大肠杆菌细胞裂解液破碎液可以加在面膜里吗

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[供应]生产型高压细胞破碎仪、高压均质机、大肠杆菌均质机
供应商:楚业生物科技上海有限公司
价格:面议
数量:大量
包装:木质包装
产地:上海
姓名:张攀登
(销售工程师)
有效期至:
信息发布: 16:00,审核通过:
16:04,审核人员工号:G0266, 已被浏览4次
高压均质机
NanoFast NF-300
300-500升ml
适用范围:
高校、科研所、药厂、高新技术公司、生物制品所、保健品、化妆品、食品、药品、化工等
产品主要特点:
NanoFast NF-300生产型高压均质机
工作压力:0-30000PSI
最大处理量:300L/h
最小样品量:3L
泵动力源:380V,50Hz,22.0kW
& MORGEC高压均质机应用
& &1.生物细胞破壁:大肠杆菌、酵母/灵芝孢子、霉菌,藻类、真菌、动植物细胞破碎;
& &2.样品纳米均质化:微乳、脂质体、分散剂、纳米粒、纳米混悬液,脂肪乳以及各种需要油水相乳化等
& &3.化工:化妆品、纳米材料、纳米晶体、纳米乳液、香精香料等
& &4.食品。
& &5.石墨烯、墨水、染料、竹纤维、 碳纳米管、氧化钛、二硼化钛、氧化镍等
良好的均质重现性和稳定性
可选配温度控制系统
产品通道采用特殊的锥面密封,方便拆卸,无易损垫片,无死角,完全避免二次污染
机体组件由医药级不锈钢制成。耐酸、耐碱、耐高温、防腐蚀、耐磨性强
适用于脂肪乳,脂质体,脂质纳米粒和纳米混悬剂等产品
可进行在线清洗和在位灭菌。产品全程可以以SIP高压灭菌或蒸汽灭菌,包括所有过湿部件。
产品符合卫生级符合GMP标准
设备的安全系数大于等3
设备可短暂地超压20%运行
核心部件有陶瓷、金刚石等材料
& & MORGEC拥有实验型、中试型、生产型高压纳米均质机供选择,流量从5升每小时到2000升每小时,
最高工作压力可达3100Bar(310MPa)的超高压纳米均质机。从产品预处理到均质后匀化处理,MORGEC可提供一系列的服务。
& & MORGEC美国及日本,加拿大进口高压均质机原理:Sample先以高压低流速的状态进入均质阀,产生超剧烈的能量,此能量伴随着剪切、空穴及撞击三效应将固体颗粒、细胞粉碎。
& &楚业生物科技(上海)公司,长期为客户提供多种MORGEC高压均质机、均质机、均质器、实验型均质机、微射流均质机、中型高压均质机、控温型均质机、进口均质机、进口高压均质机、均质仪、细胞破碎仪、高压细胞破碎仪、控温型细胞破碎仪、细胞破碎仪、过滤挤出器、脂质体挤出仪、脂质体挤出器、脂质体过滤挤出器、手推式挤出仪、中试过滤挤出器、生产型过滤挤出器、过滤挤出器生产型方案、里瓦泵过滤挤出器整体方案与操作、无菌挤出器等设备、乳化机, 分散机, 胶体磨, 高剪切乳化机,实验室乳化机,气流粉碎机、乳化泵, 均质泵,以及多种服务、如均质机维修、均质机售后服务、均质机报价、均质机参数、均质机结构、均质机选型、生产型高压均质机方案、均质机使用方法、均质机做样等。
& & &&楚业生物科技(上海)有限公司
电话: 86-021- &手机:
传真: 86-021-
地址: 上海·上海市青浦区盈秀路155-1号3楼
邮编: 201700
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&品牌:IKN &适用物料:药物 &进料粒度≤:1000 mm&&出料粒度:1 mm&型号:CMSD2000 &应用领域:医药 &&生产能力:1000 kg/h&主轴转速:15000 r/min&电机功率:22 KW&&外形尺寸:1-1-1 m&重量:200 kg&粉碎程度:超细磨粉 &&物料含水量:10 &最大物料硬度:7 &&
