宫颈癌是世界范围内女性肿瘤患者死亡的主要原因，75%由高危HPV16/18亚型持续感染引起。HPV持续感染时，HPV E6、E7作为病毒致瘤蛋白，结合及促进肿瘤抑制蛋白p53及pRb的降解，但机体缺乏HPV特异的T细胞免疫反应性，对于宫颈肿瘤或癌前病变的患者，病毒特异的T细胞一般无功能或是功能被抑制。对特异T细胞的功能修复是HPV导致宫颈癌发生的重要因素。宫颈病变CINⅡ~Ⅲ如合并HPV16感染，则有30%概率发展为宫颈浸润癌。目前，CINⅡ~Ⅲ的治疗方式为锥切手术，但10%可能复发且存在妊娠并发症如早产、低出生体质量儿、胎膜早破等发生可能。目前预防性疫苗Gardasil/Cervarix可有效预防HPV感染，但对于已有HPV感染或癌前病变者并无明显治疗作用，故有必要开发针对HPV感染相关癌前病变的治疗性疫苗。

    来自韩国关东大学的Kim等通过电穿孔加强免疫开发了HPV DNA疫苗GX-188E，在9例CIN3患者体内，该疫苗将HPV抗原提呈给树突状细胞，产生E6/E7特异的IFN-γ介导的T细胞反应。其中8例患者产生加强的多功能HPV特异的CD8 T细胞反应：细胞反应性增强、增殖能力增加或效应分子分泌增加。7例患者在36个月随访发现宫颈病变消退、病毒被清除。研究发现，针对疫苗可产生大量CD8 T细胞反应，导致组织、细胞及病毒反应，治疗性疫苗能有效治疗HPV持续感染及宫颈病变，并且GX-188E不会发生严重的疫苗相关性不良反应。

GX-188E安全，可以被接受

GX-188E疫苗可表达HPV16、18E6/E7蛋白，融合表达于Flt3L及组织纤溶酶原激活物信号区域的胞外区域，目的是促进抗原呈递及运输融合蛋白到分泌通路。GX-188E通过对HPVE6/E7基因重新改组，改变第16位氨基酸重叠序列以减少T细胞识别结合区域。基因改组的目的是防止E6/E7融合蛋白的二聚体产生，这一过程对于p53、pRb的降解至关重要。

根据纳入及排除标准，共9例CINⅢ受试者被纳入，分别于第1、4、12周给予三剂GX-188E，共49例不良事件（AEs）发生：23例不良反应包括湿疹、瘀斑、阴道瘙痒、失眠、厌食、头晕，被认定与疫苗无关。另19例不良反应包括寒战、注射部位疼痛、肿胀、感觉减退，被认为与GX-188E相关。还有2例为不明原因的头痛、鼻炎与疲劳，被认为与疫苗相关。所有AEs被认定为轻微（1级），并在3天内完全恢复，无严重不良反应或实验室异常。有学者认为注射Flt3L蛋白可引起白细胞增多，本研究未发现白细胞有明显改变，可能原因是GX-188E疫苗不会使血中Flt3L明显上升，这一发现与之前报道的DNA疫苗如cytokines及HSP70一致，表明DNA疫苗一般不会产生不良反应。为了检测疫苗的免疫安全性，GX-188E注射后，检测抗DNA抗体发现其水平低于检测限值，说明DNA疫苗是可以接受的，不会产生自身免疫反应。

GX-188E可产生较强的细胞免疫反应

注射GX-188E后观察各个时间点：VS（接种前两周）、VT2（接种后2周）、VT4（接种后8周）、VF1（接种后20周）、VF2（接种后36周）。应用酶联免疫斑点测定法（ELISPOT）发现：除1例受试者在疫苗接种前即发现IFN-γ反应，其他8名受试者同样也存在HPV特异的免疫反应，但较弱。在疫苗接种后，所有受试者均出现E6、E7特异IFN-γ反应性明显增加，其中2例受试者在接种1剂后即出现明显的IFN-γ反应增加，5例在接种2剂后明显增强，其余2例在接种3剂后反应增强，表明疫苗注射后细胞免疫反应性显著增加。同时研究发现，E6抗原的反应性较E7更强（69%~89% 11%~31%）。GX-188E疫苗所致E6/E7特异记忆T细胞反应，在最后一剂接种后，可保持至少24周。利用细胞因子染色技术（ICS）发现：HPV16特异IFN-γ+CD4T细胞反应在9例患者中均出现，IFN-γ+CD8T细胞反应在8例患者中出现。除了一例以外，GX-188E可激活HPV16特异CD4、CD8T细胞反应。持续HPV感染可损伤Th1细胞对HPV的反应，导致肿瘤发生。未接种前，Th1效应细胞因子如IFN-γ、IL-2及肿瘤坏死因子（TNF-α）显著低表达。接种后，上述几种因子表达明显上升（IFN-γ、IL-2、TNF-a分别提高49.9、13、22.9倍）。结果显示，GX-188E可导致较强的Th1极化的HPV特异的细胞免疫反应，但Th2（IL-4、IL-10）及Th17（IL-17A）增加并不明显。

