一般医院病理免疫技术都用什么封片剂啊？ - 华夏病理网论坛
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一般医院病理免疫技术都用什么封片剂啊？
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楼主 发表于
&一般医院病理免疫技术都用什么封片剂啊？有知道的，麻烦回复一下。
标签：病理免疫技术 封片剂
添加参考诊断×参考诊断&&
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1 楼 &&&发表于 17:13:51|
&我们医院自己用的，一般是什么品牌的？谢谢！
粉蓝豆：56
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2 楼 &&&发表于 10:19:51|
&你说的免疫技术是指DAB显色的石蜡切片免疫组化还是免疫荧光啊？DAB显色的石蜡切片免疫组化封片用中性树胶或者中性快干胶都可以啊，AEC显色的用水溶性的封片剂就可以，免疫荧光的话需要专门的防脆变的封片剂或者用甘油也行（但是保存时间很短）。不知道对你有无帮助。
两种都需要，主要是石蜡切片免疫组化。
提供免疫组化试剂的公司都有这些产品，比如福州迈新、北京中杉金桥、上海基因科技等都有，就看你们用哪家的免疫试剂了。石蜡切片免疫组化的封片剂和石蜡HE染色的封片剂一样，是通用的，没什么特殊。
好的，我知道了，谢了。
以己之有限的力量，为无限的事业做一点点微不足道的事。
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【求助】中性树胶如何封片？
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这个帖子发布于9年零109天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
片子已经染好了，想用中性树胶保存下来。具体怎么操作？
不知道邀请谁？试试他们
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yuxunzong edited on
用酒精梯度脱水，再用二甲苯透明，就可以用中性树胶封片了
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用中性塑胶容易产生气泡，听说加甘油和塑胶混合后好点，不知是不是？
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要避免产生气泡，盖玻片在封片的时候保持和玻片45度的角度慢慢下去。
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对，要避免产生气泡，常用的方法是：先滴一滴中性树胶在载片上，然后盖玻片一个边与胶接触形成一条线，盖玻片保持和载玻片小的角度慢慢下去就可以了。甘油（石蜡油）封片主要是用来封带荧光染料的一般不混用
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我的经验是：用玻璃棒蘸少量树胶，最佳量是要聚成一滴，还不能留下来那种，然后在载玻片组织的外缘，左右的一侧、或上下的一侧，（操作习惯问题，我习惯于涂在上端）轻轻地划过，这样可以保持一侧都有适量的树胶，然后把镊子夹持盖玻片一端与树胶线相吻合，成45度角轻轻地放下，树胶会在载、盖玻片间慢慢扩散过去，这样很少有气泡产生。注意：树胶要适量，太少，不能覆盖组织，太多会溢出来。
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滴一滴中性树胶就好，眼科镊夹住盖玻片一角，成45度角，轻轻放下即可！
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中性树胶第一滴滴在组织附近,第二滴滴在其他位置,用盖玻片的一边在第二滴与载玻片接触,待成一条线后,成45度轻轻放下,一般没有气泡,如果有也不会影响你的组织视野,不过尽量压盖玻片以排出气泡.有溢出的树胶可以用二甲苯轻轻擦拭即可.目的是保证组织视野清晰.
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除了以上所述的方法以外，我的经验是，再从二甲苯中取出切片后，不要急于封片，要待二甲苯挥发的差不多快干时，再滴中性树胶，然后将盖玻片与切片成四十五度角的方法盖上，这样中性树胶会靠盖玻片的张力慢慢扩散开来刚好铺满整个切片，又不至于树胶溢出盖玻片，当然还要根据切片的大小来确定滴加树胶的量！希望能有帮助！
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我认为除以上操作方法外，最关键的还有一点：用二甲苯稍稀释一下中性树胶，这样不至于太黏稠，我室多年来一直惯用这种方法，效果不错。祝你成功
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学习了 谢谢
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除上述各位童鞋说的那样，如果还不行就用37度温箱过夜，效果不错，
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khcdoctor我认为除以上操作方法外，最关键的还有一点：用二甲苯稍稀释一下中性树胶，这样不至于太黏稠，我室多年来一直惯用这种方法，效果不错。祝你成功二甲苯和树胶比例多少
