract： Objective ： To optimize the matrix formulation of Hibiscus transdermal gel ointments with uniform design and the study of its quality standards. Methods ： With adhesion， skin to follow， membrane residue and shaped type as indexes， matrix prescription of Hibiscus transdermal gel ointments were optimized by uniform design method. In this paper， through the study of quality control methods of Hibiscus transdermal gel ointments， to determine the optimal ratio of the paste matrix， formulate its quality standards 3.2.3　光照实验　见表 7。表 7　光照实验 时间 （d） 0 5 10 性状 液体 液体 液体 内容物色泽 红棕色 红棕色 红棕色 含量 （%） 99.22 99.18 98.83实验结果表明： 在强光条件下放置 10 d， 各项指 标均无明显变化。4　讨论高温、 高湿和强光条件下口服液的性状、 内容物的 色泽和含量的变化， 结果显示口服液分别在 40 ℃ 和 60 ℃高温条件下放置 10 d， 各项指标均无明显变 化； 在高温条件下放置 10 d， 吸湿性强但仍在 5% 之 内， 其它各项指标均无明显变化； 在以强光条件下 放置 10 d， 各项指标均无明显变化， 结果表明冬奇子 口服液的稳定性良好。◆参考文献 [ 1 ]
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基金项目： 贵阳中医学院研究生教育创新项目 （ZYY14030） 作者简介： 吴玉梅 （1991-） ， 女， 贵州习水人， 硕士研究生， 研究方向： 中药及民族药药物新制剂及新剂型。 通讯作者： 陈晓兰 （1976-） ， 女， 贵州思南人， 教授， 博士， 研究方向： 中药及民族药药物新制剂及新剂型。77
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黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化
导读：黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化，摘要采用乙醇回流提取法,以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为试剂、芦丁为对照测定黄芩中，在单因素试验的基础上,以正交试验法对黄芩总黄酮的提取工艺进行优化研究，黄芩中总黄酮最佳提取工艺条件为:乙醇浓度60%、回流时间3.5h、料液比为1∶5，试验方法简单、方便、结果准确、可靠、最佳条件适合批量生产中该药材的提取，关键词黄芩;总黄酮;提取工艺;正交试验，2.4黄酮含量第28卷,第3期2011年5月光　谱　实　验　室ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryVol.28,No.3May,2011黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化张春云　谢伟刚　张雅丽　吴冬青　任雪峰　杨自嵘(河西学院化学系　甘肃省张掖市甘州区北环路87号　734000)??摘　要　采用乙醇回流提取法,以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为试剂、芦丁为对照测定黄芩中总黄酮的含量。在单因素试验的基础上,以正交试验法对黄芩总黄酮的提取工艺进行优化研究。黄芩中总黄酮最佳提取工艺条件为:乙醇浓度60%、回流时间3.5h、料液比为1∶50、回流温度60℃,在最佳条件下的黄酮含量为18.225mg/g。试验方法简单、方便、结果准确、可靠、最佳条件适合批量生产中该药材的提取。关键词　黄芩;总黄酮;提取工艺;正交试验中图分类号:O657.32　　　文献标识码:B　　　文章编号:11)03-1253-051　引言黄芩(RadixScutellariae)为唇形科(Labiatae)植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。味苦、寒。具有清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎之功效[1]。临床上用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染、菌痢、肝炎、高血压等病症。其主要有效成分为黄芩苷(Baicalin)、黄芩苷元(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)和汉黄芩苷(Wogonoside)等黄酮类化合物[3]。近年来的药理研究发现,黄芩中的黄酮成分具有显著的抗氧化、清除自由基、抑制肿瘤、抗艾滋病毒以及对心脑血管收缩和松弛的双向调节等独特功效[4,5]。[2]2　实验部分2.1　材料黄芩:采自甘肃省定西市。将黄芩用蒸馏水洗净后切片,置于烘箱(40℃)烘干至恒重,研碎后过60目筛备用。2.2　主要试剂芦丁(Rutin):中国药品生物制造品检定所;无水乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠等各种试剂均为分析纯。实验用水为蒸馏水,所用仪器均经自来水,蒸馏水清洗备用。