细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
各类western转膜条件
各类western转膜条件
来源：互联网
点击次数：21454
除了抗体原因，转膜恐怕是western blot成败的最关键因素。
园子里好多好多人在求助转膜时间，因此我们总结了一系列分子量蛋白转膜的时间，希望对大家有用。
蛋白来源：RAW264.7 总蛋白
蛋白名称（可保密）：一些转录因子
蛋白分子量：40~70 KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA
转膜时间：60~90 min
PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞 总蛋白
蛋白名称（可保密）：occludin & AKT
蛋白分子量：65 KD & 56 KD
WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 100 V
转膜时间：60~70 min
设备名字是“Bio-Rad mini”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：65 KD & 55 KD
WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）
转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12 V
转膜时间：30-40 min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：95 KD & 35 KD
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。
转膜时间：70 min
蛋白来源：肿瘤手术标本
蛋白名称（可保密）：转录因子
蛋白分子量：33 KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞
蛋白名称（可保密）：smad3
蛋白分子量：54 KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
蛋白来源：胰腺癌细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压
转膜时间：90 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD
WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。
转膜时间：90 min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
蛋白来源：大鼠PBMC
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：55 KD
WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜
转膜方式（恒流）：湿转
转膜时间：60-90 min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了 其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过 一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。
蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：大于250 kD
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。
转膜时间：180min
设备：“Bio-Rad ”
建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
蛋白来源：白血病细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：28 KD
WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜
转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A
设备：“Bio-Rad ”
建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。
蛋白来源：肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200 KDa
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um
转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压
转膜时间：120 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。
蛋白来源：胰腺β细胞
蛋白名称（可保密）：******
蛋白分子量：90-130 KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备：湿转
蛋白来源：原核表达
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：38 KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100 V
转膜时间：120 min
蛋白来源：心脏
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70 v120 min，180 min，5-6 h
转膜设备：伯乐湿转
建议改进方向（可选）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足够，40-70 kDa 90-120 min即可。
70-120 kDa ，70 v，120-180 min足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。
蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：53 KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80 V 100 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白
蛋白名称（可保密）：β-actin
蛋白分子量：42
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：50 4 h
转膜设备：湿转 Bio-Rad
蛋白来源：脑组织
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KD
WB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um
转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2
转膜时间：不定
转膜设备：北京六一仪器
建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。
在预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时间有时会有问题。
蛋白来源：CHO cell
蛋白名称（可保密）：酶原
蛋白分子量：40 KD
WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜（Biorad）
转膜方式（恒压）：100 V，湿转，转膜时间：60 min。
设备：Tanon（上海天能）
转膜液现用现配，用完倒掉。
转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。
蛋白来源：Hepg2
蛋白名称（可保密）：EGFR
蛋白分子量：170kd
WB用膜类型、孔径：pvdf 0.45
转膜方式（恒压、恒流）：24V
转膜时间：2个半小时
转膜设备：伯乐半干转
蛋白来源：肝癌细胞
蛋白名称：HIF-1α
蛋白分子量：120 kD
WB用膜类型、孔径：NC膜
转膜方式（恒压）：80伏，湿转
转膜时间：150分钟
设备：“Bio-Rad mini”
建议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36 kD。
蛋白来源：心肌细胞总和膜
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD
WB用膜类型、孔径：NC膜 0.2 um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70 V 200 min
转膜设备：湿转 Bio-Rad
建议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml。对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。
相关实验方法
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
试剂（盒）
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.关注今日：50 | 主题：392335
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】western转膜后marker明显变粗，为什么，内参蛋白也变粗，求助！！
页码直达：
这个帖子发布于2年零39天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
我和我同学第一次做western, 每人做一块胶，我们两个的条件一样，我们两个跑电泳时marker跑得非常漂亮，但是转膜时，我的膜上marker变粗，但同学的marker还是很漂亮，tubulin一抗4°过夜，1：7500， 封闭2小时，二抗1：10000，结果显示我的内参蛋白和marker一样，很粗。。。。。。。。
两者对比，我认为是转膜出了问题，因为其他流程我们一样，转膜是我我确实很认真地排气泡，请各位前辈帮忙找原因，谢谢下面的是我做的，marker条带明显变粗上面是我做的，marker和内参蛋白增粗，求解答
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
三明治没压好，要贴严实
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
如二楼所言，没压紧，扩散开了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
李娟01 三明治没压好，要贴严实好的，谢谢前辈，可是我感觉架子还是挺紧的，我明天再做一下试试，谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
NOYET 如二楼所言，没压紧，扩散开了好的，谢谢前辈，我明天再试试，可不可以多夹块海绵，这样会紧些？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
大点2 好的，谢谢前辈，我明天再试试，可不可以多夹块海绵，这样会紧些？一块不行两块，不夹碎了就行
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
NOYET @大点2：好的，谢谢前辈，我明天再试试，可不可以多夹块海绵，这样会紧些？?一块不行两块，不夹碎了就行那请问前辈还有别的好办法能紧些吗，非常感谢您的帮助！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
模具本身的质量问题，再就是操作问题了，一般做多了就有经验了，不行换个卡子
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
NOYET 模具本身的质量问题，再就是操作问题了，一般做多了就有经验了，不行换个卡子谢谢前辈，明天再做，告诉您结果??