大肠杆菌破碎胶体磨,大肠杆菌破碎粉碎机,大肠杆菌破碎超声,由电动机通过皮带传动带动转齿(或称为转子)与相配的定齿(或称为定子)作相对的高速旋转,被加工物料通过本身的重量或外部压力(可由泵产生)加压产生向下的螺旋冲击力,透过胶体磨定、转齿之间的间隙(间隙可调)时受到强大的剪切力、摩擦力、高频振动等物理作用,使物料被有效地乳化、分散和粉碎,达到物料超细粉碎
大肠杆菌破碎大肠杆菌细胞破碎后的液体中含蛋白质40-70%,核酸10-30%,多糖2-10%,脂类10-15%。该液体之所以显黏性是由细胞破碎后核酸释放出来造成的。可以加入DNase来消化掉核酸污染。
大肠杆菌是人和许多动物肠道中***主要且数量***多的一种细菌,周身鞭毛,能运动,无芽孢。主要生活在大肠内
1、大肠杆菌是细菌,属于原核生物;具有由肽聚糖组成的细胞壁,只含有核糖体简单的细胞器,没有细胞核有拟核;细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
2.大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
3.人体与大肠杆菌的关系:在不致病的情况下(正常状况下),可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系);在致病的情况下,可认为是寄生。
4.在培养基培养时无需添加生长因子,向培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌,菌落呈深紫色,并有金属光泽,可鉴别大肠杆菌是否存在。
5.大肠杆菌在生物技术中的应用:大肠杆菌作为外源基因表达的宿主,遗传背景清楚,技术操作简单,培养条件简单,大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用***广泛,***成功的表达体系,常做高效表达的首选体系。
6.大肠杆菌在生态系统中的地位:假如它生活在大肠内,属于消费者,假如生活在体外则属于分解者。
7.它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子,同时可以有多个环状质粒DNA。
8.大肠杆菌细胞的拟核有1个DNA分子,长度约为4 700 000个碱基对,在DNA分子上分布着大约4 400个基因,每个基因的平均长度约为1 000个碱基对。
大肠杆菌破碎胶体磨,采用集中方式
细胞破碎的方法主要分为化学法和机械法两大类。具体如下:
渗透冲击破碎法
& 方法:渗透压冲击是较温和的一种破碎方法,将细胞放在高渗透压的溶液中(如一定浓度的甘油或蔗糖溶液),由于渗透压的作用,细胞内水分便向外渗出,细胞发生收缩,当达到平衡后,将介质快速稀释,或将细胞转入水或缓冲液中,由于渗透压的突然变化,胞外的水迅速渗入胞内,引起细胞快速膨胀而破裂。
反复冻融法
& 方法:将细胞放在低温下冷冻(约-15℃,然后在室温中融化,反覆多次而达到破壁作用。由于冷冻,一方面能使细胞膜的疏水键结构破裂,从而增加细胞的亲水性能,另一方面胞内水结晶,形成冰晶粒,引起细胞膨胀而破裂。对于细胞壁较脆弱的菌体,可采用此法。
大肠杆菌破碎胶体磨,
的细化作用一般来说要强于均质机,但它对物料的适应能力较强(如高粘度、大颗粒),所以在很多场合下,它用于均质机的前道或者用于高粘度的场合。&
研磨式分散机是由胶体磨,分散机组合而成的高科技产品。