2.3　主要仪器GB204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];RE-52C型旋转蒸发仪(巩义市英峪予华仪器厂);SHB-Ⅲ型水循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);DK-98-Ⅱ型电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司);WFJ-2100型分光光度计[尤尼柯(上海)仪器有限公司];DGX-9143B-1电热鼓风干燥箱(上海福玛实验设备有限公司)。??联系人,手机:(0);E-mail:yzrmm@作者简介:杨自嵘(1976―),男,甘肃省张掖市人,讲师,主要从事化学教学与科研工作。收稿日期:;接受日期:254光谱实验室第28卷2.4　黄酮含量测定原理及鉴定方法2.4.1　测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮醇苷两大部分。在黄酮类化合物溶液中加人铝离子试剂后,黄酮类化合物中的酚羟基与A13+生成络合物,控制适宜的pH值,所生成的络合物在可见光区能获得特征吸收峰,其质量浓度与吸光度符合比耳定律,可以定量测定。2.4.2　黄酮类物质的鉴定方法2.4.2.1　金属盐类试剂的络合反应盐酸-锌粉反应:在样品液中加入少量锌粉,再滴加1―2滴浓盐酸,在沸水中加热3min,观察反应结果。铝盐反应:在样品液中滴加1%AlCl3溶液,观察反应结果。硝酸铅反应:在样品液中滴加少量1%硝酸铅溶液,观察反应结果。2.4.2.2　碱性试剂显色反应在样品液中加入5%NaNO2溶液;摇匀,旋转6min后,加入等体积10%Al(NO3)3溶液,6min后再加入4%NaOH溶液,混匀,用65%乙醇稀释,观察反应结果。2.4.3　单因素试验[8]2.4.3.1　用不同乙醇浓度进行提取准确称取一定量黄芩药品9份于100mL的圆底烧瓶中,分别加入3.00mL45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%的乙醇,置于60℃恒温水浴中回流提取1h,趁热过滤,将滤渣继续回流,重复3次,将3次滤液合并,移入100mL的容量瓶中,用该浓度的乙醇定容至刻度。测定吸光度。2.4.3.2　用不同料液比进行提取准确称取一定量黄芩药品6份于100mL的圆底烧瓶中,分别按料液比分别为1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70加入60%的乙醇,在60℃恒温水浴中,回流提取1h,趁热过滤,将滤渣继续回流,重复3次,将3次滤液合并,移入100mL的容量瓶中,用浓度为60%的乙醇定容至刻度。测定吸光度。2.4.3.3　用不同回流温度进行提取准确称取一定量黄芩药品11份于100mL的圆底烧瓶中,分别加入3.00mL60%的乙醇置于20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70℃恒温水浴中提取1h,趁热过滤,将滤渣继续回流,重复3次,将3次滤液合并,移入100mL的容量瓶中,用浓度为60%乙醇定容至刻度。测定吸光度。2.4.3.4　用不同回流时间进行提取准确称取一定量黄芩药品8份于100mL的圆底烧瓶中,分别加入60%的乙醇3.00mL,置于60℃恒温水浴中,分别提取0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h趁热过滤,将滤渣继续回流,重复3次,将3次滤液合并,转移至100mL的容量瓶中,用浓度为60%乙醇定容至刻度。测定吸光度。2.4.4　正交试验[9,10]4[7][6]根据单因素试验结果,选择乙醇浓度,料液比,回流温度及回流时间为参考因素,采用L9(3)正交试验设计,见表1。第3期张春云等:黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化1255表1　正交试验因素水平表因素水平123A乙醇浓度(%)606570B回流时间(min)2.533.5C料液比(g/mL)1∶301∶401∶50D回流温度(℃)5560652.5　实验方法2.5.1　总黄酮提取工艺流程及含量的测定称取一定量黄芩置于圆底烧瓶中,按不同料液比,加入一定量65%的乙醇,在一定温度和一定时间下回流提取,趁热抽滤,用少量的乙醇提取剂回流提取数次,合并滤液,转移到100mL的容量瓶中,以同浓度的乙醇定容。以芦丁为标准品,采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法测定。总黄酮提取率按下式计算:总黄酮提取率(mg/g)=2.5.2　校准曲线的绘制2.5.2.1　芦丁标准溶液的配制准确称取芦丁标准试剂0.0105g,用65%的乙醇溶解,转入50mL的容量瓶中,并用同浓度的乙醇定容。C=0.2100mg/mL。2.5.2.2　测定波长的选择取上述芦丁标准溶液5.00mL,置于10mL具塞试管中,加入0.3mL5%的亚硝酸钠溶液,放置6min,然后再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL,放置6min,再加入4.00mL4%的氢氧化钠,用65%乙醇稀释至刻度后混匀,放置15min,以空白试剂为参比,测定波长400―600nm区段的吸光度,得知芦丁最大吸光度在504nm,因此分光光度法选测波长为504nm。2.5.2.3　校准曲线的绘制准确吸取上述芦丁标准溶液0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50mL分别置于6支10mL的具塞试管中,加入0.30mL5%的亚硝酸钠溶液,放置6min,然后再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL,放置6min,再加入4.00mL4%的氢氧化钠,用65%乙醇稀释至刻度后混匀,放置15min,以空白试剂为参比,在504nm处测定吸光度。结果为图1。提取物中总黄酮质量原料质量图1　芦丁校准曲线图2　乙醇浓度对提取率的影响1256光谱实验室第28卷3　结果与讨论3.1　黄酮类化合物的鉴定显色反应结果见表2,表明黄芩中含有黄酮类化合物。