优秀研究生学位论文题录展示Luteolin与MTT法对胃癌药物治疗的实验与临床研究专　业: 临床药学关键词: 胃癌 胃肿瘤 Luteolin MTT 药物疗法 临床实验分类号: R730.53　
R735.2形　态: 共 114 页　约 74,670 个字　约 3.572 M内容阅　读: 内容摘要胃癌在全世界有较高的发病率，每年全球因胃癌死亡的人数仅次于肺癌，位居第二位。特别在亚洲、南美和东欧其发病率一直较高。手术是目前唯一可能治愈胃癌的方式，但是仍有约三分之二的患者在诊断为胃癌时已是失去手术机会的进展期胃癌或已发生转移。Ⅳ期及非根治术、术后复发或转移的晚期患者化疗是主要治疗方法，以防止复发，提高生存率。但是目前胃癌患者化疗的效果较差，且化疗的毒副作用较大，其原因首先是传统的化疗药物疗效有限，不能有效抑制癌细胞的生长，第二是由于没有实现个体化治疗，肿瘤异质性的存在使胃癌细胞对标准的化疗药物或方案存在化疗抗性。因此，寻找新的治疗药物和优化化疗用药或方案成为提高胃癌疗效的当务之急。
论文第一章的研究目的：探讨luteolin对胃癌AGS细胞的抑制与化疗增敏作用，初步阐明luteolin的抗肿瘤机制，为luteolin治疗胃癌的下一步研究提供实验依据。研究方法：(1)用MTT法分别测定经不同浓度luteolin作用不同时间后AGS细胞的抑制率；(2)以流式细胞术分别测定经不同浓度luteolin作用后的细胞周期和凋亡及线粒体膜电位的变化情况；(3)用western-blot法分别测定细胞周期和凋亡调控的有关蛋白的表达情况；(4)用Chou-Tralalay的联合指数法分别计算luteolin与其他抗肿瘤药物联用时的联合指数；(5)以流式细胞术测定luteolin与顺铂联用后的细胞凋亡变化；(6)用分子对接方法寻找luteolin增敏顺铂的潜在分子靶点；(7)用western-blot法测定luteolin与顺铂联用后p53蛋白的表达变化。实验结果：(1)luteolin能以剂量依赖和时间依赖的方式在体外抑制AGS细胞的生长；(2)经luteolin作用后，AGS细胞被阻滞与G2\M期并导致Cdc2、CyclinB1和Cdc25C表达下降而p21\cipl上升；(3)经luteolin作用后，AGS细胞凋亡增加，并导致Bcl-2表达下降而Bax与P53表达上升，同时伴有Caspase-3、6和9的激活及细胞色素c的释放和线粒体膜电位的变化；(4)luteolin与顺铂联用时其联合指数小于0.8；(5)用分子对接方法发现luteolin与p53、BRCA1、JNK、JAK2和NF-κB具有较好的亲和性；(7)luteolin能稳定p53蛋白在细胞的存在。实验结论：通过阻滞细胞周期和诱导凋亡，luteolin能够有效的抑制胃癌AGS细胞的生长，同时它能增敏化疗药物cisplatin对AGS细胞的抑制和凋亡诱导作用。这些结果表明luteolin作为一种植物来源的黄酮类化合物能成为胃癌治疗的潜在药物。
论文第二章的研究目的：探讨luteolin对胃癌SGC-7901的放疗增强作用，初步阐明其机制。研究方法：(1)用克隆形成试验分别测定不同浓度luteolin与放疗联用后对SGC-7901细胞的生存率；(2)甩AO\EB和TUNEL分别检测luteolin与放疗联用后对细胞凋亡的影响；(3)用western-blot法测定与细胞凋亡调控相关蛋白的表达情况；(4)用ELISA法测定PGE2的生成变化；(5)用western-blot法测定COX-2、VEGF、Angl、Ang2和HIF-1α的表达变化；(6)在裸鼠负瘤模型上测定luteolin对放疗的增敏作用；(7)用免疫组化法测定瘤体内微血管密度的变化。实验结果：(1)luteolin能增强放射对SGC-7901的克隆集落形成抑制；(2)luteolin对放射导致的SGC-7901细胞凋亡具有增强作用；(3)luteolin能增强放射线处理过的SGC-7901细胞下调Bcl-2的表达，促进细胞色素c的释放和Caspase酶的激活；(4)luteolin能抑制PGE2的生成；(5)luteolin能下调VEGF、Angl和HIF-1α的表达，同时增强Ang2的表达；(7)在裸鼠负瘤模型上luteolin能增强放射对肿瘤生长的抑制作用，并使血管生长受到抑制。实验结论：初步验证了luteolin的放疗增敏作用，表明luteolin是一种潜在的放疗增敏剂。
