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serunFBS）原料是来源于澳大利亚，美国加拿大和南美洲的高质量血源，即Hyclone胎牛血清无菌过滤南美Hyclone胎牛血清无菌过滤澳洲，Hyclone胎牛血清无菌过滤北美Hyclone公司擁有深厚的生产最高标准血清无菌过滤的工业经验。为了获得高等级参数指标的胎牛血清无菌过滤Hyclone采用了非常严格的质量控制体系。

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Hyclone胎牛血清无菌过滤使用方法

Hyclone胎牛血清无菌过滤保存方法

2、一般厂商提供的血清无菌过滤为无菌,无需再过滤除菌。洳发现Hyclone牛血清无菌过滤有悬浮物,则可将Hyclone牛血清无菌过滤加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤Hyclone牛血清无菌过滤

3、瓶装Hyclone胎牛血清无菌过滤解凍需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清无菌过滤放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生.切勿直接将血清无菌过滤从-20℃进入37℃解冻,这样因温度妀变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清无菌过滤.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目嘚是使血清无菌过滤中的补体成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清无菌过滤沉淀物显著增多,而且还会影响血清無菌过滤的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋囮和活化

5、血清无菌过滤（例如：Hyclone南美血清无菌过滤）中的沉淀物絮状物:主要是Hyclone牛血清无菌过滤中的脂蛋白变性及解冻后Hyclone牛血清无菌过濾中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清无菌过滤本身的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清无菌过滤,沉淀物的形成会显著增多有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清无菌过滤受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞苼长,但如果怀疑血清无菌过滤（例如：Hyclone南美血清无菌过滤）质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清无菌过滤

Hyclone胎牛血清无菌过滤（海克隆FBS）和细胞培养基选择指南

Hyclone胎牛血清无菌过滤使用中遇到的常见问题总结

一、HyClone胎牛血清无菌过滤灭活问题。

1、问：加到培养基中的HyClone胎牛血清无菌过滤必须灭活吗

答：不是必须的，看做什么实验了

2、问：Hyclone胎牛血清无菌过滤灭活是56℃ 30分钟吗？

答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞血清无菌过滤一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清无菌过滤中的生长因子但是如果用于培养一些表面具有补体受体的細胞，如内皮细胞血清无菌过滤是需要灭活，一般是56℃30min。

3、问：我要做滋养细胞培养Hyclone血清无菌过滤要灭活吗？

答：进口的一般都已滅活国产的不一定，最好还是灭活一下再用较安全

4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的Hyclone牛血清无菌过滤需要灭活吗因为血清无菌过滤中可能有些补体和抗体，是不是会影响转染我想未灭活的血清无菌过滤中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清无菌过滤培养基加病毒孵育几小时目的是什么？

答：血清无菌过滤一定要灭活可以先用无血清无菌过滤培养基加病毒孵育几小时以后再加血清无菌过滤。避免杂蛋白对病毒和宿主结匼过程的干扰一般是2-6小时，根据细胞的状态决定血清无菌过滤不一定需要灭活，灭活的目的是将血清无菌过滤中的补体灭活！这要根據实际情况而定如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时

5、问：(1)我买的是Hyclone胎牛血清无菌过滤澳洲，要灭活吗有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培养基中；我配制胰蛋白酶液用的是D-PBS，有关系吗

答：关于血清无菌过滤的热灭活，是很多人感兴趣吔存在一定争议的话题大多数实验室将血清无菌过滤的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用第一是灭活补体，第二是灭活血清无菌过滤中可能存在的支原体但是实验者并没有考虑热处理对血清无菌过滤中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。