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本人在实验室总结的步骤
愿与大家分享
希望与各位高手交流
免疫荧光（所有的步骤仅为个人意见，仅供参考）从切片完成之后开始 免疫实验荧光器材避光场所，湿盒，烘箱等加温设备，吸水的纸，移液枪，1.5ml EP管，微波炉，抗原修复用的容器，ph试纸或ph仪，盖玻片，多聚赖氨酸包被的载玻片等免疫荧光实验一抗荧光二抗Hoechst 33342（与双链DNA结合，显核，蓝荧光）抗体稀释液（含1%BSA的PBS）10×PBS（NaCl 42.5g,NaH­2PO4·2H2O1.482g, Na2H­PO4·12H2O 14.5055g,定容至500ml，配完最好高压灭菌一下）。PBS（10×PBS稀释10倍，再调ph至7.2-7.4。用得可快了）。10×柠檬酸盐抗原修复液（C6H8O7·H2O
2g， Na3C6H5O7·2H2O
11.8g，定容至500ml，配完最好高压灭菌一下）。柠檬酸盐抗原修复液（10×柠檬酸盐抗原修复液稀释10倍，再调ph至6.0）。封片剂（0.672g
NaH­CO3
加40ml蒸馏水（其为0.2mol/L），以1mol/L的NaOH调其ph至9.0左右（ NaOH 加0.75ml左右吧）。吸取1ml此液体，与1ml 100%甘油混匀即可）蒸馏水 免疫荧光程序：包埋好的标本用切片机切石蜡切片(2微米)，并将蜡片贴附于多聚赖氨酸处理过的载玻片上（可购买，我用的是北京中衫的，从不掉片）。经60℃烘片2-8小时（都试过，没啥差别，但非实质性器官应适当延长时间）。二甲苯Ⅰ脱蜡4分钟（若要保证脱蜡完全可将其加热至40-60℃），二甲苯Ⅱ脱蜡6分钟。梯度酒精复水：100%酒精1分钟，95%酒精1分钟，75%酒精1分钟（这个梯度是没问题的，而且都是现成的医用酒精，不用配制），蒸馏水2分钟，PBS 2分钟×2次。进行抗原修复：将切片置于0.1mol/L且ph=6.0的枸橼酸液修复液中，用微波炉中火加热6分钟至微微沸腾，再用中低火力维持10分钟，停止加热后自然冷却20-30分钟（我想还是煮沸6分钟×4次更好）。PBS浸洗2分钟后滴加0.3%tritonX-100透膜剂透膜12分钟（不透膜也没关系，反正细胞早就被切开了）。但注意细胞膜表面的整合蛋白不能加tritonX-100，否则会被洗掉。用PBS 2分钟×2次洗去透膜液，用滤纸擦去标本外的PBS，滴加封闭血清（无色的10%FBS或免疫组化试剂盒北京中衫中的封闭液）在湿盒中37℃封闭30分钟（室温30分钟也可）。用滤纸擦去封闭液，勿洗。滴加适宜浓度的一抗置湿盒中4℃孵育过夜（37℃1小时多也差不多），再用PBS 3分钟×5次洗去一抗，用滤纸擦去标本外的PBS。滴加荧光二抗室温置湿盒中避光孵育1-1.5小时，此时可在荧光显微镜下迅速观察是否着染，以确定终止时间。用PBS 3分钟×3次洗去二抗，用滤纸擦去标本外的PBS。滴加 Hoechst33342 避光孵育2分钟，可对标本进行显核，蓝色荧光，效果极佳。用PBS 1分钟×3次洗去Hoechst 33342，用滤纸擦去标本外的PBS。最后用含抗荧光淬灭剂的封片液碧云天封片（可自配），并在荧光显微镜下立即观察。照相后可用photoshop将同一视野下不同的荧光图像叠加，效果不错，有一篇参考文献支持。
▲注：若一张切片同时做两种抗体的免疫荧光，则加一抗时可将两种一抗按各自所需的浓度混合，但要注意抗体要来源于不同的动物。加二抗时也可将两种二抗按各自所需的浓度混合，但要注意二抗要有不同的颜色。
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本帖最后由 yanlichong 于
12:57 编辑
谢谢分享！请问一下，你的组织是用什么进行固定的，甲醛吗？能否说一下配方
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& & 谢谢分享！请问一下，你的组织是用什么进行固定的，甲醛吗？能否说一下配方
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楼主辛苦了
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有没有细胞怕片的免疫荧光步骤呢？主要是指一些小经验
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来看看吧，应该不错的。
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谢谢分享！
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& & 不好意思，胡乱做过一次，没啥经验可说。
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yanlichong
& & 看来遇见老手了
& & 我用的是冷中性甲醛，即4℃的溶解了4%多聚甲醛的PBS
& & 单纯的4%多聚甲醛不利于抗原性的保存
& & 固定液确实有太多的种类，我只用过中性甲醛与冷丙酮，但冷丙酮的效果也不比中性甲醛好
& & 其实我也经常遇到应该染出来的抗体染不出来的情况，说明我固定、包埋抗原修复等步骤有待进一步摸索。
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& & 我曾经也做过一段时间的石蜡包埋切片，用的是microtome切片的，8um没有切过更薄的，不知道楼主切2um的感觉怎么样，其实一轮切片下来需要很长时间，楼主加油！
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