论文第三和第四章的研究目的：探讨MTT肿瘤药敏实验对胃癌化疗疗效的影响。研究方法：(1)回顾性分析本院胃癌患者的MTT肿瘤药敏实验资料和临床资料，分析不同胃癌分期和病理分型之间对抗癌药物的敏感率，在MTT敏感组和对照组之间，用Kaplan-Meier法分别分析患者的五年综合生存率，用COX风险比例模型来计算患者死亡的相对危险度hazardratios，并分别比较其毒副反应的发生率；(2)收集MTT肿瘤药敏实验与胃癌疗效的相关文献资料，利用约克大学国立卫生服务中心综述评价标准评价这些文献资料后采集其中的数据，并用Meta分析的方法对这些临床数据进行定量整合，并评判MTT肿瘤药敏实验对所有胃癌化疗患者及其中TNMⅢ和Ⅳ期亚组患者的三年综合生存率和病死率的影响，同时根据：Meta分析的要求分析研究的敏感性、异质性和发表偏倚。研究结果：(1)16种化疗药物对胃癌标本的抑制率较高的几个药物依次为5-Fu、PY、CDDP、EPI和ACM，对不同病理分化类型与TNM分期之间的抑制率和有效率并无统计学差异；(2)MTT敏感组的5年生存率47.5%要优于对照组的45.1%，但是它们之间的差异未见有统计学意义，COX风险比例模型显示年龄＞60、肿瘤分型为Ⅲ和Ⅳ期的女性病人对采用基于体外MTT药物敏感数据的化疗将会倾向于获得更加有益的临床疗效，两组间的毒副反应发生率MTT敏感组要低于对照组，但没有统计学差异；(3)Meta分析的随机效应模型对MTT敏感组和对照组间的综合生存率与病死率比较好后发现，前组的综合生存率与病死率都要优于后组(P＜0.01)，同时Ⅲ期患者中接受基于MTT药敏实验数据化疗的患者无论在综合生存率还是病死率都要优于对照组患者(P＜0.01)，而对Ⅳ期患者的分析结果则表明只有综合生存率要优于对照组患者(P＜0.05)，而病死率未见有统计学差异(P＞0.05)。研究结论：Meta分析的结果表明MTT体外肿瘤药敏实验能够对胃癌的临床化疗用药的选择提供参考依据，进而可以提高胃癌患者的综合生存率，降低病死率，上述结论与我们的回顾性分析存在一定的偏倚，由于还缺乏MTT体外肿瘤药敏实验与胃癌疗效间的关系的大规模多中心的临床研究证据，要最终确证MTT体外肿瘤药敏实验的临床价值，需要更多的研究来证实..……全文目录文摘英文文摘论文说明：主要符号和缩略语说明第一章 Luteolin对胃癌细胞的抑制及化疗增敏作用1.1前言1.2材料和方法1.3结果1.4 讨论1.5参考文献第二章 Luteolin对胃癌细胞的放疗增敏作用2.1前言2.2材料与方法2.3结果2.4 讨论2.5结论2.6参考文献第三章 MTT法对胃癌化疗疗效的回顾性分析3.1前言3.2 临床资料与实验方法3.3结果3.4讨论3.5参考文献第四章 基于MTT肿瘤药敏实验的胃癌化疗系统性评价4.1前言4.2资料与方法4.3结果4.4讨论4.5结论4.6参考文献文献综述：体外肿瘤药敏检测技术的研究进展相似论文,105页,R730,51页,R730,87页,R730,50页,R730,97页,R730,57页,R730,94页,R730,41页,R730,109页,R730,125页,R730,57页,R730,63页,R730,56页,R730,46页,R730,36页,R730,60页,R730,45页,R730,121页,R730,37页,R730,66页,R730中图分类:
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& 2012 book.mtt的统计方法(抑制率) - 细胞实验 - 生物秀
标题: mtt的统计方法(抑制率)
摘要: [mtt的统计方法(抑制率)] 用od直接比较?