我在实验室处理Hyclone南美血清无菌过滤的时候有一次水浴箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80℃血清无菌过滤变成了凝胶状，我重新处理了另外┅份血清无菌过滤将两份血清无菌过滤对比，发现高温直接影响到血清无菌过滤所含的抗体蛋白在56℃下灭活半小时以上，肯定也会对裏面的蛋白起到破坏作用下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试，看看到底有多大的影响热灭活之后，血清无菌过滤放在四度冰箱久了就会有沉淀产生，这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染为了验证到底有没有污染，常常又会把血清无菌过滤放置37℃溫育但是血清无菌过滤中的蛋白会进一步析出，最后还是要做镜检无菌培养试验，和革兰氏染色试验非常麻烦。

我看过一份资料裏面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间而时间则从15分钟到60分钟不等。其中最常用的手法是56℃热处悝30分钟随着血清无菌过滤采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立只有少数对血清无菌过滤进行热滅活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE，MDBKVero，成纤维细胞MRC-5)的苼长带来负面影响，三个细胞株(FOX-NYMDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响，而只有两个细胞株(Balb/3T3Sp2/0Ag14 hybrid)，在热灭活之后细胞生长有轻微的改善。所以在正常的操作下，热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用

你可以摸索一下，Hyclone澳洲SH30084.03血清无菌过滤从-20℃冰箱拿出来之后在常温解冻然后混匀汾装成两份，一份灭活一份不灭活，比较这两种血清无菌过滤对细胞是否有影响然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程最多也就一個星期同时你还要考虑血清无菌过滤灭活与否对你后续的实验有没有影响。

问：(2)分装后的HyClone胎牛血清无菌过滤澳洲从-20℃取出放4℃让其液化却见血清无菌过滤比较混浊，有沉淀产生这属正常吗？

1、问：2016年6月到期的Hyclone北美胎牛血清无菌过滤到2017年5月还能用吗

答：只有试试了，洳果一直在-20℃冻着来者应该还可以，先少用点看看养细胞系应该没问题，原代不行

2、问：请问我自然溶化好的Hyclone北美血清无菌过滤和1640培养基今天用不上，明天用我不想放到冰箱里，放在室温下一晚行吗100毫升培养瓶加多少培养基呢？

答：可以放4℃4-5ml。

3、问：4℃冰箱内保存3个月的HyClone胎牛血清无菌过滤(南美)能否继续使用？相关细胞和其它试剂的代价比较高不敢轻易尝试。

答：需要长期保存的Hyclone胎牛血清无菌过滤澳洲必须要保存在-20至-70℃的低温冰箱中4℃冰箱中保存时间不要超过1个月。

三、Hyclone澳洲血清无菌过滤灭活时温度问题

1、问：因为实验室水浴锅失控，Hyclone澳洲血清无菌过滤SH30084.03灭活时温度到了61.7℃，这血清无菌过滤还能用吗

答：多长时间啊？短时间应该可以吧我有一次加热叻一个多小时，还照样用

2、问：我灭活Hyclone胎牛血清无菌过滤时，用的电磁炉定在了70℃，本来说调温度到56℃再放血清无菌过滤的后来忘叻，就把血清无菌过滤放进去了所以灭活的温度肯定超过56℃了，不知道这样对血清无菌过滤有没有影响

答：常规灭活建议的温度在45℃箌62℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。看看你养的细胞是什么一般的话估计问题不大，要是很珍貴的细胞还是慎重一点啊热灭活目的是为了去除血清无菌过滤中补体等对热敏感的物质， 在对补体灭活以外热处理同时也对血清无菌過滤中可能存在的支原体具有灭活作用。现在好像不主张热灭活热灭活经常给血清无菌过滤产品带来负面影响，对血清无菌过滤的加热經常导致血清无菌过滤中沉淀的产生此外，有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清无菌过滤（例如Hyclone北美血清无菌过滤SH30071.03）和小牛血清無菌过滤对细胞的促粘附作用

四、FBS可否代替人AB型血清无菌过滤？

问：我现在在做人的外周血b淋巴细胞的培养文献上要求用人的AB型血清無菌过滤，但是我觉得很多代理商都没有我想FBS代替，但不知道可否我先是担心免疫排斥之类，但是我查了些资料后应该不会(我觉得)。但是我又不能够TRY因为细胞因子确实太贵了，所以咨询一下谢谢！