第一级由具有精细度递升的三级锯齿突起和凹槽。定子可以无限制的被调整到所需要的与转子之间的距离。在增强的流体湍流下,凹槽在每级都可以改变方向。
第二级由转定子组成。分散头的设计也很好地满足不同粘度的物质以及颗粒粒径的需要。在线式的定子和转子(乳化头)和批次式机器的工作头设计的不同主要是因为在对输送性的要求方面,特别要引起注意的是:在粗精度、中等精度、细精度和其他一些工作头类型之间的区别不光是指定转子齿的排列,还有一个很重要的区别是不同工作头的几何学特征不一样。狭槽数、狭槽宽度以及其他几何学特征都能改变定子和转子工作头的不同功能。根据以往的惯例,依据以前的经验指定工作头来满足一个具体的应用。在大多数情况下,机器的构造是和具体应用相匹配的,因而它对制造出***终产品是很重要。当不确定一种工作头的构造是否满足预期的应用。
CMD2000系列的线速度很高,剪切间隙非常小,这样当物料经过的时候,形成的摩擦力就比较剧烈,结果就是通常所说的湿磨。定转子被制成圆椎形,具有精细度递升的三级锯齿突起和凹槽。定子可以无限制的被调整到所需要的与转子之间的距离。在增强的流体湍流下,凹槽在每级都可以改变方向。高质量的表面抛光和结构材料,可以满足不同行业的多种要求。
研磨分散机应用领域:
化学工业:油漆、颜料、染料、涂料、润滑油、润滑脂、柴油、石油催化剂、乳化沥青、胶粘剂、洗涤剂、塑料、玻璃钢、皮革、白炭黑,二氧化硅,钛白粉,炭黑,石墨烯,碳纳米管,富勒烯,凝胶,溶胶,压裂液 催化剂 纤维 &等。&
食品工业:芦荟、菠萝、芝麻、果茶、冰淇淋、月饼馅、奶油、果酱、果汁、大豆、豆酱、豆沙、花生奶、蛋白奶、豆奶、杏仁露、核桃露、乳制品,麦乳精、香精、各种饮料 花生酱、豆瓣酱、香菇酱、辣酱、酱虾酱,蛋黄酱,沙拉酱,奶酪 食用菌丝,大豆蛋白粉 豆粕等
日用化工:牙膏、洗涤剂、洗发精、鞋油、高级化妆品、沐浴精、肥皂、香脂 BB霜等。
医药工业:各型糖浆、营养液、中成药、膏状药剂、生物制品、鱼肝油、花粉、蜂皇浆、疫苗、各种药膏、各种口服液、针剂、注射液,混悬注射液,脂肪乳,静滴液,乳化猪皮,胶囊,微球,口服混悬液,动物组织破壁,纤维素 等。&
建筑工业:各种涂料。包括内外墙涂料、防腐防水涂料、冷瓷涂料、多彩涂料、陶瓷釉料等。&
其它工业:塑料工业、纺织工业、造纸工业、煤炭浮选剂、纳米材料等行业优质环保的生产需要 。
新能源材料:石墨烯、石墨烯涂料、石墨烯超级电容、石墨烯润滑油、& 碳纳米管 、碳纤维、&& 锂电池浆料、电池隔膜 润滑油等等
设备等级:化工级、卫生I级、卫生II级、无菌级
电机形式:普通马达、变频调速马达、防爆马达、变频防爆马达、
电源选择: 380V/50HZ、220V/60HZ、440V/50HZ
电机选配件: PTC 热保护、降噪型
研磨分散机材质:SUS304 、SUS316L 、SUS316Ti,氧化锆陶瓷
研磨分散机选配:储液罐、排污阀、变频器、电控箱、移动小车
研磨分散机表面处理:抛光、耐磨处理
进出口联结形式:法兰、螺口、夹箍
研磨分散机选配容器:本设备适合于各种不同大小的容器
研磨分散机
入口/出口连接
CMD 2000/4
CMD 2000/5
CMD 2000/10
CMD 2000/20
CMD 2000/30
DN150/DN125
CMD2000/50
DN200/DN150
*流量取决于设置的间隙和被处理物料的特性,同时流量可以被调节到***大允许量的10%。
1 表中上限处理量是指介质为&水&的测定数据。
2 处理量取决于物料的粘度,稠度和***终产品的要求。
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>>>大肠杆菌在生长时,细胞内钾离子的质量分数是培养液的3000倍。如..