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢前辈的指教，上面的那个结果还行，就是有点内参不齐
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园& 【求助】western 转膜-预染marker转移不全
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
【求助】western 转膜-预染marker转移不全
信誉分 100
可用分 6196
阅读权限 255
注册 状态 离线
【求助】western 转膜-预染marker转移不全
请教：做western 时用的Formatas的预染marker,Millipore PVDF 膜，转膜后可见75KD以上的大分子量的marker，但是看不到小分子量的marker，转膜条件:湿转，恒流自80-300mA，1-4小时都试过了.在胶上还可见少量大分子量的marker时，不论是凝胶还是膜上均不见75KD以下的小分子量的marker。延长转膜时间大分子量的marker均转至膜上，仍不见小分子量的marker。
转移缓冲液配方：Tris 5.8g,甘氨酸2.9g,SDS0.37g,甲醇200ml，加水至1L。
先谢谢大家！
信誉分 100
可用分 5078
阅读权限 255
注册 状态 离线
转印缓冲液中的SDS去掉试试
SDS可能影响小分子蛋白转膜
信誉分 100
可用分 6196
阅读权限 255
注册 状态 离线
多谢！明天我再试一下。今天用NC膜和PVDF膜同时做，条件相同，NC膜maker全部转移至膜上，PVDF膜仍然部分转移，且与NC膜比较，marker 颜色较浅。不知是何原因。
信誉分 102
可用分 2016
阅读权限 255
注册 状态 离线
你的ｐｖｄｆ膜孔径是０．４５的还是０．２的？
信誉分 100
可用分 5155
阅读权限 255
注册 状态 离线
信誉分 100
可用分 5596
阅读权限 255
注册 状态 离线
不知道你是怎么理解转膜的？
在SDS-PADE凝胶中，蛋白运动的速度由分子量和电场强度决定。分子量越大运动越慢，反之越快。电场强度越大，速度越快，反之越慢。
你也发现凝胶和膜上都没有小分子量预染marker，那就说明小分子量的蛋白已经从凝胶中出来，但又没在膜上——肯定是转过了，都跑到转移缓冲液里面去了！那么就应该减少转移时间，怎么会想起要去延长呢？岂不是转过的更多吗？
你做的目的蛋白是多大分子量的啊？如果在20KD以下，强烈建议用0.22（0.2um？）um孔径的膜。如果是30kD以上，可以用0.45um孔径的。可同时用两张膜重叠在一起，即便有蛋白穿过第一张膜，也会被第二张拦住的。
信誉分 100
可用分 6196
阅读权限 255
注册 状态 离线
原帖由 ritou1985 于
15:41 发表
不知道你是怎么理解转膜的？
在SDS-PADE凝胶中，蛋白运动的速度由分子量和电场强度决定。分子量越大运动越慢，反之越快。电场强度越大，速度越快，反之越慢。
你也发现凝胶和膜上都没有小分子量预染marker，那就说明小分子量的蛋 ... 谢谢！我同意您的看法，因为我的目的蛋白有两个25KD和110KD，内参42KD,当时延长时间是为了看110KD的转膜时间；但无论如何Marker也应该有的吧，而且做了对照，NC膜效果很好。若“同时用两张膜重叠在一起，即便有蛋白穿过第一张膜，也会被第二张拦住的”，若两张膜上都有，以下的步骤如何进行？两张膜都曝光？这样可以么？
信誉分 100
可用分 5763
阅读权限 255
注册 状态 离线
我们原先一块儿做过实验：
所谓的marker并不是什么特别的东西，只是已知分子量的几种蛋白的混合物，有些在上面已经用染料做了标记，有的没有。也就是说它具有蛋白共同具有的性质，自然也可以转过了；
你的两个目的蛋白分子量相差过大，建议电泳后将凝胶在110KD和42KD之间小心切成两块，两块胶分别同时转印，小分子量的转印时间短些，大分子量的时间长些。这种方法简便易行，也是允许使用的。
可以把两张膜都孵育一下。也可以根据两张膜上的marker颜色深浅来决定选择哪一张：在你的目的蛋白附近的marker颜色更深的，也就是更可能出现阳性结果的膜。
祝你实验顺利！~~
信誉分 100
可用分 6196
阅读权限 255
注册 状态 离线
今天用PVDF膜0.45试了下，转移液中去掉SDS，110mA 1h,结果膜上可见Marker的所有条带，同时滤纸上也有模糊的条带，估计是转的时间长了或是电流大了，遂决定明天用NC膜和PVDF膜减小电流或缩短时间再试一下不知是否可行。【分享帖】秀出你的western转膜条件 - 经验共享 - 分析测试百科网 - 分析测试百科网
月度关注热点
【分享帖】秀出你的western转膜条件
查看完整版本请点击这里：
除了抗体原因，转膜是怕是western成败的最关键因素。
看到园子里好多好多人在求助转膜时间，园子为何总结出一系列分子量蛋白转膜的时间呢？少说这对于大多数新手来说，是极好的礼物，说大点，借助丁香园的强势人气，此举可以提高我国一线科研人员WB水平也未必。我认为不用摸转摸条件的话,WB的效率提高数倍不成问题。
请大家多多提供一线转膜经验
也请园子里管事的兄弟姐妹多思量，我希望可以发起一个全园子的征集计划，由本板块版主负责筛选归纳。
[ 本帖最后由 woshiduiyan 于
17:39 编辑 ]查看完整版本请点击这里：
zwsyrt ( 16:52:02)
蛋白来源： 肌肉细胞膜
蛋白名称（可保密）： ***
蛋白分子量： 50--80 kDa
WB用膜类型、孔径： NC膜/PVDF膜(本次试验的结果选用的是NC膜)
转膜方式（恒压、恒流）： 半干转 恒流50mA
转膜时间： 70 min
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
9900 ( 16:52:32)
蛋白来源：RAW264.7 总蛋白
蛋白名称（可保密）：一些转录因子
蛋白分子量：40~70KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400mA
转膜时间：60~90min
PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要
曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别
one ( 16:52:54)
蛋白来源：内皮细胞 总蛋白
蛋白名称（可保密）：occludin & AKT
蛋白分子量：65KD & 56KD
WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 100V
转膜时间：60~70min
同意“ycwzq”所说的“除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要”。
鉴于“wcm123_1980”版主所提的意见，我把目的蛋白名字也秀出来了，设备名字是“Bio-Rad mini”。
2541 ( 16:53:30)
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：65KD & 55KD
WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）
转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12V
转膜时间：30-40min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转；
9900 ( 16:54:06)
