外源基因表达系统的rna可以用polya检测到吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-04-23 12:35 标签： 外源基因的表达
几种不同分离POLYA-RNA方法的比较
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生物技术第四章基因表达系统基因表达系统4.1植物基因转化4.2原核表达系统4.1农杆菌介导的植物基因转化一、农杆菌农杆菌：根瘤菌科(Rhizobiacease)；土壤杆菌属(Agrobacterium)，革兰氏阴性。根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)放射型农杆菌(Agrobacteriumradiobacter)发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)悬钩子农杆菌(Agrobacteriumrubi)农杆菌是植物的病原菌根癌农杆菌感染导致冠瘿瘤的形成植物病原菌,天然遗传转化系统载体系统－Ti质粒Themechanismofcrowngallformationhasbeenextensivelyreviewedbyanumberofauthors(Zupanetal.,2000;ZupanandZambryski,1995;Zambryski,1992;ShengandCitovsky,1996;HooykaasandBeijersbergen,1994).宿主范围广泛存在于双子叶植物中，据不完全统计，约有93属643种双子叶植物对根癌农杆菌敏感。裸子植物对该菌也具有敏感性，能诱发肿瘤。一般认为单子叶植物对农杆菌无敏感性。DeCleeneandDeLay(1976)reportedalistofnaturalhostplantsforAgrobacteriumandtheirlistcontained42gymnosperms,596dicotyledonsand5monocotyledons.Thenumberofmonocotyledonsinthelistwasverysmallandnoagronomicallyimportantcerealswereincluded.Thus,thegeneralstatementthatAgrobacteriumdoesnotinducetumoursonmonocotyledonsisnotliterallytrue,butitreflectsgeneralbeliefsoveralongperiodoftime.单子叶植物与双子叶植物对损伤的响应不同，对宿主范围有影响3种类型用损伤细胞作为保护层（保护层内的细胞木质化）单子叶植物细胞分裂，形成愈伤组织双子叶植物形成创伤周皮二、冠瘿瘤形成机制Ti质粒编码蛋白介导T-DNA转移；T链（单链）进入植物细胞核，整合到植物基因组中1.Ti质粒双链共价闭环DNA，分子量约200kb迄今已从多种植物分离了不同种类的农杆菌，它们的Ti质粒的，结构特性均已清楚。菌株起源致瘤质粒名称B6苹果瘤＋pTi-B6番茄瘤＋pTi15955NCPPB1001葡萄瘤＋pTi1001C58樱桃瘤＋pTi-C58pAT-C58长病桃树的土壤＋pTi-1D13527白杨瘤＋pTi-27EU6卫矛瘤＋pTi-EU6pAT-EU61982，Chilton等人用同位素标记Ti质粒做探针与烟草冠瘿瘤细胞DNA杂交；后将章鱼碱型Ti质粒用内切酶SmaI切成19个片段，分别制备探针后与冠瘿瘤DNA杂交；研究结果：两段Ti质粒DNA能和冠瘿瘤DNA杂交,说明这部分DNA从Ti质粒上切割后转移到肿瘤细胞中Ti质粒的功能区T－DNA整合到植物染色体Vir基因介导基因转化T-DNA区Ti质粒Vir区冠瘿碱代谢区复制起始区tms的编码产物负责合成吲哚乙酸tmr的编码产物负责合成细胞分裂素tmt的编码产物负责：合成氨基酸衍生物T－DNA的结构左右边缘序列编码基因可以在植物细胞中表达tmstmrtmtiaaHiaaMiptAuxinCytokininOpineRBLBT-DNATi质粒Vir区冠瘿碱代谢区复制起始区Tms和Tmr基因的表达使植物细胞内激素平衡紊乱，冠瘿瘤细胞无限生长，形成激素自主的特性，导致冠瘿瘤形成。Tms和Tmr基因是致瘤所必需的基因，称为致瘤基因（oncgene)2.转化机制Vir区基因的功能V区基因介导T链转移至少6个操纵子在链转移中起作用virA(1cistron),virB(11cistrons),virC(2cistrons),virD(4cistrons),virE(2cistrons)andvirG(1cistron)(StachelandNester,1986).-这些基因在侵染植物时表达信号受体VirA识别化学信号，通过磷酸化激活VirG；VirG为转录调节因子，可上调V区基因表达损伤后植物体的汁液呈酸性，含各种物质，包括木质素，类黄酮生物合成途径中产生的酚类物质，受损伤后的植物汁液诱导v区基因表达(Stacheletal.,1985)，其中最有效的酚类化合物是乙酰丁香酮T链的形成及转运在VirD1,VirC
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