大肠杆菌在生长时,细胞内钾离子的质量分数是培养液的3000倍。如果在培养液中加入某种不影响大肠杆菌细胞能量供应又不影响细胞完整性的药物,大肠杆菌细胞内钾离子的质量分数立即下降,那么这种药物的作用是
A.破坏了细胞膜的结构 B.抑制了细胞内对钾离子的利用 C.破坏了细胞内的遗传物质 D.抑制了细胞膜上载体的活性
题型:单选题难度:偏易来源:河北省期末题
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据魔方格专家权威分析,试题“大肠杆菌在生长时,细胞内钾离子的质量分数是培养液的3000倍。如..”主要考查你对&&物质跨膜运输的方式&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下:
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因为篇幅有限,只列出部分考点,详细请访问。
物质跨膜运输的方式
物质跨膜运输的方式:1、被动运输:物质进出细胞是顺浓度梯度的扩散,叫做被动运输,包括自由扩散和协助扩散。(1)自由扩散:物质通过简单的扩散进出细胞的方式。(如:O2)(2)协助扩散:进出细胞的物质借助载蛋白的扩散方式。(葡萄糖进出细胞的方式)2、主动运输:有能量消耗,并且需要有载体的帮助进出细胞的方式。(小分子物质、离子)3、胞吞和胞吐:大分子颗粒物质进出细胞的方式。物质进出细胞方式的比较:1、小分子和离子进出细胞的方式
2、大分子物质和颗粒进出细胞的方式&(2)结构基础:细胞膜的流动性。 (3)条件:二者都需要消耗能量。 易错点拨:1、上表中“高浓度”“低浓度”是指运输的离子或小分子本身的浓度,而不是它们所处溶液的浓度。2、被动运输的动力来自于细胞内外物质的浓度差,主动运输的动力来自ATP。 3、胞吞和胞吐进行的结构基础是细胞膜的流动性。胞吞和胞吐与主动运输一样也需要能量供应,如果分泌细胞中的ATP合成受阻,则胞吐不能继续进行。 4、载体是细胞膜上的一种蛋白质,不同物质分子的运输载体不同,即载体具有专一性,不同生物细胞膜上的载体的种类和数目不同。 5、在低浓度时,物质通过细胞膜的速度,协助扩散要比自由扩散快得多,这是由于细胞膜上有载体蛋白能与特定的物质结合。 6、主动运输能够保证细胞按照生命活动的需要,主动地选择吸收所需要的物质,排出代谢所产生的废物和对细胞有害的物质,是一种对生命活动来说最重要的物质运输方式。7、抑制某载体蛋白活性,则只会导致以该载体蛋白转运的物质运输停止,对其他物质运输不影响。 8、若抑制呼吸作用,所有以主动运输跨膜的物质运输都会受到抑制。 知识拓展:一、影响物质跨膜运输的因素1.自由扩散中物质运输速率和浓度梯度的关系&(1)甲图中物质从浓度高的一侧通过细胞膜向浓度低的一侧转运,不消耗能量也不需载体协助,所以此图是指物质通过细胞膜时的自由扩散过程。(2)可以预测,甲图中随着细胞膜外物质浓度的降低,自由扩散的速率会越来越慢。(3)甲图中箭头表示当细胞外物质的浓度高于细胞内时的物质转运方向。(4)乙图表示物质的运输速率与物质浓度差呈正比关系,说明自由扩散过程只受物质浓度差的影响。2.协助扩散中物质运输速率和浓度梯度的关系&(1)A图代表协助扩散过程,物质从高浓度向低浓度转运,不消耗能量,但需要载体蛋白协助。 (2)可以预测,A图中物质转运速率会受细胞膜上载体蛋白的制约,如B图ab段,即物质浓度再大,物质运输速率也不再增加。 (3)B图Oa段随浓度的升高,物质运输速率逐渐加快,说明此段的限制因素是物质浓度梯度,而载体蛋白是充足的。
&3.主动运输中物质的运输速率与氧分压的关系(1)由A图可判断为主动运输,因为此物质的运输是由低浓度到高浓度,并且需要能量和载体蛋白。(2)B图中,a点表示氧气浓度为零时,也可发生主动运输(所需能量来自无氧呼吸);ab段表示随氧分压的升高,物质运输速率逐渐增加,此时,限制物质运输速率的直接因素是能量;bc段随氧分压的升高,物质运输速率不再增加,此时限制物质运输速率的直接因素是细胞膜上载体蛋白的数量。 (3)由C图可知,主动运输中物质运输的方式既可逆浓度梯度,也可顺浓度梯度。 二、物质跨膜运输层数的分析判断 1.物质在细胞内不同细胞器之间的跨膜分析 (1)线粒体与叶绿体之间的跨膜 O2 由产生场所到利用场所共跨4层膜。 (2)分泌蛋白形成过程中的跨膜问题 ①内质网上核糖体合成肽链后,肽链直接进入内质网中加工,不跨膜; ②蛋白质在内质网中完成初步加工后,经“出芽”形成囊泡与高尔基体融合,不跨膜; ③高尔基体对蛋白质进一步加工后,成熟蛋白也以囊泡形式分泌,并与细胞膜融合,以胞吐方式分泌出细胞,整个过程均不跨膜。 2.血浆、组织液等内环境与细胞之间的跨膜分析 (1)几种由单层细胞形成的结构人体中有很多由单层细胞构成的管状或泡状结构,如毛细血管、毛细淋巴管、小肠绒毛、肺泡、肾小球和肾小管等,这些非常薄的结构有利于物质交换,物质透过这些管壁或泡壁时,要经过两层细胞膜。 (2)物质由血浆进入组织液的跨膜葡萄糖、氧气等物质从血浆进入组织液,经过组织处的毛细血管,至少要跨毛细血管壁(一层上皮细胞,共2层细胞膜)。 (3)物质由组织液进入细胞的跨膜物质由组织液进入细胞的跨膜,要分析该物质具体在细胞中被利用的场所,然后计算出跨膜层数。