气切导管检出玫瑰色库克菌菌

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松嫩平原盐碱地中耐(嗜)盐菌的生物多样性
[目的]分离纯化松嫩平原盐碱地中可培养的耐盐菌和嗜盐菌,并分析其生物多样性.[方法]采用纯培养法和定向富集法从该地区盐碱土样中分离耐盐菌和嗜盐菌,然后通过16S rRNA基因同源性比对鉴定所分离细菌的系统发育学地位,从而获取松嫩平原盐碱地中耐盐菌和嗜盐菌的多样性信息.[结果]共分离到细菌40株,分属于细菌域中3个门( Actinobacteria,Firmicutes,γ-Proteobacteria)、8个科、16个属、34个种.其中多数菌株属于厚壁菌门( Firmicutes),最优势属为葡球菌属(Staphylococcus)(8株,占总菌株的20%),其次依次为盐单胞菌属(Halomonas)(5株,12.5%)、芽胞杆菌属(Bacillus)(4株,10%)、大洋芽胞杆菌属(Oceanbacillus)(4株,10%)、库克菌属(Kocuria)(4株,10%)和假单胞菌属(Pseudomonas)(3株,7.5%)等.其中9株细菌的16S rRNA基因序列与最近缘种的同源性在97.2% - 99.0%之间,可能为新种.菌株耐盐能力主要在5% - 10%之间,其中62.5%的菌株为耐盐菌,其余则为中度嗜盐菌.所有菌株的耐碱能力在pH 9-12之间,其中60%的菌株耐碱能力则高达pH 12,除两株为嗜碱菌,其余均为耐碱菌.[结论]研究结果表明,松嫩平原盐碱地中耐盐菌与嗜盐菌种群丰富,主要以葡萄球菌和盐单胞菌为主,菌株不仅耐盐能力高而且耐碱能力也高,并且该地区可能含有丰富的耐盐菌和嗜盐菌的新物种.
Yuanyuan Pan
Haipeng Huang
Hongyu Xiao
Xuefeng Wang
Juquan Jiang
作者单位:
东北农业大学生命科学学院微生物与生物化工系,大豆生物学教育部重点实验室,哈尔滨 150030
年,卷(期):
机标分类号:
在线出版日期:
基金项目:
国家自然科学基金,中国博士后基金特别基金资助项目,黑龙江省教育厅海外学人重点项目,东北农业大学博士启动基金,大豆生物学教育部重点实验室开放基金
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血中检出克氏库克菌一例
官方公共微信杭州市居家空气可培养微生物特征研究
居室环境质量的优劣与人类健康密切相关,成年人约80%~90%的时间在室内度过,城市中的老人和婴儿等人群可能高达95%的时间生活在室内。室内空气生物污染是影响其空气质量的重要因素,它能引起各种呼吸道传染病、哮喘、建筑物综合症等各种疾病,对人类的健康有着极大的危害。本研究在杭州市5个主城区共选取60户家庭为取样点,进行为期1年的系统实验,深入研究了室内家庭空气微生物群落结构及动态变化特征,同时,研究了不同高度空气微生物浓度与粒径变化特征,主要结论如下:  (1)杭州市室内家庭共分离纯化空气细菌836株,鉴定出45属152种细菌,其中革兰氏...展开
居室环境质量的优劣与人类健康密切相关,成年人约80%~90%的时间在室内度过,城市中的老人和婴儿等人群可能高达95%的时间生活在室内。室内空气生物污染是影响其空气质量的重要因素,它能引起各种呼吸道传染病、哮喘、建筑物综合症等各种疾病,对人类的健康有着极大的危害。本研究在杭州市5个主城区共选取60户家庭为取样点,进行为期1年的系统实验,深入研究了室内家庭空气微生物群落结构及动态变化特征,同时,研究了不同高度空气微生物浓度与粒径变化特征,主要结论如下:  (1)杭州市室内家庭共分离纯化空气细菌836株,鉴定出45属152种细菌,其中革兰氏阳性菌占80.86%,革兰氏阴性菌占15.91%。