ip实验中,为什么没加抗体之间相互聚集沉淀的对照组沉淀里还有目的蛋白

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免疫共沉淀实验/Co-IP
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作者: 信息员
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免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的特异性结合以及Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法,常应用于研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
我们提供的免疫共沉淀(Co-IP)大致实验流程为:构建目标基因的质粒,共转细胞,在细胞裂解液中加入抗诱饵蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G,若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目标蛋白+诱饵蛋白+抗诱饵蛋白抗体+Protein A或G”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。
1、诱饵蛋白及目的蛋白的表达质粒,需测序验证,提供测序峰图文件。
2、如无需脉元转染或转化的,则需提供含有诱饵蛋白及目标蛋白的裂解液5ml以上,如果为原核表达,则需要求蛋白务必为上清表达。
3、如需使用诱饵蛋白及目标蛋白的特异性抗体检测,则需提供至少20ul以上特异性抗体。
脉元生物依据实验设计提供对应的诱饵Western blot实验结果及免疫共沉淀WB结果。保留原始的实验曝光胶片以及免疫共沉淀实验报告。
实验结果展示&
销售部:陕西省西安市新城区白马服饰广场B座6006电话:029-
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免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理IP 是利用抗原蛋白质和抗体的 ...免疫沉淀
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免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理IP 是利用抗原蛋白质和抗体的 ...
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服务名称: 代做IP实验
英文名称: immunoprecipitation assay, IP
简介:IP实验的主要目的是抓取目的蛋白富集目的蛋白,从而有利于后续WB,质谱等实验的顺利开展
参考报价:100-500
最后更新:
产品类别:
总点击数:51
本半年点击数:20
一、服务内容
1、温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度
2、样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育(进行WB验证可以免此步骤)
3、样品与IP抗体进行孵育,之后加入Protein A/G-Agarose进行孵育
4、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理
5、沉淀产物SDS&PAGE或者WB鉴定,质谱鉴定由客户自行确定
6、Western blot检测
(1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光
7、预实验及正式实验服务
二、样品要求(样品处理及保存见附件)
1. 细胞>1&107;组织>100mg;细菌湿重>1mg;植物>100mg;血清>50ul
2. 样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品
三、实验周期
四、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品
2、目的蛋白一抗
3、阳性对照样品(尽量提供)
4、相关文献(可选)
五、提交给客户结果
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告(可选)
六、服务说明
1、待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品
2、免疫沉淀用抗体
3、检测用抗体
4、特异性二抗
七、对照设置:由客户提供
1、空白:无抗体,只有protein A/G
2、阴性对照:无蛋白,有抗体及protein A/G
3、阴性对照:未转染细胞或者基因敲除样品
4、对应的无关空白抗体: Normal IgG
5、蛋白裂解液上清:Input
上海维景生物科技有限公司是一家专注生命科学领域的企业,借助中科院细胞与免疫学实验平台,拥有强大的资金背景支持和专业的团队等资源。公司面向全国市场,迅速发展,广纳英才,现已建成专业生命科学产品销售团队,其中大部份是在生命科学市场上工作多年,有丰富的销售经验,也有良好的客户资源,销售渠道全面覆盖华东大部分工业以及科研客户,团队中免疫学及相关专业硕士以上学历人士达50%,有较强的技术支持能力,在针对专业技术服务中能够提供完善周到的专业化服务,对客户在使用产品过程中提出的问题能满意答复,并可及时传递最新的产品技术资料信息。  
上海维景生物是一家面向全国以专业从事免疫学实验服务外包和免疫学试剂代理销售为主的高新技术企业。公司的服务对象主要为医药科研人员、大型制药公司等。
公司专注开展以下五种免疫学实验服务:免疫印迹(Western Blotting)、免疫组织化学(IHC)、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫共沉淀(ChIP) 。绝对保证实验质量,客户满意后才收取尾款。
同时公司还是美国CMCTAG品牌的全国独家总代理,CMCTAG公司产品专注于标签抗体、内参抗体及标签抗体偶联beads这一领域。其开发的标签抗体偶联agarose beads(affinity gel)在科研以及临床研究中享有很高的声誉,更借助CMCTAG在标签抗体、内参抗体领域的优势,成为免疫印迹WB和免疫沉淀IP实验试剂的专业供应商。因卓越的产品质量及良好的客户口碑,CMCTAG敢于执行倒赔政策,抗体承诺客户不满意即可申请无条件全额退款,如若产品质量证实有瑕疵,则除了无条件全额退款以外,还会倒赔客户一定金额。
维景生物是一家专注标签抗体偶联beads(affinity gel),标签抗体,HRP直标标签抗体,内参抗体等抗体销售,及WB,IP,Co-IP,ChIP实验外包服务的高科技生物公司,咨询热线:021-。 业务咨询 QQ :
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【求助】关于Co-IP实验中对照组的设计
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这个帖子发布于3年零78天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小女子初接触Co-IP实验,就是想研究A蛋白与B蛋白是否存在互作,那设计对照组的时候要怎么设计呢?因为都是内源性表达的蛋白,那我分别用A抗体和B抗体进行Co-IP,然后加IgG作阴性对照,最后将两个抗体和IgG IP下来的蛋白,同时用A抗体和B抗体检测是否有A蛋白及B蛋白,这样可以吗?但是,因为之前也没有文献研究过这两个蛋白是否存在互作,所以,如果结果是阴性的话,究竟怎么能排除是我方法或手法不对,还是真的没有互作呢?可以做阳性对照吗?
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gingivalis 之前没有文献研究过这两个蛋白是否存在互作的话,直接上内源性 CO-IP 不是不可以,就是步子太大了一点。而且的确如你所说,万一有阳性结果,那皆大欢喜,万一没有IP下来,却不能说明任何问题。所以建议可以先考虑作过表达的 IP。 好的,谢谢你!但是我还有一个问题,就是是否这两个蛋白存在互作的话,就能在任何情况都能呢?因为我怕做细胞过表达的话,跟在活体环境不一样
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好的,谢谢你!但是我还有一个问题,就是是否这两个蛋白存在互作的话,就能在任何情况都能呢?因为我怕做细胞过表达的话,跟在活体环境不一样研究是一步步验证的,过表达系统是一个好的系统对照,对于验证内源性蛋白相互作用。
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imrp 小女子初接触Co-IP实验,就是想研究A蛋白与B蛋白是否存在互作,那设计对照组的时候要怎么设计呢?因为都是内源性表达的蛋白,那我分别用A抗体和B抗体进行Co-IP,然后加IgG作阴性对照,最后将两个抗体和IgG IP下来的蛋白,同时用A抗体和B抗体检测是否有A蛋白及B蛋白,这样可以吗?但是,因为之前也没有文献研究过这两个蛋白是否存在互作,所以,如果结果是阴性的话,究竟怎么能排除是我方法或手法不对,还是真的没有互作呢?可以做阳性对照吗? 虽然你这个蛋白互作没人做过但成千上万对的蛋白互作是有人做过的呀读读文献你就知道怎么设置对照了
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