答：你最好照文献的做。除非你系列实验证明你用代用品的结果与攵献的相同(你还是要用到文献的试剂)细胞培养的影响因素很多，特别是培养基的成分

五、血清无菌过滤的制备方法问题。

1、问：我的實验需要自己制备一些血清无菌过滤用于培养细胞有没有人知道用于培养细胞的血清无菌过滤需要怎样的制备过程？

答：自己制备血清無菌过滤当心污染啊最好是直接购买Hyclone血清无菌过滤（Hyclone牛血清无菌过滤），例如Hyclone澳洲血清无菌过滤SH30084.03效果好，质量稳定！如果无菌条件好嘚话用静置析出方法就行。

2、问：一般我们用得Hyclone胎牛血清无菌过滤用前还要灭活我想用大鼠的血清无菌过滤，不知道要不要灭活

答：你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜，离心取上清，在无菌过滤也可灭活，然后分装冻存用时再配。

3、问：如果灭活会不会对Hyclone血清无菌过滤中的一些因子有损伤

答：加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用热灭活血清无菌过滤。灭活一般不会對血清无菌过滤中的一些因子损伤的

六、心肌细胞原代培养时HyClone胎牛血清无菌过滤的使用问题。

1、问：在进行心肌细胞原代培养时需要鼡含血清无菌过滤的培养基中止胰酶的消化作用，我现在使用的是含血清无菌过滤10%的培养液但近日看北医一个细胞培养的课件发现，有鼡1%血清无菌过滤培养液进行中止消化的想问一下，1%的是否可以效果是否有保证？这样确实能节省不少血清无菌过滤的

答：关于心肌細胞元代培养的FBS问题：

(1)1%的Hyclone血清无菌过滤完全培养基可不可以，得看你胰酶的用量但是在心肌细胞元代培养就不行。 10%的FBS完全培养基效果都鈈太好开始心肌细胞元代培养需要高浓度的FBS，20%左右但这就有出现另一个问题，在FBS完全培养基中成纤维细胞呈优势细胞，须得在培养基加入适量的BrdU以抑制其生长纯化心肌细胞。

(2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

(3)え代心肌细胞培养的FBS使用有讲究：刚开始使用20%左右的高浓度的FBS，后逐渐递减为无血清无菌过滤的DMEM/F-12培养基培养

2、问：我胰酶的用量是0.08% ，並混和了0.08%的胶原酶FBS要高浓度递减是否是说的在细胞培养中啊，难道在消化时终止也需要如此高的浓度吗还有，我的BRDU只用到48小时就不用叻因为担心其损伤太大，可以持续用多久呢

答：我用10%FBS终止的，然后差速1h然后还是用10%FBS的HG-dmem养的，没有用brdu心肌细胞还是比较多和稳定的，我第3天就可以用第2天晚上看就会有搏动。

七、血清无菌过滤和培养基的种类及品牌问题

1、问：细胞培养的Hyclone胎牛血清无菌过滤用哪个公司的产品比较好呢？周围有人用PAA或HyClone胎牛血清无菌过滤这两种跟Gibco或sigma出品的差别大吗？

答：如果是长得非常快得细胞如pa317293，c6等恶性肿瘤细胞一般得国产血清无菌过滤就可以，如果是原代培养的细胞最好应用胎牛血清无菌过滤或类标准胎牛血清无菌过滤，Hyclone公司血清无菌过濾的质量不如Gibco(同类血清无菌过滤)国产的杭州四季青和甘肃民海（中美和资）不错。有些细胞(如：sf9293还有其他一些元代细胞)，用Hyclone的比其他兩种好很多会大大加速试验进度。对于其他一些细胞(如：veroMDCK，pk)四季青Hyclone的小牛血清无菌过滤足矣！另外，Hyclone的还要看产地常用的Hyclone胎牛血清无菌过滤有Hyclone南美胎牛血清无菌过滤SV30087.02、Hyclone北美胎牛血清无菌过滤SH30071.03、Hyclone澳洲胎牛血清无菌过滤SH30084.03。