转换成抑制率比较?
都用? 关键词:[抑制率]……
用od直接比较?
转换成抑制率比较?
回复都可以呀，你可以查查文献，有的文献是用OD值直接比较，有的则是转换成抑制率的，有什么其实无所谓，只要能达到你的目的不就行了？
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[求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑
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[求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑
关于ＭＴＴ我有很多很多困惑，请各位高手解答一二
１，看文献有说490nm,又说测570nm的OD值的。经过在园子里学习，说是如果是ＤＭＳＯ溶解就是用４９０ｎｍ，但各处说法都是不一样的。是否是哪一个都可以？还是哪个更好？
２，加药后测ＩＣ５０是２４小时后测？但如果我这个细胞本身长的比较慢，２４小时对药物都没反应，怎么办？能否７２小时后测？
３，如果是测生长曲线，测个６天的。隔天换液？还要加药？
４，ＯＤ值是在２以下就很好，还是在１以下？我实验室的师姐都是做２以下就ｏｋ查看完整版本请点击这里：
+小生怕怕+ ( 17:25:01)
1 第一条可以详细讲讲么？能否举例讲？我比较笨，怕误解你的意思
2，如果超过1的话，是否就可能是细胞数过多或者作用时间过长？？大概有大些原因需要注意？
3，谢谢，这个我懂了
4，因为生长曲线也是要加药的，要不要隔天换液呢？不隔天换液，培养基营养被消耗了，细胞生长差，不能反应药物的作用啊。
还有一个问题：测细胞生长曲线的目的是什么？
爱老虎游tt ( 17:25:26)
关于MTT测量波长的问题，我以前也疑惑过。后来看了Roche一个MTT Kit的说明书，上面有一幅MTT吸收波长的图，MTT大概在500-600nm波长附近都有很高的吸收值，所以在此范围内的波长都可以用来检测。而有些酶标仪在此范围内只有490nm可以用，所以有些文献是用490nm波长检测的。我现在手头没有那张说明书所以不能说的很准确，你可以试着去Roche网站上搜一下。
关于OD值，就像fishbody战友所说，在0.2-1之间才有比较好的线性关系。如果按标准步骤在加入MTT4小时后加DMSO溶解，OD超过1就是因为活细胞过多。通常可以靠铺板时少铺些细胞来解决。
测生长曲线的目的是观察你药物的作用效果和作用时间呀
glass ( 17:25:51)
１，看文献有说490nm,又说测570nm的OD值的。经过在园子里学习，说是如果是ＤＭＳＯ溶解就是用４９０ｎｍ，但各处说法都是不一样的。是否是哪一个都可以？还是哪个更好？
570的灵敏度会比490高，因为MTT的波长峰在这个范围
２，加药后测ＩＣ５０是２４小时后测？但如果我这个细胞本身长的比较慢，２４小时对药物都没反应，怎么办？能否７２小时后测？
药物反应慢的话肯定要延长检测时间啦，但是要考虑营养是否能跟的上（这跟你种板的细胞数量和培养基决定），我们实验室现在做的一般都是72、96h检测
３，如果是测生长曲线，测个６天的。隔天换液？还要加药？
