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高效液相色谱仪常见问题解析及日常保养维护
　　高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。 　　1.高效液相色谱仪系统 　　液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。 　　2.常见问题及解决方法 　　高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。 　　2.1柱压问题 　　柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI(3.3Bar)之间(在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。 　　2.1.1压力过高 　　这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。 　　(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查; 　　(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下，过滤白头正常，在检查; 　　(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。 　　2.1.1压力过低 　　压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。 　　高效液相色谱仪日常保养及维护： 　　1、流动相的抽滤要求 　　色谱纯试剂，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤。 　　2、吸滤头 　　特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。 　　3、单向阀 　　如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的反相放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗! 　　4、泵头 　　泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等)。 　　5、过滤片 　　当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。 　　6、排液阀 　　此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。 　　7、手动进样器 　　平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。 　　8、流通池 　　在色谱峰不正常时可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。 　　9、工作站 　　出现死机可重启计算机;不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拨接口、重新安装软件。
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共有&5&人回复了该问答超高效液相和高效液相区别的问题
求问超高效液相和高效液相的区别
回复于： 11:52:01超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同，所改变的地方有以下几点：小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5um，而超高效液相色谱的色谱柱，会达到3.5um，甚至1.7um。这样的孔径更加利于物质分离（2）超高压输液泵的使用。由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。（3）高速采样速度的灵敏检测器。（4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术；（5）仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。不过由于实验过程中仪器内部压力过大，也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低，仪器的连接部位老化速度加快，包括单向阀等部位零件容易出现问题等。
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回复于： 11:52:01
超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同，所改变的地方有以下几点：小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5um，而超高效液相色谱的色谱柱，会达到3.5um，甚至1.7um。这样的孔径更加利于物质分离（2）超高压输液泵的使用。由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。（3）高速采样速度的灵敏检测器。（4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术；（5）仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。不过由于实验过程中仪器内部压力过大，也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低，仪器的连接部位老化速度加快，包括单向阀等部位零件容易出现问题等。
回复于： 11:52:20
可以先问度娘
回复于： 14:24:07
度娘？好火的名字啊
回复于： 15:33:23
最好的办法是看两台仪器相同部件所列出的参数你就知道有什么不同了。
回复于： 17:12:14
超高效就是在高效的基础上使用更高的输液压力，使用更小粒径的高效柱，利用更高的采样频率检测，最终实现快速分离
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【求助】高效液相问题，求大牛解救
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高效液相荧光检测器测生物碱，自动进样进空白，水，甲醇，乙腈等都在和样品相同保留时间出干扰峰；进空针没有峰。同一仪器改用手动一样有干扰，求解救，快被这个问题折磨死了，换了好几种方法，都是一样的有干扰
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空针没有干扰，手动有干扰，那应该是色谱柱的原因，主药在色谱柱有残留，换根色谱柱试一下。
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丿灬随风丶 空针没有干扰，手动有干扰，那应该是色谱柱的原因，主药在色谱柱有残留，换根色谱柱试一下。空针只是不进样品，流动相走一遍，是不是空针也出峰才能说明是色谱柱的残留呢？
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skybird1989 高效液相荧光检测器测生物碱，自动进样进空白，水，甲醇，乙腈等都在和样品相同保留时间出干扰峰；进空针没有峰。同一仪器改用手动一样有干扰，求解救，快被这个问题折磨死了，换了好几种方法，都是一样的有干扰1、初步判断应该是进样针内的残留2、楼主需要排除一些情况
手动干拢时，样品在手动部没有进过样，如有之前一次样品都没有进过，才可以排去进样针的问题
b. 在没有做过的样品的设备上使用该方法进样空白等溶剂，如果有峰，说明这个试剂中确实有干扰，需要一个一个排除，选用其他厂牌的试剂，如果没有干扰，进一步确认残留的位置。3、因为进空针没有峰，应该不是色谱柱本身的污染4、观察多次进样，面积是否有变化。使用样品溶解度好的溶液作为洗针液。延长洗针的时间。观察面积是否会变小。
如果有变化，说明确实是因为残留。5、如果没有变化，可以执行酸洗钝化，完事之后，再进空白。个人观点。供参考。
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楼上几位说的都有道理，另外一些小的方面我补充一下1 滤膜会不会有影响，试试离心？此外，过滤流动相的滤膜也可以换个进口的2 装溶剂的容器使用前用相同溶剂洗几遍看看有没有结果3 试试进样量设置为0和直接进样之间有没有区别4 进针流动相看看5 用过滤流动相的膜过滤溶剂空白
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历史上的今天
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blogTitle:'高效液相色谱常见问题分析与对策',
blogAbstract:'高效液相色谱常见问题分析与对策\r\n液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。\r\na、峰拖尾\r\n原 因 \r\n解决方法\r\n1、筛板阻塞 \r\n1.a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱\r\n2、色谱柱塌陷 \r\n2.填充色谱柱\r\n3、干扰峰 \r\n3.a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱\r\n',
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