如葡萄糖利用的场所是细胞质基质,因此组织液中的葡萄糖只跨 1层膜,进入细胞质基质即被利用。氧气利用的场所在线粒体内膜上,它要跨3层膜,进入线粒体中被利用。 3.体外环境与血浆之间的跨膜分析 (l)物质由体外环境(肺泡、小肠等)进入血浆,至少要跨1层上皮细胞和1层毛细血管壁细胞,即要跨4层膜,才能进入到血浆中。 (2)物质进入血浆后,由循环系统转运到全身各处,该过程不是跨膜。例&& 外界空气中0:进人人体细胞中被利用,至少要穿过的生物膜层数是(&& ) A.5层& B.10层& C.11层& D.12层思路点拨:氧气经过肺泡壁细胞(2层膜)+肺部毛细血管壁细胞(2层膜)+红细胞进和出(2层膜)+组织处毛细血管壁细胞(2层膜)+组织细胞膜(1层膜)+线粒体(2层膜) =11层。答案C
发现相似题
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772228193077255928348690190457细胞破碎方法综述;09生物工程(2)班张蒙蒙;摘要;细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细;关键词:细胞破碎;细胞壁;细胞膜;细胞破碎方法;一、前言;随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生;二、正文;不同的细胞器破碎的方法是不同的,因此细胞的分离方;下面就将介绍几种细胞破碎的方法;2.1机械法;2.1.1组织捣碎机;主要通过机械切力的作用
细胞破碎方法综述
09生物工程(2)班 张蒙蒙
细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。本文通过数种细胞破碎方法的介绍,阐述了细胞破碎的意义以及重要性,也指出了细胞细胞破碎最新最权威的新技术。
关键词:细胞破碎;细胞壁;细胞膜;细胞破碎方法
随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质的飞跃。动物细胞培养的产物有的分泌在细胞外,动物细胞培养的产物大多分泌在细胞外培养液中,微生物的代谢产物有的分泌在细胞外,也有许多是存在于细胞内部,例如大肠杆菌表达的基因工程产物、某些酶制剂(如青霉素酰化酶,碱性磷酸酯酶等)。而植物细胞产物,多为胞内物质。为了提取胞内的蛋白质、酶、多肽和核酸等生化物质。首先必须收集细胞或菌体,进行细胞破碎。细胞破碎就是采用一定的方法,在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜,设法使胞内产物最大程度的释放到液相中,破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后,再采用不同的分离手段进一步纯化。微生物细胞核植物细胞外层均为细胞壁,细胞壁里面是细胞膜和它所包围的细胞浆合称原生质体。动物细胞没有细胞壁,仅有细胞膜。通常细胞壁较坚韧,细胞膜脆弱,易受渗透压冲击而破碎。遗传基因和环境等因素,不同类型生化物质其细胞壁的结构和组成不完全相同,故壁的机械强度不同,细胞破碎的难易程度也就不同。此外,不同的生化物质其稳定性有较大差别,在破碎过程中应防止变形和被胞内的酶水解。不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织,其细胞破碎的难易不一,使用的方法也不相同,如动物脏器的细胞膜较脆弱,容易破碎,植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁,要采取专门的细胞破碎方法。因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。
不同的细胞器破碎的方法是不同的,因此细胞的分离方法也是有差异的。制备某种生物大分子时,往往需要采用细胞中某一部分为材料;或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子,通常破碎细胞后,先分离各组分,以防干扰,这对制备―些高难度和高纯度的生物大分子是必要的,细胞器的分离,一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理,分离出所需组分,分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。细胞器的分离有时需要将组织细胞破碎,然后根据待分离的细胞器的理化特性,选择适当的分离方法。一般采用差速离心或密度梯度离心的方法达到分离细胞器的目的。
下面就将介绍几种细胞破碎的方法。
2.1.1组织捣碎机
主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法,常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等,转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。
2.1.2 匀浆器