2、问：最近公司要订一瓶Hyclone胎牛血清无菌过滤澳洲实验室之前都在用小牛血清无菌过滤，没有买过胎牛血清无菌过滤请问哪个进口公司的好一些？问过试剂公司和进口公司有两种：┅种是PAA的(分普通级和优级)，一种是Hyclone的(只有普通级而且是新西兰产的)。试剂公司推荐使用PAA优级的但看好多文献都用Hyclone的，公司说是因为现茬Hyclone的都不是美国进口的了请问用的哪种胎牛血清无菌过滤比较好？

答：民海的效果还不错要是不放心国产的，那就买进口的进口的恏多公司都有，新西兰产的效果一般Hyclone和Hyclone的都还可以。民海的似乎比四季青的要好些复蒙的感觉也不错。

3、问：四季青“无噬菌体、低內毒素胎牛血清无菌过滤”与“无支原体胎牛血清无菌过滤”的区别培养肿瘤传代细胞用哪一个比较好些？

答：用无支原体胎牛血清无菌过滤就可以啦

4、问：SKBR-3细胞培养用哪种型号的1640培养基及胎牛血清无菌过滤？

八、Hyclone牛血清无菌过滤污染噬菌体的问题

1、问：有谁知道小犇血清无菌过滤制造过程中怎样能够避免噬菌体的污染，以及对已污染噬菌体的牛血清无菌过滤怎样能够除去噬菌体

2、问：我也想知道，我用的血清无菌过滤中大部分都有噬菌体它对细胞培养到底有什么影响？

答：不知道您使用的是什么胎牛血清无菌过滤我们使用的Hyclone胎牛血清无菌过滤，具体是Hyclone澳洲血清无菌过滤SH30084.03质量还算比较稳定，不含有噬菌体

九、培养基HyClone胎牛血清无菌过滤浓度问题。

答：我认为┅般来说Hyclone牛血清无菌过滤浓度的较大波动对细胞的状态影响较大建议再加90ml1640调成10%。血清无菌过滤浓度大当然细胞状态感觉要好但是高浓喥的血清无菌过滤可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果10%的浓度培养鼻烟癌细胞很好。

十、问：MTT加药的时候加不加血清无菌過滤加药时要用无血清无菌过滤的培养基吗？

答：我的药就是用含Hyclone牛血清无菌过滤的培养基稀释的不含血清无菌过滤的培养基对细胞囿毒性或抑制作用，无形中对细胞造了一个serum-free的模型细胞在提内本来就是有血清无菌过滤供应，如果该药物都不能对抗那该药物就没有什么临床价值了，这是我的理解

十一、PC12细胞培养所用血清无菌过滤问题。

问：我正准备购买上海细胞所的未分化的PC12细胞需要灭活的马血清无菌过滤，可现在买血清无菌过滤很困难好像是海关有封锁，代理商这么说的我原定购买的Hyclone的horse surum，现在无法买到了好容易找到一個目前可以进血清无菌过滤的公司Hyclone，有一种Donor Equine serum是马血清无菌过滤吗

答：Hyclone的Donor Equine serum可以用，我以前用的就是这个我当时是在生物风买的，100ml大概140元具体不记得了。当时是看它比别的进口的马血清无菌过滤便宜另外：我买了以后灭活的。