测生长曲线就是看细胞本身的生长情况，不用加药，加药反而影响了细胞的正常生长；你可以同时做一个换液组和不换液组的对照，种板细胞数量多的话，6天应该是要换液的，换液不用太勤，会对细胞产生搅动影响，保证能提供足够的营养就可以
４，ＯＤ值是在２以下就很好，还是在１以下？我实验室的师姐都是做２以下就ｏｋ
OD值在2以下都是可以的，0.2~1.2之间的线性关系会更好一些。
one ( 17:26:14)
1、举例说，如果你用DMSO溶解的，测取此溶解液到紫外仪上进行扫描，一般取200-800nm波长范围，即可以得到该物质的吸收峰，此吸收峰中的波长即为你可以使用的波长。
2、如果OD值超过1，可能是细胞数过多，也可能是MTT作用时间过长，也有可能是MTT作用后上清吸弃不完全引起的
4、在做加药的生长曲线的同时，肯定要做个不加药的对照，这样数据才有说服力。如果要换液两者同时换喽。
5、其实生长曲线 我们做得很少。它应该反映的是药物对细胞增殖能力的影响吧。
+小生怕怕+ ( 17:26:37)
谢谢大家，获益匪浅
我为新手，即将做ＭＴＴ实验，在实验思路上很多都理不清楚。
请教另外实验室做ＭＴＴ的师兄后，他们在做量效的时候，也就是做细胞加药后生长曲线变化的时候，用的是２％的血清培养基。
１，说是如果血清过高，很快１，２天细胞就长满了。绝对不可以用１０％血清。
２，在加药前要血清饥饿２４小时，使细胞达到周期同步化
３，我想问细胞计数是否一定要每次都做？保证每次都细胞铺板数差不多？太痛苦了，实验室毕业的师姐说她都没做过，每次都是细胞长满后铺３，４块９６孔板
４，铺板时，各位怎么保证每孔细胞数都差不多。我每加一行，用枪使劲的吹啊吹！！！　但是心里又怕细胞都被我吹死了。
问题越来越多，请各位见谅，我实在是啥都不知道。实验室已经没人做细胞实验了。
one ( 17:27:05)
1、不同的细胞其生长速度是不一样的，对血清的要求也可能不一样，不是有一部份细胞是要用胎牛血清的吗。
2、细胞周期同步化对于一般细胞增殖试验好象用不着吧。除非你要考察药物对某一特定周期细胞的作用。而且细胞同步化的方法有多种，如4度培养过夜。
3、每次细胞铺板当然要尽可能一样，如果连细胞读数都不想做，你还做什么细胞试验。
4、不用每加一行就吹。现在铺板可用排枪，铺一块板中间吹一次就够了，除非你的细胞沉得特快。
+小生怕怕+ ( 17:27:30)
现在又想到了一个超级重要，同时超级弱智的问题：
每个实验方法里都提到使药物终浓度为多少多少。我对这个不能理解。我的理解有两种。举例说：
1，96孔细胞培养板细胞接种，每孔200μl。空白组不加细胞，加入200μl培养液。然后药物配置终浓度为10ug/ml, 8ug/ml, 6ug/ml.4ug/ml 2ug/ml. 将各种浓度的药加入96孔板，每孔10μl。
2，还是96孔板细胞培养板细胞接种，每孔200μl。然后加药时换夜。配置培养基加药，使加药后的培养基药物浓度分别为10ug/ml, 8ug/ml, 6ug/ml.4ug/ml 2ug/ml。然后加入各孔，96孔板每孔200μl.
就是这个药物终浓度到底是什么意思？？是最后每孔的药品终浓度么？
我倾向于2，但在园子里学习时看见有的人做的是1.