先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料,除玻璃外,还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
存在的问题;较易造成堵塞的团状或丝状真菌,较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器,质地坚硬,易损伤匀浆阀,也不适合用该法处理。
2.1.3 研钵
多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨剂,以提高研磨效果。
2.1.4 细菌磨
是一种改良了的研磨器,比研钵具有更大的研磨面积,而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。
主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有:
2.2.1反复冻溶法
原理:因突然冷冻,细胞内冰晶的形成及
胞内外溶剂浓度的突然改变而破
方法:将待破碎的细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。
特点:此法适用于组织细胞,多用于动物性材料,对微生物细胞作用较差。
2.2.2 急热骤冷法
将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病毒材料。
2.2.3 超声波处理
用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,频高于15~20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。
特点:操作简单,重复性较好,节省时间;多用于微生物和组织细胞的破碎。
存在问题:超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递,散热均有困难,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因,同时会产生活性氧,所以要加一些巯基保护剂。
2.3 化学及生物化学法
2.3.1 自溶法
在一定PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间,常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。
2.3.2 酶溶法
利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等,将细胞壁分解,使细胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏感,加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后,使之转为对溶菌酶敏感而溶解。
a) 此法适用多种微生物;
b) 具有作用条件温和;
c) 内含物成分不易受到破坏;
d) 细胞壁损坏的程度可以控制。
存在的问题:易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高,限制了大规模利用。若回收溶酶,则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外酶溶法通用性差,不同菌种需选择不同的酶。有一定局限性,不适宜大量的蛋白质提取,给进一步纯化带来困难。
2.3.3 化学渗透法
某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理;化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。
特点:多用于破碎细菌,且作用比较温和;提取核酸时,常用此法破碎细胞。
存在的问题:时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂;通用性差:某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。
2.3.方法比较
下面我们来具体分析两种较常用的细胞破碎法――超声破碎发和高压匀浆法。
超声波破碎法在细胞破碎中应用最普及,超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热(42-43℃)。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000℃)、高压(可达500×104Pa),可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管,可能会碎裂,而通常使用的是塑料试管。超声破碎操作简便,但是破碎成本高,易引起温度的剧烈上升。在中~大规模操作时,产生的化学自由基能使某些敏感性活性物质失活。对不同菌种的发酵液,超声破碎的效果差别
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