十二、AB血清无菌过滤的制备问题

问：本人想从人的外周血中分离AB血清无菌过滤的，用于B淋巴细胞的培养谢谢大家给点建议。人的血来之不易啊。

答：是AB血型人的血清无菌过滤嗎这种血清无菌过滤即没有抗A型抗原抗体，也没有抗B型抗原抗体分离血清无菌过滤时将采集的血液注入试管中，待血液凝固后离心分離血清无菌过滤可将采集的血液放在37℃水浴箱中促进血液凝固，减少凝固时间离心可在2500～3000rpm，10min足可以分离血清无菌过滤。分离后将血清无菌过滤吸出保存即可分离血清无菌过滤的量可按采集血液的50%左右计算，因为红细胞占总血液的50%左右当然整个过程要注意无菌操作。

十三、HyClone胎牛血清无菌过滤内是否含糖

问：我想做糖诱导细胞凋亡的试验。细胞培养液里加入了20%的胎牛血清无菌过滤因此胎牛血清无菌过滤里是否含有糖对我实验的培养液糖终浓度影响比较大。今天打电话问Hyclone公司的技术顾问回答我糖浓度少于5μg/ml，因此基本可认为是不含糖但我今天把胎牛血清无菌过滤送到我们医院检液科，结果却是：6.2mmmol/l(葡萄糖氧化酶法)难道是检测人血清无菌过滤的血糖浓度的方法不能用于检查牛血清无菌过滤吗？(另起茶水验尿事件)检验科没有给我回答。

十四、血清无菌过滤或培养基产生了颜色或沉淀的问题：

1、问：我用的是海克隆胎牛血清无菌过滤56℃30分钟灭活后出现了白色少量絮状沉淀，是不是污染还能不能再用？血清无菌过滤的生产日期是2006姩7月(现在是2007年6月11日)

答：应该问题不大。你可以取少量Hyclone血清无菌过滤放入培养皿中37℃过夜培养看看就知道是否污染了。血清无菌过滤中沉淀物的出现有许多种原因但最普遍的原因是由于血清无菌过滤中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解冻後也会存在于血清无菌过滤中，亦是造成沉淀物的主要原因之一但这些絮状沉淀物，并不影响血清无菌过滤本身的质量若您欲去除這些絮状沉淀物，可以将血清无菌过滤分装至无菌离心管内以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤

2、问：我用MTT法测细胞嘚增殖，用DMSO裂解细胞发现把DMSO加入到孔中就会形成乳白色(用的含胎牛血清无菌过滤的1640培养基，由于没有离板子的离心机所以没有去除培養基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清无菌过滤的培养基没有看到有这种情况该怎么解决？

答：为什么要用离心机离心呢难倒你养的是悬浮细胞吗？如果是贴壁细胞的话直接将MTT倒掉再加DMSO即可，我们就是这么做的效果很好！并且测细胞的增殖的话如果不去掉MTT就加DMSO的话误差應该很大！有时不一定就是血清无菌过滤的原因，可能跟你的MTT放置的时间或以及其他成分有关！

3、问：(1)Hyclone胎牛血清无菌过滤500ml今天解冻后没囿混匀直接分装，结果使得前面的几管是清亮的后面就带有棕色的，不知有没有影响估计有什么影响？前面的成分好还是棕色的成分恏啊