    通过刺激HPV16 E6及E7多肽，体内可产生五种不同功能的效应因子:IFN-γ、IL-2、TNF-α、趋化因子（MIP-1β）及细胞毒活性。8/9例受试者接种后与接种前比较，可产生有功能的HPV特异性CD8T细胞。

GX-188E产生针对E7蛋白抗体反应较弱

    通过稀释酶联免疫吸附对血浆样品针对E6、E7总IgG抗体反应进行测定：在VS期几乎所有受试者可检测到微量或者无法检测到E6及E7蛋白的抗体，说明在接种疫苗之前，体内不存在有效的E6、E7蛋白特异性抗体。在接种疫苗之后，3/9例产生微弱的抗E7的抗体，滴度总1:8升至1:256，但是针对E7抗原的T细胞免疫反应要弱于E6。

通过对HPV感染状态、细胞学检测以及宫颈病变的组织学检查对GX-188E疫苗的临床有效性进行评估。在VS期，9例受试者通过阴道镜病理学诊断为CIN3（原位癌），在最后一剂疫苗接种8周后，6/9例受试者宫颈病变消失，其中3例在接种完第2剂疫苗第12周后细胞学检测正常；3例在接种完第3剂疫苗后细胞学转阴；另一例则在36周结束后病变消失，并且这6例在之后的随访中均未出现CIN复发。9例受试者在入组时，均有HPV16感染，1例同时合并HPV18型感染。在接种疫苗后第2剂疫苗接种后第12周有5例受试者HPV被清除，其余2例中，1例在20周被清除，另1例在36周后被清除。HPV感染与临床病变清除率为78%（7/9）。同样，在3例接种早期及出现CIN及HPV均清除的受试者体内检测到大量HPV特异性多功能CD8T细胞反应，其余4例在接种后20周以及随访完成先后出现CIN及病毒清除的受试者也出现了多功能CD8T细胞反应，对疫苗无反应者同样体内未检测到特异的T细胞反应。这进一步说明GX-188E疫苗对宫颈病变及病毒感染的清除与HPV特异性多功能CD8

virus,HPV)颗粒的存在[1],目前,已通过DNA检测技术发现90%以上的宫颈癌病人都存在HPV持续感染。至今发现的HPV约有100多种,根据HPV感染人体后可致宫颈癌的相关性,分为低危型HPV以及高危型HPV。研究表明[2],宫颈癌组织中HPV16和HPV18型感染率最高,故本文对12型高危HPV进行定性检测,同时定量检测HPV16、HPV18型。1材料和方法1.1研究对象本研究对象为2011年4月至2011年12月在中山大学孙逸仙纪念医院妇科门诊和体检中心进行妇科检查的2050例女性患者。年龄为36.48±9.38(x±s),最小17岁,最大73岁。1.2样本采集1.2.1标本采集要求①3天内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗;②24小时内不应有性行为;③检查应在非月经期内进行;④检查前阴道不进行醋酸或碘液涂抹。1.... 

宫颈癌是最常见的严重危害妇女健康的恶性肿瘤之一,其发病率居女性恶性肿瘤的第二位,全球宫颈癌发病人数逐年增加,尤其在发展中国家更为突出,其中80%的病例发生在发展中国家[1-2]。我国作为一个发展中国家亦是宫颈癌的高发地区,进行正确的早期筛查、早期诊断及早期治疗,将其阻断在癌前病变阶段,是预防和控制宫颈癌的关键。研究发现人乳头瘤病毒(HPV)是引起妇女生殖器疣和诱发宫颈癌的重要病原之一[3],国内外已有大量相关文献报道[4-8]。本文采用实时荧光定量PCR法对我院108例妇科门诊患者进行高危型HPV感染型别与病毒载量分析,初步探讨HPV感染主要基因型别及病毒载量与宫颈病变的关系,为进一步制定治疗方案与疗效评价提供参考。1仪器与试剂ABI