表2　显色反应结果试剂现象盐酸-锌粉黄→橙1%AlCl3黄色硝酸铅黄色沉淀4%NaOH橙红色3.2　单因素试验结果3.2.1　乙醇浓度对提取率的影响由图2可知最佳的乙醇浓度为65%。3.2.2　料液比对总黄酮提取率的影响由图3可知最佳的料液比1∶40。3.2.3　回流温度对总黄酮提取率的影响由图4可知最佳的回流温度为60℃。3.2.4　回流时间总黄酮提取率的影响由图5可知最佳的回流时间为3h。图3　料液比对提取率的影响图4　回流温度对黄芩总黄酮提取率的影响图5　回流时间对提取率的影响3.3　正交试验结果经表3极差分析表明:本实验所设计的乙醇浓度、回流温度、回流时间、料液比4种因素对黄芩总黄酮的提取率都有显著影响。各因素对提取率的影响程度各异,影响因素的主次顺序为:A>D>C>B,即乙醇浓度对提取率影响最大,其次为料液比、回流温度,回流时间对实验结果影响最小。最佳提取工艺条件为:A1B3C3D2,即乙醇浓度60%、回流时间3.5h、料液比为1∶50、回流温度60℃。4　结论本研究表明:黄芩中含有黄酮类化合物,影响黄芩总黄酮提取的主要因素是乙醇浓度,其次为料液比、回流温度、回流时间对实验结果影响最小。主次顺序为:A>D>C>B。优选方案为A1B3C3D2,即乙醇浓度60%、回流时间3.5h、料液比为1∶50、回流温度60℃,在此条件下进行了5份样品的提取,所得总黄酮平均提取率为18.225mg/g,RSD=1.48%,说明本方法提取率高,稳定性好。第3期张春云等:黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化1257表3　正交实验L9(34)结果分析试验号K2K3k1k2k3RA....855B....969C....990D....644总黄酮提取率(mg/g)18.....575参考文献[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部[M].北京:化学工业出版社,2.[2]李云霞,索全伶,贺文智等.黄芩有效成分的紫外-可见吸收光谱表征[J].光谱学与光谱分析,):131―134.[3]庄瑞.黄芩苷提取条件的实验设计[J].数理医药学杂志,):336―337.[4]陈柏君,高山林,余国奠.黄芩及其同属药用植物研究进展[J].中国野生植物资源,):20―24.[5]胡世林,冯学峰.黄芩研究的某些新进展[J].中国药学杂志,):728.[6]努尔阿米娜?阿尤甫,阿不都拉?阿巴斯.曼陀罗种子中总黄酮含量测定及提取工艺的研究[J].食品科学,):260―263.[7]吴立军.天然药物化学[M].第5版.北京:人民卫生出版社,1.[8]任雪峰,吴冬青,王永生等.超声波法提取迎春花总黄酮含量的工艺研究[J].光谱实验室,):250―253.[9]刘利,潘一乐.春秋桑叶总黄酮含量分析及提取工艺优化[J].食品科学,):72―75.[10]任雪峰,吴冬青,王永生等.人参果多糖超声提取工艺的研究[J].食品研究与开发,):9―11.DeterminationandOptimizationofExtractionTechnologyofFlavonoidsinScutellariaBaicalensisGeorgiZHANGChun-Yun　XIEWei-Gang　ZHANGYa-Li　WUDong-QingRENXue-Feng　YANGZi-Rong(DepartmentofChemistry,HexiUniversity,Zhangye,Gansu734000,P.R.China)Abstract　Theflavonoidsinscutellariabaicalensisgeorgiwereextractedwithethanolassolvent,sodiumnitrite,aluminiumnitriteandsodiumhydroxideasindicator,rutinascontrolsample.Theoptimalconditionsfortheextractionofflavonoidsinscutellariabaicalensisgeorgiwerestudiedby4orthogonaltest.AnorthogonaltesttabalL9(3)wasusedwiththefactorsofconcentrationofextractingsolution,temperature,timeandsolid-liquidratio.Thecontentofflavonoidswasdeterminedbyspecophotometry.Theoptimumtechnologywasasfollow:theethanolconcentrationof60%,theratioofmassofrawmaterialtothevolumeofsolvent(solid-liquidratio)of1∶50,refluxingtimeof3.5handrefluxingtemperatureof60℃.Accordingtotheconditionsmentionedabove,flavonoidswereextractedefficientlyandtheextractionrateoftheflavonoidscouldreach18.225mg/g.Themethodissimple,convenient,andcanbeappliedtoextractflavonoidsinlargescale.Keywords　ScutellariaBaicalensisGTotalFExtractionTOrthogonalTest包含总结汇报、农林牧渔、表格模板、出国留学、自然科学、医药卫生、外语学习以及黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化等内容。
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