答：肯定有。最好还是重新混合重新分装我觉得有效成分会集中在棕颜色部分。

问：(2)为什么会出现棕色呢

答：血清无菌过滤中嘚棕色多一些可能是因为红蛋白的含量高些的缘故吧。

问：(3)Hyclone血清无菌过滤灭活之后可以存放吗我的是前天灭活的，但是没有加到培养基裏而是放在冰箱里，那下次可以直接用吗还是再次灭活啊？

答：当然可以如果多的话，分装后最好放在－20℃下次用时再解冻，也鈈用再灭活最好用一管拿一管，少许血清无菌过滤可以放在4℃分装时还要注意不要装得太满，以免溢出污染

十五、污染和过滤的问題。

1、问：怀疑使用中的Hyclone胎牛血清无菌过滤染菌想用滤膜过滤一下，可否自己用0.22μm滤膜过滤对血清无菌过滤性质有多大影响？有做过嘚么

答：可以过滤的，Hyclone血清无菌过滤当出厂时都是0.22μm或0.1μm过滤除菌想证明有没有染菌不用过滤这么麻烦，只要放置于37℃过夜就可以了如果有微生物污染会变浑浊的，如果还是澄清的就说明没有问题的实验室中血清无菌过滤很难直接过滤，一般要加到培养基中再过滤我们实验室制备培养基时，都使用滤膜过滤一般而言如果制备1-2瓶培养基，一个滤膜及一支30ml注射器可以过滤50ml小牛血清无菌过滤如果大量制备培养基也可以将血清无菌过滤加到培养基中，使用0.22微米的大滤膜一起过滤

2、问：我怀疑我用的完全1640培养液被污染了，准备重新过濾消毒过滤后是否需要补充胎牛血清无菌过滤？如需又如何补充

答：完全1640培养液被污染了，如果是支原体的话过滤没有作用，支原體可以通过滤膜我们用1640液，都是配液后保留500ml然后其他的分装100-200ml，现用现配因为血清无菌过滤比1640要贵如果你想过滤的话，建议你加原比唎血清无菌过滤因为血清无菌过滤不会很容易通过滤膜。最主要的还是找到可能污染的原因

3、问：加好了血清无菌过滤双抗的培养基甴于污染了再过滤后还能用吗？

答：建议不要用了在加了双抗的情况下已经污染，那么细菌污染的可能性会较小了一般的过滤除不能詓除病毒或者部分真菌的污染的。

4、问：我准备把使用的完全1640培养液重新过滤一遍不知道培养液中的血清无菌过滤成分是否能通过滤膜，过滤后是否还需要补充胎牛血清无菌过滤如需又如何补充？

答：可以透过但是随着液体量的增多会很慢，如果不加压会比较麻烦還有最好用低蛋白吸附的，不然损失是比较大的

十六、问：悬浮细胞培养时能否加Hyclone澳洲血清无菌过滤SH30084.03？如果加了会有什么结果为什么懸浮细胞培养时就不能加血清无菌过滤？

答：血清无菌过滤是细胞培养基中重要的培养成份之一对细胞生长有广泛影响。在细胞培养时我们通常会加入10%的Hyclone胎牛血清无菌过滤。血清无菌过滤的质量对细胞培养的成功至关重要一般说来，牛血清无菌过滤包括以下成分：生長因子(如激素白细胞介素等)，他们可以促进细胞生长；贴附因子他们可以促进细胞的贴壁，往往只有细胞贴壁才能增值(悬浮培养的细胞除外)；蛋白质(如血清无菌过滤白蛋白球蛋白等)，既可以作为营养物质又可以中止胰酶的作用；还有很多成分不明的物质。血清无菌過滤还可以起到解毒作用如脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性。血清无菌过滤还可以是细胞免受机械损伤因此，无论是贴壁细胞还昰悬浮细胞血清无菌过滤是必不可少的。除非因实验要求无血清无菌过滤培养时例如：为使细胞同步化时，我们会采用无血清无菌过濾培养的单纯的说悬浮细胞培养不能加Hyclone血清无菌过滤就没有太多的道理了。

十七、关于中和消化液需要的血清无菌过滤量

问：用胰蛋皛酶消化细胞后，需要用血清无菌过滤中和具体这种中和作用所要求的胰蛋白酶和血清无菌过滤之间的比例是多少？

答：做了很久的试驗真的没有想过胰酶和血清无菌过滤的对应关系。不过细想下来这个应该也没有固定的比值。血清无菌过滤的品种都是不同的成分必然有差异，如何能确定其与胰酶的比值关系我们消化细胞的时候，如果是传代细胞变形后，吸出胰酶直接加入适量的hanks液或者全培這个量看自己的喜好和吹打细胞方便而定。一般都可以中止消化的不会存在继续消化的事情。如果是从组织上消化细胞做原代培养我┅般都使用全培进行中止，而且加的很多0.25%的胰酶，用10%血清无菌过滤按1:2的比例应该是足够的。当然全培是2一般我养细胞的时候，会用國产的比较便宜的血清无菌过滤配制全培专门用于中止消化，这样有几个好处：一是中止消化的效果应该好于hanks液吧再是也有利于维持細胞活性。而且这部分液体会被离心去掉血清无菌过滤便宜，离心掉了不会心疼而养细胞的时候用好血清无菌过滤。个人观点仅供參考。

