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干细胞抗衰老知识之BMP-2和VEGF-165双基因共转染大鼠骨髓
关键词：干细胞抗衰老 双基因共转染大鼠骨髓&&&&&&发布时间：
干细胞抗衰老知识之BMP-2和VEGF-165双基因共转染大鼠骨髓
&&& 尊敬的读者，下面是“知识之BMP-2和VEGF-165”的详细内容，希望对您有所帮助！
&&& “干细胞抗衰老知识之BMP-2和VEGF-165双基因共转染大鼠骨髓”的内容如下所述：
&&& 因创伤及病理因素导致的骨缺损、骨不连的治疗，一直是一个棘手的难题。探索新的方法提高骨愈合和促进骨形成是治疗骨缺损骨不连的最佳途径。具有提高骨愈合能力的各种因子已被研究，在众多骨生长因子中，骨形态发生蛋白（BMP）是其中最重要的一种，它已被公认为是目前最强的骨诱导因子，也是最有前途的，包括BMP2，BMP4和BMP7。BMP已被应用到各种动物模型当中诱导骨形成修复骨缺损。应用BMP促进骨缺损修复的动物实验研究，已有大量的文献报道。BMP最主要的特征是在体内诱导异位和原位新骨、软骨及与骨组织有关结缔组织如肌腱及韧带的形成，骨组织的发育、改建、愈合均离不开血管生成，血管与骨的新生是一个病程逆转的关键，骨的新生离不开血管的新生。血管生成与早期骨形成密切相关。VEGF（血管内皮生长因子）是最有力的血管生成因子，VEGF特异作用于内皮细胞，促进其增殖和血管生成，在骨生成过程中凭借软骨内钙化途径起着中重要作用，在骨形成过程中VEGF可能是通过和调控骨生成平衡的体液因子相互作用而发挥作用。尽管VEGF和骨形成之间的密切关系已通过拮抗VEGF证实，然而VEGF的作用在BMP诱导骨形成过程中是不是必须的还不清楚。关于VEGF是否是BMP诱导成骨过程中的必要条件，应用VEGF基因促进血管生成能否促进成骨、提高骨愈合未见报道，BMP基因和VEGF基因在成骨过程中的关系未见报道，是否给予外源性的VEGF能够进一步加速骨形成及愈合，是否影响骨形成和骨修复的其他重要环节，目前尚未研究清楚。基因治疗研究是最有前途的领域之一，故成为最近几年的研究焦点。但是传统的BMP和VEGF蛋白制备，程序复杂，产量低，活性不稳定；有效安全的局部剂量很难达到：基因治疗研究成为目前的研究热点，我们采用EX VIVO的技术路线，在体外脂质体为载体，将BMP2基因和VEGF-165基因转染大鼠BMSC，再将基因转染细胞与载体材料复合后置入肌肉间隙里观察BMP2基因和VEGF-165基因在骨形成过程中的相互关系，是否存在协同效应，期望为骨缺损及骨不连等骨科疾病的治疗提供新的途径，利用基因治疗策略使局部持续稳定的产生骨诱导因子，可能使基因治疗的实际临床应用更具生命力，同时也为进一步进行该方面的研究提供实验基础，为BMP2及VEGF-165双基因共转染BMSC将来用于其他更广泛的基因治疗积累经验，目前尚无这方面的报道。 一、重组质粒的构建 利用基因工程技术分别构建了pIRES-VEGF165、pIRES-BMP-2单基因表达重组质粒和pIRES-hBMP2-VEGF165双基因共表达重组质粒，经限制性核酸内切酶酶切鉴定证实上述重组质粒构建正确。 二、大鼠BMSC培养及成骨分化的研究 大鼠股骨和肱骨抽取骨髓进行体外培养。显微镜下观察可见大鼠骨髓基质干细胞能够在培养条件下形成集落并持续扩增，其中部分集落碱性磷酸酶表达阳性，细胞接近汇合时有近70%的细胞有ALP活性表达，汇合后能够形成钙化小节。可见BMSC采集容易，增殖能力强，在体外具有明确的成骨分化能力。 三、转染大鼠骨髓基质干细胞后细胞培养上清液中BMP-2和VEGF-165的表达检测 脂质体介导双基因共表达质粒转染大鼠骨髓基质干细胞后，经酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中BMP2和VEGF165的含量pg/ml。试验结果表明在96小时内，BMP2和VEGF-165蛋白表达量随着时间的延长逐渐增加，表明我们构建的BMP2和VEGF-165双基因表达质粒转染大鼠骨髓基质干细胞可有效表达。 四、脂质体介导的BMP-2、VEGF-165体外单基因及双基因在大鼠肌间隙成骨的初步观察 将BMP2和VEGF-165转染后的大鼠BMSC种植到明胶海绵中并移植到大鼠肌肉间隙中。