蛋白来源：293T细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：95KD & 35KD
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90V-110V,控制电流不要超过300mA。
转膜时间：70min
eric930 ( 16:55:00)
相关疾病：
蛋白来源：肿瘤手术标本
蛋白名称（可保密）：转录因子
蛋白分子量：33KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；
实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
eric930 ( 16:55:30)
蛋白来源：成纤维细胞
蛋白名称（可保密）：smad3
蛋白分子量：54KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
IAM007 ( 16:55:58)
蛋白来源：胰腺癌细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：16KDa and 42KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：120V 恒压
转膜时间：90 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
98776langtao ( 16:56:20)
蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：72KD，42KD 和22KD
WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A. 转膜时间: 90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
windy+++ ( 16:56:41)
蛋白来源：大鼠PBMC
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：55KD
WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜
转膜方式（恒流）：湿转，转膜时间: 60-90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了
其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实
也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过
一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的
（没有过头）
49888 ( 16:57:02)
蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：大于250kD
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A. 转膜时间: 180min
设备：“Bio-Rad ”
建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
附一张图，是用数码相机微距拍的。
04906 ( 16:57:40)
蛋白来源：白血病细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：28KD
WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜
转膜方式（恒流）：湿转，90min，0.25A
设备：“Bio-Rad ”
建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况
tianmei001 ( 16:58:03)
蛋白来源：肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200KDa
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：120v 恒压
转膜时间：120 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景
viviwang1987 ( 16:58:34)
蛋白来源：胰腺β细胞
蛋白名称（可保密）：******
蛋白分子量：90-130KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：250mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转
bamboo16 ( 16:59:01)
蛋白来源：原核表达
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：38KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100V
转膜时间：120min
pengke1983 ( 16:59:26)
蛋白来源：心脏
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：220kDa，130kDa，70kDa,41kDa
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70v120min，180min，5-6h
转膜设备:伯乐湿转
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：40kDa一下，70v 60-90min足够，40-70kDa 90-120min即可。
70-120kDa 70v120-180min足够，120-180kDa 180-240min，180kDa以上建议6h
u234 ( 16:59:58)
蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：53KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 100min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
蛋白来源 卵巢癌膜蛋白
蛋白名称（可保密）：磷酸化VEGFR
蛋白分子量：230
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 120min
转膜设备:湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
abc816 ( 17:00:33)
蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白
蛋白名称（可保密）：β-actin
蛋白分子量：42
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：50 4h
转膜设备:湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
PCR ( 17:00:57)
我看各位转膜都用了好长的时间，invitrogen的iBlot把转膜时间大大的缩短了（7到10分钟），就是有点贵啊。本实验室也在研制快速转膜的仪器，现在40-100KD的蛋白7到10分钟也可以转过去，不过现在实验条件还在优化，明年初应该就可以上市了，希望可以帮助各位缩短实验的时间！
查看完整回复请点击这里：