优势菌属为微球菌属(15.79%)、库克菌属(13.76%)、芽孢杆菌属(11.72%)、葡萄球菌属(10.05%)、假单胞菌属(4.43%);优势菌种为藤黄微球菌(12.56%)、玫瑰色库克菌(11.96%)、巨大芽孢杆菌(5.86%)、科氏葡萄球菌(4.31%);室内家庭共分离纯化空气真菌383株,鉴定出27属79种真菌。优势菌属为青霉属(26.37%)、曲霉属(14.88%)、枝孢属(12.53%)、链格孢属(7.31%)和木霉属(3.66%)。优势菌种为芽枝枝孢菌(6.53%)、黄青霉(6.27%)、聚多曲霉(6.01%)和链格孢菌(5.74%)。  (2)杭州室内家庭空气细菌和真菌群落结构时间和空间变化特征显著,虽然不同区域的优势菌群基本一致,但所占百分比差异显著,且不同季节菌种数量差异显著。春季发现空气细菌种类较多(43属95种),其次为夏季(30属77种),秋季(38属91种)和冬季较少(32属94种),而夏季发现的空气真菌种类较多(27属),冬季最少(21属)。  (3)杭州市室内家庭空气微生物总浓度变化范围为314~2903CFU/m3,均值为873 CFU/m3;空气细菌为54~703 CFU/m3,均值为220 CFU/m3;空气真菌为240~2752 CFU/m3,均值为653 CFU/m3。杭州市室内家庭空气真菌浓度百分比明显高于细菌,分别为73.9%和26.1%。室内人均面积、通风情况及家庭儿童性别等因素显著影响空气微生物浓度。室内家庭人均面积与空气微生物浓度呈负相关;通风良好的家庭空气微生物浓度较低;男孩家庭空气微生物浓度明显高于女孩家庭。  (4)杭州室内家庭空气微生物浓度在空间上变化显著。细菌浓度拱墅区较高,西湖区较低,真菌浓度西湖区较高,上城区较低。西湖区室内家庭真菌浓度(893 CFU/m3)在5个区中最高,细菌浓度在5个区中最低(109 CFU/m3)。  (5)杭州室内家庭空气微生物浓度季节变化显著。室内空气细菌浓度春季和秋季较高,其次为夏季,冬季最低,浓度分别为271CFU/m3、251CFU/m3、171CFU/m3、81 CFU/m3。空气真菌浓度夏季最高,其次为春季和秋季,冬季最低,浓度分别为941 CFU/m3、689CFU/m3、590 CFU/m3、317 CFU/m3。  (6)杭州室内家庭空气细菌和真菌的粒径分布特征各不相同。空气细菌约37%的粒子分布在采样器第Ⅴ级,而空气真菌约46%的粒子分布在采样器第Ⅳ级。此外,杭州室内家庭空气细菌和真菌粒径分布特征时空变化不显著,且通风情况和儿童性别对细菌和真菌粒径分布特征无显著影响。  (7)杭州室外空气微生物高度不同时浓度变化范围为303~738CFU/m3。空气细菌浓度范围为114~365 CFU/m3;空气真菌浓度范围为191~508 CFU/m3。微生物的浓度(细菌、真菌)随着高度的增加呈现下降的趋势,而风力较大会增加空气中细菌的数量。一天中,空气细菌浓度在13:00达到最低,18:00达到最高;空气真菌浓度在8:00最高,13:00最低。高度不同对空气细菌、真菌的粒径分布没有影响。收起
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&&8:00-11:30,13:00-17:00(工作日)鲜乳细菌总数荧光定量PCR检测方法的建立--《吉林大学》2014年硕士论文
鲜乳细菌总数荧光定量PCR检测方法的建立
【摘要】:牛奶富含多种营养物质,是营养丰富的养生佳品,近年来我国消费规模逐渐上升。同时,鲜乳也是微生物生长繁殖的良好培养基,一旦与外界接触,就会受到来自各种途径的微生物污染威胁,被微生物污染的鲜奶品质会下降,一旦微生物数量超标,就不可再作为原料乳进行后续的乳制品的生产加工。因此,建立鲜乳中细菌总数快速检测方法对鲜乳的质量安全等级进行确定是十分必要的,是乳品企业和消费者的共同需求。