尖锐湿疣 ( CA)系感染人类乳头瘤病毒 ( HPV)所引起的生殖器、会阴和肛门部位的表皮瘤样增生 ,是一种常见的性传播疾病。诊断该病的实验室方法很多 ,其中核酸荧光定量 PCR技术融合了 PCR和DNA探针杂交技术的优点 ,具有很高的检出敏感性和特异性。近日 ,我们对 50例病理诊断为 CA的活检标本 ,同时进行了核酸荧光定量 PCR技术检测 ,现报告如下。1　资料与方法1 .1　一般资料　 50例尖锐湿疣患者均经病理证实。男 31例 ,女 1 9例 ;年龄 2 3～ 52岁 ,平均 33.1岁 ;病程半月～ 1年 ,平均 3.5个月。已婚 39例 ,未婚 1 1例。其中有性乱史者 37例 ,无自觉症状者 38例 ,其余患者有不同程度的瘙痒。损害部位 :男性见于冠状沟、包皮内板、龟头、系带及肛门周围 ,女性见于大小阴唇、阴道口、阴道内及会阴处。 31例患者仅 1处损害 ,余 1 9例皮损累及 2处或 2处以上。皮损以乳头瘤状、...  (本文共2页)

近年研究表明 ,ＨＰＶ与人类多种肿瘤的发生有关。人们曾应用免疫组化（ＩＨＣ）、原位杂交或ＰＣＲ等技术进行检测 ,以探讨ＨＰＶ感染与喉癌发生的关系。我们综合应用上述方法 ,并进一步应用间接原位ＰＣＲ技术 ,来检测ＨＰＶ在喉鳞癌中的感染情况 ,旨在建立稳定的原位ＰＣＲ方法 ,比较原位ＰＣＲ与其它方法的差异 ,探讨ＨＰＶ感染与喉癌的关系。间接原位ＰＣＲ技术把分子生物学和病理组织学成功地结合起来 ,是一项具有发展前途且更易为病理学工作者所接受的分子病理技术。１材料和方法１．１材料本院１９９０／１９９６,喉鳞状细胞癌活检或根治标本５０例 ,均为男性 ,年龄４１～７３岁 ;术前均未做过放疗或化疗。所有标本均经１００ｍＬ／Ｌ福尔马林固定、石蜡包埋 ,经连续切片做ＨＥ、免疫组化、原位杂交、ＰＣＲ和间接原位ＰＣＲ。另各取６例尖锐湿疣和声带息肉分别作为阳性及阴性对照。１．２方法１．２．１免疫组化经热平台做抗原修复后 ,进行ＡＢＣ免疫组化 ,以ＤＡＢ...  (本文共4页)

四川大学学报(自然科学版)第48卷1引言HPV基因组是一双链闭环DNA，分子量5000 kD，各型HPV基因组DNA的长度在7200一80。。bp之间仁‘一3〕.HPv属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属，包含100多个专性侵染人类的病毒类型.根据HPV基因的序列变异可将其分为多种亚型，目前确定的HPV型别约有100余种，其中有约40种可以感染人的生殖器官.研究发现，在宫颈癌、宫颈原位癌、阴茎癌、外阴癌、肛周癌、喉乳头瘤等肿瘤组织中均可检出HPV--DNA，大约有”.7%的宫颈癌和HPv感染有关[a，5〕.目前的流行病学证据已证实特定型别的人乳头瘤状病毒(HPV)感染是子宫颈癌发生的必要条件，特定型别的人乳头瘤状病毒(HPV)持续感染是导致子宫颈上皮内瘤变(CIN)[‘一3口和子宫颈癌〔6一8〕发生的主要因素.HPV对人类健康造成的最大已知危害是高危类型HPV直接导致成年女性的子宫颈癌.在全世界范围内，每年大致有50万侵润性宫颈癌被诊断... 

HPV家族有100多个基因型,其中30~40个感染黏膜,至少15个HPV基因型与宫颈癌的发生密切相关。宫颈细胞巴氏染色检查使宫颈癌的发病率和死亡率大大下降,如果HPV的DNA检查和巴氏检查联合使用,对于因感染高危型HPV可能发展宫颈癌的诊断非常有意义。本研究旨在建立单一PCR管,用HPV特异性引物多重PCR方法扩增,然后用毛细管电泳分离PCR扩增产物,根据其大小确定相应的HPV基因型,并用该方法评估不同病理标本,了解这些标本中的HPV基因型分布。1材料和方法1.1标本收集和细胞学检查从我院皮肤性病科、妇产科门诊收集宫颈标本,将标本保存在LBC培养基中。每组的平均年龄和细胞学诊断与HPV阳性、多重感染的相关性见表1。用细胞刷收集宫颈内外的宫颈细胞,标本保存在10m