实验分组分为2组：第一组为：① BMP2基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据标本第7、14、28天取材时间的不同分为A1、A2、A3组；② VEGF-165基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据标本第7、14、28天取材时间的不同分为B1、B2、B3组；③ BMP2和VEGF-165双基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据标本第7、14、28天取材时间的不同分为C1、C2、C3组；④ 可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据标本第7、14、28天取材时间的不同分为D1、D2、D3组；⑤ 对照组（E组），根据标本第7、14、28天取材时间的不同分为E1、E2、E3组。每小组15只，分别7、14、28天取材。 第二组为：① BMP2基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据影像学第3、6周检查时间的不同分为F1、F2组；② VEGF-165基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据影像学第3、6周检查时间的不同分为G1、G2组；③ BMP2和VEGF-165双基因转染大鼠BMSC＋可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据影像学第3、6周检查时间的不同分为H1、H2组；④ 可吸收明胶海绵（Gelfoam disk）组，根据影像学第3、6周检查时间的不同分为I1、I2组；⑤ 对照组，根据影像学第3、6周检查时间的不同分为J1、J2组。每小组10只，分别3、6周行X片检查。 第一组行组织切片HE染色，在光镜下观察新骨形成；第二组在X下观察异位骨化程度。 结果表明：BMP2诱导骨形成过程中，VEGF-165可以促进骨形成，加速骨愈合；而在无骨形态发生蛋白（BMP）存在条件下，单独应用VEGF-165不能诱导骨组织形成，但血管生成活跃，在BMP2诱导骨形成的区域里，VEGF-165能使更多的间充质干细胞填充。从X片上可以看出，BMP2能诱导异位骨化，骨形态发生蛋白是引起异位骨化形的一个重要因素，BMP2诱导的异位骨化过程中，VEGF-165促进和加速异位骨化，使异位骨化形成面积和范围增多；但在无骨形态发生蛋白（BMP）存在条件下，单独应用VEGF-165不能诱导异位骨化形成。 综上所述，BMP在骨形成过程中扮演一个很重要的作用；BMP单独应用就有较强的诱导成骨活性，在BMP2诱导骨形成过程中，VEGF-165对BMP2的诱导成骨有增强作用，促进骨愈合；协同BMP2增加骨形成和提高骨愈合；但在无骨形态发生蛋白（BMP）存在条件下，VEGF-165独自不能诱导骨形成，也不能提高骨形成。尽管VEGF能影响成骨细胞，对骨生长也是重要的，但VEGF-165独自仍不能引起骨再生的连锁反应。
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友情链接：& 脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化
脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化
摘 要：目的探讨脑源性神经营养因子（brain―derived neurotrophic factorgene，BDNF）基因转染的骨髓间充质干细胞（bone―marrow mesenchymal stem
【题　名】脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化
【作　者】刘谦虚 贺湘波 陈观贵 谢鼎华 谭志强
【机　构】中南大学耳科研究所、湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科 长沙410011 暨南大学医学院第三附属医院（珠海市人民医院）耳鼻咽喉头颈外科 广州医学院第二附属医院耳鼻咽喉科
【刊　名】《听力学及言语疾病杂志》2011年 第1期 52-55页　共4页
【关键词】脑源性神经营养因子基因 骨髓间充质干细胞 耳蜗