本实验利用荧光定量PCR技术,定量鲜乳样品中细菌的16S rDNA,建立判断鲜乳中细菌是否超标、能否作为原料乳进行后续加工的快速检测方法。首先对广泽乳业牧场及收购的约500份鲜乳样品进行污染细菌的分离,利用生化实验及16S rDNA序列测序法对细菌种类进行鉴定,分析广泽乳业牧场及收购的鲜乳常见的污染细菌种类,建立污染细菌谱。结果显示,常见的污染鲜乳的细菌有:格式乳球菌、血链球菌、中间葡萄球菌、克氏库克菌、溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、雷根斯堡约克氏菌、蜂房哈夫尼亚菌、大肠埃希菌、阪崎肠杆菌,绿浅气球菌、粘质沙雷菌、产酸克雷伯菌。以此污染细菌谱为分析对象,设计一对16S rDNA通用引物,PCR扩增片段长度为293bp,用作荧光定量PCR定量的模板。通过对纯细菌悬液和人工加标污染牛奶样品中的细菌16S rDNA进行定量,建立细菌浓度lgCFU和CT值的标准曲线。参照国标GB,当鲜乳中的细菌总数达到2×106CFU/g(mL)时,鲜乳的质量安全就会受到威胁,超过这个限值的鲜奶不允许用作原料乳,对细菌浓度在2×106CFU/mL时的纯细菌悬液和人工加标污染牛奶的CT值进行分析,得到了鲜乳细菌数量超标的参考CT值范围。结果显示:细菌浓度为2×106CFU/mL的纯细菌悬液的CT值范围为27.03~30.17,相同细菌浓度的人工加标污染牛奶样品的CT值范围为29.81~31.49。对100份实际鲜乳样品同时运用国标法和荧光定量PCR法检测,验证荧光定量PCR方法的准确性。结果显示,人工加标污染牛奶样品所得的CT值范围(29.81~31.49)可作为实际鲜乳样品细菌是否超标的参考范围。该方法的准确率在90%以上,检测时间在4h左右,是一种快速检测鲜乳细菌总数的新方法,能够为鲜乳样品的质量等级进行快速的确定。
【关键词】:
【学位授予单位】:吉林大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2014【分类号】:TS252.7【目录】:
中文摘要5-7Abstract7-11英文缩写词表11-12前言12-13第一篇 文献综述13-24 第1章 鲜乳细菌总数检测方法研究进展13-18
1.1 鲜乳中细菌的来源及危害13-14
1.2 鲜乳细菌总数检测方法的发展现状14-16
1.3 中国乳品行业发展与产品消费趋势16-18 第2章 荧光定量 PCR 技术和应用18-22
2.1 荧光定量 PCR 原理18-19
2.2 荧光定量 PCR 的特点19
2.3 荧光定量 PCR 的应用19-22 第3章 16S rRNA 基因的特点及序列分析的应用22-24
3.1 16S rRNA 基因的特点22
3.2 16S rDNA 序列分析在细菌鉴定中的应用22-23
3.3 16S rRNA 在群落结构多样性分析中的应用23-24第二篇 研究内容24-54 第1章 鲜乳污染细菌的分离与鉴定24-37
1.1 材料24-25
1.2 方法25-27
1.3 结果27-36
1.4 讨论36
1.5 小结36-37 第2章 鲜乳中细菌总数的荧光定量 PCR 检测方法的建立37-48
2.1 材料37-38
2.2 方法38-39
2.3 结果39-46
2.4 讨论46-47
2.5 小结47-48 第3章 鲜乳细菌总数荧光定量 PCR 检测方法准确性验证48-54
3.1 材料48
3.2 方法48-49
3.3 结果49-51
3.4 讨论51-53
3.5 小结53-54结论54-55参考文献55-60附录60-67导师简介67-68个人简介68-69致谢69
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