+小生怕怕+ ( 17:27:51)
4、不用每加一行就吹。现在铺板可用排枪，铺一块板中间吹一次就够了，除非你的细胞沉得特快。
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我们没有排枪。
细胞计数板也很烂，看不清楚。哦，我知道要每次都计数了。保证每次铺板的每孔细胞数不要相差太多。
+小生怕怕+ ( 17:28:22)
看来我在做时效之前，在进行MTT试验前，应该先测不同接种细胞数条件下的生长曲线？
做一个103，104，105个/mL细胞接种数下7天的生长状态？？
然后看在6天的时候哪个浓度刚达到平台期，那这个接种细胞数就是最适合的么？
有必要么？
one ( 17:29:14)
1、一般铺板时，细胞悬液100ul，待细胞贴壁后，加200l用完全培养基预配好的不同浓度的药液(如果你的最终浓度是10ug/ml，则你的预配液的浓度为15ug/ml，依次类推)
2、至于加药时换不换液，各人爱好。一般如果你的实验在2-3天内结束的话就不用换液了，如时间长那就须换液，也有其他情况需要换液的，比如有的药物在液体中很不稳定，那可能需要常换液了
3、没有排枪，那就辛苦点了。教你一个连续加样的技巧：第1次吸液推按至2档，以后排液均推按至1档，可以保证每次液体相等且不会产生气泡
4、生长曲线做不做由你自己定。细胞数一般以每孔个为宜，视细胞的繁殖速度及细胞个体大小而定，控制对照组OD在0.6-1.0左右即可。
eric930 ( 17:29:40)
看了上边的很受启发，MTT自己原来有些观点看来不大正确，请问一下，我测的MTTOD值都很低，在0.1以下，这样的值是不是没有应用的意义？我如何才能得到范围在0.2-1.0之间的值呢？我的细胞密度是每孔4万个，我的细胞不增值，以前师姐们也是用这个接种密度，药物时间也一致，但是酶标仪检测我都是用570nm，以前师姐们也是，但是我得出的值都是0.1以下，而我师姐们的在0.4-0.5之间，请问问题可能出在什么地方？非常感谢！！！
one ( 17:30:36)
你的MTT重新配制试试。MTT要用生理盐水配，不要用培养基配。
另外，MTT反应4小时后，显微镜下观察一下原来细胞的地方应该形成了网状的黑色颗粒。
one ( 17:32:21)
倒着回答你的问题
3、是可以的，而且这样数据更准，只是xinku你了。而且强烈建议你参照我在上面贴子中介绍的先做个扫描，得到最高峰的那个波长，然后在此波长下测OD，值可能会高好多。
2、建议你在加DMSO前用生理盐水洗涤2遍，注意不要把细胞洗涤下来。
1、加MTT反应4小时后，镜下应该很清晰的网状黑色颗粒，细胞形态是看不到的，但你的呈模糊状，可能原因之一是你的药物是否影响MTT与细胞线粒体间的反应，因此按2洗涤后看一下，原因之二可能是0.1MPBS配制的MTT液不等渗，会否影响细胞与MTT间的正常反应，因此还是建议你用等渗的生理盐水配制。
+小生怕怕+ ( 17:32:50)
药物影响了ＭＴＴ与细胞线粒体的反应。第二个，PBS配置的MTT与细胞不等渗，做的时候都没考虑过PBS的PH值。我是按照细胞书上ＰＢＳ的一个配方直接配的，连ＰＨ值都不知道。
one ( 17:33:13)
凡是与细胞接触的液体尽可能考虑等渗、pH中性等。
上面分析的两个原因并不一定对，遇到问题总得找点理由吧，仅供参考，希望不是误人子弟。
911 ( 17:34:37)
我以前做MTT时曾发生过这样情况，OD值大小不但和细胞数有关，还和所测细胞代谢状况有关，代谢能力很强的细胞数量很少时测出的OD值也会很高，反之代谢能力低的细胞数量很多时OD也会很低。
one ( 17:36:13)