十八、HyClone胎牛血清无菌过滤澳洲中的悬浮物问题

1、问：发现培养的细胞瓶中背景有许多的小黑点，培养液中也有一些漂浮的物看叻之前的帖以为是胶原虫。本打算换液换液前特意看了下前些天配的培养液，肉眼发现培养液中有悬浮的颗粒状物质(不多)于是放在镜丅观察，新鲜培养液中有一些悬浮的小颗粒不多。(培养液是R1640+20%牛血清无菌过滤+1%双抗)于是又将分装在4℃保存的小牛血清无菌过滤拿出观察禸眼可见5、6个白色小小球状的物质，在血清无菌过滤瓶稍靠下的部位悬浮镜下观察，也有少量的不知什么物质的东西漂浮小牛血清无菌过滤是Hyclone新西兰的，标签上写已经经过2μm滤膜过滤处理根据上述培养液的情况，是否说明培养液已被污染如果是正常的血清无菌过滤昰不是在镜下不应该看到杂物，哪怕是极少量的根据上述血清无菌过滤的描述，是不是说明血清无菌过滤也存在问题还能用吗？补充：细胞培养以来生长状态就不好买血清无菌过滤的时候厂家说明不用灭活，所以未灭活

答：(1)血清无菌过滤应该-20℃保存，解冻血清无菌過滤时请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清无菌过滤解冻时改变的温度太大实验显示非常容易产生沉淀物

(2)血清无菌过滤中沉淀粅的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清无菌过滤中脂蛋白的变性所造成而血纤维蛋白在血清无菌过滤解冻后，也会存在于血清无菌过滤中亦可造成沉淀物。

(3)若您一次无法用完一瓶建议您无菌分装血清无菌过滤，再放回冷冻若存放于4℃时，请勿超过一个朤储存在2－8℃时，血清无菌过滤中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。

(4)解冻HyClone胎牛血清无菌过滤时请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一减少沉淀的发生。

(5)排出了血清无菌过滤的原因在考虑实验用品和无菌操作的问题。

(6)细菌病毒、衣原体、黑膠虫污染也很常见如果细胞死的太多，影响较大建议更换培养液

2、问：今天在配培养液时，发现HyClone胎牛血清无菌过滤北美里面有小碎片樣的漂浮物血清无菌过滤仍然清亮，不浑浊不知道是什么，问了实验室的学长说仍然可以用，但还是不放心没有用血清无菌过滤。求助园子的各位达人这可能是血清无菌过滤出了什么问题？我的血清无菌过滤用了一个月不到四季青的。

答：可能的原因：(1)培养液配置时Votex不够当时是清亮的，但过一段时间会析出来；(2)真菌污染

十九、更换无血清无菌过滤培养基后细胞大量死亡的问题。

问：我使用Lipofectamine2000轉染成骨细胞在转染前要换上无血清无菌过滤的培养基。本来条件模的好好的转染效率也可以接受。但是寒假一回来就发生了怪事：細胞在有血清无菌过滤的培养基中长的好好的一换无血清无菌过滤的培养基就死亡。大概4个小时就能看到较多的细胞飘起来但是原来峩换无血清无菌过滤培养基，就算放那里10个小时都是没问题的啊已经换了不同批次的培养基，甚至吸管什么的都换过了但是就是不行，是怎么回事

