同源重组法构建载体质菇一个DNA为什么要接入两个不同的载体

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-02-13 05:19 标签： 重组载体
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重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?重组质粒构建方法将从荧光假单胞菌2P24基因组中克隆的phlD基因与载体pMDl8一T相连,构建重组质粒pMDl8一T：：phlD,并将该质粒上的phlD切下与载体pET28a(+)相连,构建pET28a(+)：：phlD,转化E．coli BL21(DE3)．用DNA酶切图谱、DNA测序等方法筛选阳性克隆子． 与一个载体连接之后 又重新切下来再接到另外个载体中 这是为什么?
漫步联盟00BC5
哈哈,我就是做这个的,因为基因直接克隆出来,酶切得不太好,而且也不容易连到PET上面,而PMD是克隆载体,上面添加了多聚T,PCR的产物末端通常会多P出几个多聚A,A和T互补,再用连接液连接,就非常容易连上,PMD是高拷贝质粒,将会复制出很多质粒,再酶切提出里面的目的片段,连到PET上就相对容易了
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扫描下载二维码在构建基因表达载体时，需要用限制酶切割含目的基因的DNA和载体。下图表示各种限制酶的作用部位，ampR、tetR是质粒上的两个抗生素抗性基因。回答下列问题。（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端。当质粒用限制酶切割以后，形成个黏性末端和个游离端。（2）同一种酶切割形成的黏性末端（相同、不同），不同的酶切割形成的黏性末端。（3）不能使用，该酶的切点在目的基因上，这样会破坏目的基因。但可以用该酶来切割该质粒，因为。（4）不能单独使用，这些酶只在目的基因的一侧有一个切点，不能把目的基因切割下来。如果只用一种限制酶来切割含目的基因的DNA和载体，那么使用的酶应该是，其酶切产物用连接酶催化连接后，两个DNA片段（含目的基因的DNA片段、被切开的质粒）的连接结果有3种：含目的基因的DNA片段自身环化、质粒自身环化、。（5）在构建重组质粒时，选用HindⅢ和BamHI，或HindⅢ和BstI两种酶对含目的基因的DNA和载体进行切割，可以保证。（1）24（2）相同相同或不同（3）SmaI该质粒有两个抗生素抗性基因（ampR、tetR）（4）HindⅢ或BamHI或BstIEcoRI含目的基因的DNA片段和质粒连接形成的重组质粒（5）重组质粒（DNA序列）的惟一性云南省玉溪一中学年高二上学期期末考试生物答案
（1）2 ? 4 （2）相同 ? 相同或不同 （3）SmaI 该质粒有两个抗生素抗性基因（ampR、tetR） （4）HindⅢ或BamHI或BstI EcoRI 含目的基因的DNA片段和质粒连接形成的重组质粒（5）重组质粒（DNA序列）的惟一性相关试题您的位置：
平菇Cu/Zn-SOD基因的克隆及表达载体构建
平菇Cu/Zn-SOD基因的克隆及表达载体构建
Cloning of Cu/Zn-SOD Gene from Pleurotus ostreatus and Construction of Its Expression Vectors
发布时间：　　浏览量：0　　收藏数：0　　评论数：
钟华城1，，
付永平2，，
1、吉林农业大学研究生学院，长春 130118；&&&&&&
2、吉林农业大学农学院，长春 130118；&&&&&&
3、吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，长春 130118；
超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内超氧阴离子自由基的清除剂，为研究Cu/Zn-SOD 基因在提高食用菌抗逆性方面的作用，从平菇中克隆得到Cu/Zn-SOD 基因，并对其进行了核酸序列分析和蛋白质结构分析，发现其开放阅读框为588bp，编码195个氨基酸，预测的等电点为7.85，利用pBI121 质粒为表达载体，经酶切连接后成功构建了表达载体pBI121-Cu/ZnSOD，为下一步功能验证提供了基础。
平菇；Cu/Zn-SOD；克隆；表达载体
Zhong Huacheng1,，
Fu Yongping2,，
Wang Qi3,*
1、Graduate School of Jilin Agricultural University,Changchun 130118；&&&&&&
2、Agriculture School of Jilin Agricultural University,Changchun 130118；&&&&&&
3、Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi ，Jilin Agricultural University,Changchun 130118；
Abstract：
SOD (superoxide dismutase) is an important scavenger of superoxide radicals of organism, in order to study the application of Cu/Zn-SOD gene in improving the resistance of edible fungus, Cu/Zn-SOD gene was cloned from Pleurotus ostreatus. The bioinformatics methods were used to analyze the amino acid and DNA sequence, the sequence included an open reading frame of 588 bp, encoding a polypeptide of 195 amino acids, and the predicted pI was 7.85. After the cleavage and ligation, the expression vector pBI121-Cu/ZnSOD was constructed.
Keywords：
P Cu/Zn-SOD; C Expression vector
PDF全文下载：
&&&&（14）
作者简介：
钟华城（1988-），男，硕士研究生，主要研究方向：药用菌物学
通信联系人：
王琦（1963-），女，教授，主要研究方向：菌物学
【收录情况】
中国科技论文在线：钟华城，付永平，王琦.&平菇Cu/Zn-SOD基因的克隆及表达载体构建[EB/OL].北京：中国科技论文在线&
[].http://www./releasepaper/content/.
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在基因工程实验中,DNA重组体是指（ ）A.目的基因与载体的连接物B.不同来源的DNA分子的连接物C.原核DNA与真核DNA的连接物D.两个不同的结构基因形成的连接物
红玫瑰mq842
答案是A.所谓 基因 工程（geneticengineering）是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术.是将 外源基因 通过体外重组后导入受体 细胞 内,使这个基因能在受体细胞内复制、转录、 翻译 表达的操作.它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的 遗传物质 —— DNA 大分子提取出来,在离体条件下用适当的 工具酶 进行切割后,把它与作为 载体 的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源物质在其中“ 安家落户 ”,进行正常的复制和表达,从而获得 新物种 的一种崭新技术.它克服了远缘杂交的不亲和障碍.
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