1、紫外仪是指紫外分光光度仪，用于测物质的光吸收的
2、生理盐水是0.9%氯化钠，也有地方写成150mmol/L，是一样的
3、我以前没洗过。洗涤这是没有办法的办法，遇到问题总得想办法去解决喽。一般贴壁细胞这样洗涤应该影响不大。注意，洗涤用生理盐水预先37度预热好，不然给细胞额外刺激可能引起细胞脱落。
one ( 17:36:55)
不是扫描DMSO的吸收峰，而扫描DMSO溶解的MTT与细胞反应生成的那个叫甲zai的化合物的吸收峰。
至于怎么扫描，这是紫外分光光度仪的一个常规测量项目，相当于由仪器以连续波长测一系列的吸收数据，即得到吸收峰。
dotaaa ( 17:37:14)
我刚刚开始培养细胞，所以有很多问题搞不懂，请楼上的各位前辈指点一下：一些文献上说要把细胞数控制在105/ml，但也有文献说是105/孔，所以搞不清楚到底是以孔为单位还是以ml为单位呢？
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标题: MTT应该用“OD值 还是 抑制率”做统计学检验
摘要: [MTT应该用“OD值 还是 抑制率”做统计学检验] 同一种药物，以A,B,C,D,E 5个不同浓度作用于细胞，溶媒作为阴性对照，每个浓度设3个平行孔，MTT法测定OD值，然后在此基础上算抑制率，该实验重复3次。（我的问题是：如果某“一次实验”中，A浓度几个平行孔的OD值与对照组比较，统计学上没有显著性差异；但是A浓度“3次实验”的抑制率与对照组 关键词:[统计学 药物 细胞 标准差 腺苷]……
同一种药物，以A,B,C,D,E 5个不同浓度作用于细胞，溶媒作为阴性对照，每个浓度设3个平行孔，MTT法测定OD值，然后在此基础上算抑制率，该实验重复3次。
（我的问题是：
如果某“一次实验”中，A浓度几个平行孔的OD值与对照组比较，统计学上没有显著性差异；
但是A浓度“3次实验”的抑制率与对照组比较有显著性差异。
那么，显著性差异最终应该以哪个为准呢？）
——为了暂时不把问题复杂化，呵呵，我修改一下我的问题——先不管统计方法是什么，不管实验设计是否有缺陷，各位战友觉得（先入为主的说），应该用OD值、还是用抑制率进行统计学分析？回复抑制率是用OD差值除以对照OD算出来的吗？
那么三次结果的抑制率的均数标准差是多少？置信区间是多少？回复如果这一次实验的数据明显与其他几次的重复实验有差别的话应该是误差回复不应该计算在内回复用ＯＤ比较可行！ＭＴＴ一般用于测细胞或组织的活力！回复首先你每次实验每个浓度只有三个平行，这在样本数来说就有点少，根本就没有统计学意义，另外，MTT实验本身就有许多操作上不可避免的误差，所以应该取三次一起的结果好一些。
如果条件允许的话，LZ是不是考虑在进行一次实验呢？回复你的计算方法就有问题，回复谢谢各位的回复,非常感谢！
回复“ 三磷酸腺苷 ”战友的问题，各个药物浓度的抑制率是根据平行孔的OD“均值”算出来的。
即1次实验中，“一个药物浓度”可以得到“几个”OD值（平行孔），然后根据这几个OD值，可以得到“一个”抑制率。
抑制率＝(阴性对照OD均值-加药孔OD均值）/阴性对照OD均值。
3次实验后，一个药物浓度可以得到3个抑制率。
为了暂时不把问题复杂化，呵呵，我修改一下我的问题——先不管统计方法是什么，不管实验设计是否有缺陷，各位战友觉得（先入为主的说），应该用OD值、还是用抑制率进行统计学分析？回复我一开始用OD值算的，并且作图，可老板说要换算成抑制率，说这样可靠，发表文章也用的是抑制率，没有用OD值的。
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