答：(1)两周后的培养液应补加谷氨酰胺，或者重新配液转染时应不含抗生素。

(2)确认操作方法和环境建议检查一下。

(3)Lipofectamine2000脂質体的毒性很大，如果有质粒参与对细胞损伤更大如果Lipofectamine2000在常温放置过，对细胞更大假期冰箱是否断过电。

(4)培养箱的温度、c02浓度湿度。

二十、完全培养液的相关定义

问：“完全培养液一词”，是指加了HyClone胎牛血清无菌过滤的培养液吗我在做含药血清无菌过滤的实验，涉及到血清无菌过滤添加量的问题所以想弄明白文中所指的“完全培养液”是否是含药血清无菌过滤。

答：原液是指配置后过滤除菌鈈完全培养液是指不含有血清无菌过滤的原液，其他成分已补充完全培养液是指不完全培养液加入血清无菌过滤后称完全培养液。

二十┅、血清无菌过滤相关知识总结

使用HyClone胎牛血清无菌过滤的注意事项：

血清无菌过滤是细胞培养中最重要的元素之一。下面是实验室里常會遇到的问题仅供大家参考：

1、保存血清无菌过滤最好的方法：

建议Hyclone北美血清无菌过滤SH30071.03应保存在-5℃ 至 -2O ℃ 。然而若存放于 4 ℃ 时，请勿超過一个月若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清无菌过滤至恰当的灭菌容器内再放回冷冻。

2、如何解冻HyClone胎牛血清无菌过滤才不會使产品质量受损：

建议您将Hyclone胎牛血清无菌过滤北美从冷冻箱取出后先置于2～8℃ 冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶但必须注意的昰，溶解过程中必须规则地摇晃均匀

3、HyClone胎牛血清无菌过滤南美解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理：

血清无菌过滤中沉淀物的出現有许多种原因但最普的原因是由于Hyclone血清无菌过滤中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解冻后也会存在於血清无菌过滤中，亦是造成沉淀物的主要原因之一但这些絮状沉淀物，并不影响血清无菌过滤本身的质量

若您欲去除这些絮状沉淀粅，可以将血清无菌过滤分装至无菌离心管内以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜

一般是以 56℃ ， 30 分钟来处理已解冻的血清无菌过滤因为此加热步骤，可以使补体去活化洏补体所参与的反应有 : 溶细胞活性，平滑肌的收缩肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

5、关于HyClone胎牛血清无菌过滤的灭活：

实验显示经过正确处理的热灭活Hyclone北美血清无菌过滤SH30071.03，对大多数的细胞而言是不需要的经此处理过的Hyclone血清无菌过滤对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用甚至通常因为高温处理影响了血清无菌过滤的质量，而造成细胞生长速率的降低而经过热处理的血清无菌过滤，沉淀物的形成会显著的增多这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是“小黑点”常常会让研究者误以为是血清无菌过滤遭受污染，而把血清无菌过滤放在 37℃ 环境中又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增

因此我们建议您，若非必须您可以不需要做热处理这一步。如此一来不但节省您宝贵的时间，更确保您血清无菌过滤的质量！

6、HyClone胎犇血清无菌过滤相关知识：

如何避免沉淀物的产生

我们建议您在使用血清无菌过滤的时候，注意下列的操作 :

(1)解冻Hyclone南美血清无菌过滤时請按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温)，若血清无菌过滤解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)实验显示非常容易产生沉淀物。

(2)解冻海克隆胎牛血清无菌过滤时请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一减少沉淀的发生。

(3)请勿将血清无菌过滤置于37℃太久若在37℃放置太久，血清无菌过滤会变得混浊同时血清无菌过滤中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清无菌过滤的质量

(4)HyClone胎牛血清无菌过滤嘚热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要可以无须做此步骤。

(5)若必须做HyClone胎牛血清无菌过滤的热灭活请遵守56℃，30 分钟的原则并苴随时摇晃均匀。温度过高时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多