【文　摘】目的探讨脑源性神经营养因子（brain―derived neurotrophic factorgene，BDNF）基因转染的骨髓间充质干细胞（bone―marrow mesenchymal stem cells，BMSC）在受损耳蜗内的生存和分化情况。方法将转染了BDNF基因并在体外诱导分化的BMSC（BDNF--BMsc）标记后，通过鼓阶注射植入阿米卡星致聋的豚鼠耳蜗内（BDNF--BMSC组，18只），并设注射未诱导分化的BMSC的豚鼠为对照组（BMSC组，18只）。在注射后1、2、4w取耳蜗组织石蜡切片，HE染色和荧光染色观察注射细胞的分布；神经元特异性烯醇化酶（neuron―specificenolase，NSE）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acid protien，GFAP）抗体免疫组化染色观察注射细胞在耳蜗内的分化。结果BDNF-BMSC和BMSC在耳蜗内均能成活并分布到一定的区域，鼓阶和前庭阶较多，中阶和蜗轴较少。NSE和GFAP免疫化学可见BDNF―BMSC部分细胞阳性染色，而BMSC阳性细胞较少。BDNF―BMSC在1、2w时平均光密度（AOD）值较高，在4w时显著下降（P〈0．05）；在各时间点，BDNF-BMSC组AOD值均显著高于BMSC组（P〈0．01）。结论诱导分化前后的BMSC耳蜗移植后均能成活并分布到一定的区域，在耳蜗内BDNF―BMSC分化能力明显强于BMSC，但随时间延长分化能力下降。
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脑源性神经营养因子基因,骨髓间充质干细胞,耳蜗
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hBMP-7基因转染修复骨缺损的实验研究
【摘要】：目的:探讨利用人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因转染骨髓基质干细胞(BMSc)构建组织工程化骨组织及修复兔桡骨缺损的效果。方法:制备含hBMP-7真核细胞表达载体的逆转录病毒液PT—PLNCX2-BMP-7并转染BMSc,使用免疫组织化学的方法检测hBMP-7在BMSc中的表达。兔桡骨1.5cm骨缺损修复实验分为4组:转染细胞组,未转染细胞组,单纯PLLA组和对照组,每组6个样本。分别于术后3周,6周采用大体观察、X线、组织学检测、免疫组织化学检测等方法对骨缺损修复情况进行对比评价。结果:免疫组织化学检测显示经PT-PLNCX2-BMP-7病毒液感染的BMSc中有较强的阳性结果出现。定量检测分析结果证实经转染的BMSc修复骨缺损的成骨速度和成骨量均优于未转染组,单纯PLLA组和对照组中均未见骨缺损得到修复。结论:hBMP-7基因转染能够提高BMSc形成组织工程化骨组织和修复骨缺损的能力,可用于以BMSc为种子细胞的组织工程化骨组织的构建和进一步应用。
【作者单位】：
【基金】：
【分类号】：R687【正文快照】：
hBMP-7基因转染修复骨缺损的实验研究@金丹$第一军医大学南方医院全军创伤骨科中心!广州 510515
@裴国献$第一军医大学南方医院全军创伤骨科中心!广州 510515
@王珂$第一军医大学南方医院全军创伤骨科中心!广州 510515
@魏宽海$第一军医大学南方
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文档介绍：第四军医大学硕士学位论文转染VEGF的BMSC复合冻干骨组织工程骨研究姓名：张鹏申请学位级别：硕士专业：外科学（骨科）指导教师：马保安;范清宇猿铡。矬声明莱承攀菝严诿戆学藏与臻赛瓣辩学遴鏊，零舂莽甏壤要交嚣论爻慧嚣令焱蠡导糖搓罨苓妻l籀毂耢襄工挈疑臻褥懿疆究麟暴。嚣羹耀秘，黢了交串转辨瓣设蒜注稀致谢的地方矫，论文率不壤禽英德人已经发表藏撰写过鹃研究城莱，幂簿龛奉A壤穗A琶攀德学餐簿其穗鬻途嫠鬻遵瓣壤蒹。与冀一嚣王箨蕤薅悫瓣拳壤究磺键熬l量囊羹敷勰毯褒论文枣撂了嚷骢豹谎龌舞嶷示了皴豢。申请学位论_爻与资科若商不寞之处，本^承籀一讶相关责任。论文券毒签基：!堡螋爨瓣：奎竺!二兰!!保护知识产权声明奉A蹇垒了瓣第篷攀嚣夫学窝关霖擎露密产较瓣壤定，熊：臻巍生蠢较竣壤学餐蘩楚论文I搀靛蘩识产毅攀蘧疆攀莲攀嚣大学。奉A鬟菱挚鼗裹羧蒸，麓表论文或使甩论文I作戚槊时鬻名单位舾然湾第删攀医大学。学校育杖僳翟送交论文翳鬟臻籍，完诲论文羧蠢淹穰耩瓣；学校霉鼗公毒论交戆全落囊罄舞辩客《嚣謇稳塞蘩羚，霉鼗最瓣彩疆、缭臻或菸莛鬟麓手羧爨毒论交。论文作密签基：黟蟹导蛹燕羲：段期：堕丛￡第四军医大学硕士学位论文缩略词简表英文缩写英文全称中文译名endo也。1i81VEGFp。ulargrow凼血管内皮细胞生长因子tactorB0n。m8n。owBMSCm。5enchymal吼em骨髓基质干细胞……”cellsALPAlkaline碱性磷酸酶phophataseBⅣ田Bone骨形成蛋白morphogeneticproteinDulbeco’smodifiedDulbeco改良的MEM培养DMEMeaglemedium基HAHydroxyapatite羟基磷灰石HE苏木精—伊红Heamatoxylin-eosin他。omblnentrhBMPH啪粤bon。人重组骨形成蛋白morphogenet