当对细胞进行pi单染色检测细胞坏死时,为什么死细胞可以被pi单染色检测细胞坏死,活细胞

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为洋葱表皮细胞染色时,死细胞和活细胞哪个更容易染色,为什么
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死细胞更容易死细胞不具有选择透过性了,而具有全透性,也就是说它不再有让某些分子进入或排出的功能了,所有物质都可以进出.
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死细胞,没有选择透过性
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(12分)回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的&。(2)现用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细胞被染色,而活细胞不染色,原因是 &。(3)检测某种毒物能否改变细胞的染色体数目,最好选用细胞分裂至 &期的细胞用显微镜进行观察。(4)在细胞培养过程中,通常在 &条件下保存细胞,因为在这种条件下,细胞中 &的活性降低,细胞的新陈代谢速率降低。(5)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后,发生了排斥现象,这是因为机体把移植的皮肤组织当作 &进行攻击。&
本题难度:容易
题型:解答题&|&来源:2013-陕西省高二下学期期末考试生物试卷
分析与解答
习题“(12分)回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的____。(2)现用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细...”的分析与解答如下所示:
(1)贴壁生长的细胞接触后停止分裂,称为接触抑制。(2)由于活细胞的膜具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内,故不能着色。(3)有丝分裂中期,染色体形态固定、数目清晰,是观察染色体数目的最佳时期。(4)由于在冷冻条件下,细胞中酶的活性降低,细胞的新陈代谢速率降低,所以保存细胞需在冷冻条件下。(5)免疫排斥是指免疫系统将移植的器官当作抗原进行攻击,导致移植器官功能丧失。
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(12分)回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的____。(2)现用某种大分子染料对细胞进行染色时,...
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经过分析,习题“(12分)回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的____。(2)现用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细...”主要考察你对“细胞工程”
等考点的理解。
因为篇幅有限,只列出部分考点,详细请访问。
与“(12分)回答下列有关动物细胞培养的问题:(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的____。(2)现用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细...”相似的题目:
有关单克隆抗体的制备和应用的描述,错误的是:对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产治疗癌症的“生物导弹”原理之一是利用单克隆抗体的特异性识别癌细胞
(共14分)有性生殖的生物产生后代需要进行受精作用,植物体细胞杂交要进行原生质体的融合,单克隆抗体的制备需要进行动物细胞融合,可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程,据图回答相关问题:(1)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉,且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用,在光照强度大于800 lx时两种烟草都不能生长。要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞,较为简便的筛选方法是&&&&。(2)若A、B是植物细胞,在诱导细胞融合之前须经过处理以获得原生质体,一般是采用&&&&酶处理,由a、b到细胞c的过程中,常用的化学促融剂是&&&&,融合完成的标志是&&&&。由d细胞形成杂种植株还要应用&&&&技术把d培养成植株,利用的原理是&&&&。这种育种方法的优点是&&&&。(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的&&&&中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的&&&&上。(4)若a、b分别为骨髓瘤细胞和经某种抗原免疫后的B淋巴细胞,则d细胞的特点是&&&&。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较,具有&&&&的特点。生产上一般不能通过直接培养B淋巴细胞的方法生产单克隆抗体的主要原因是&&&&。(5)下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解,请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。顺序是&&&&(2分)。&&&&
下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解,根据下图回答:&(1)图中①一般经&&&&处理可以得到③,从③到④的过程中一般利用未受精的去核卵细胞为受体,而不用普通的体细胞,原因是&&&&(2分)(2)从A-D中选出④到⑤的过程中正确的操作方法&&&&.把⑤送入⑥的最佳时期是&&&&。&(3)⑦是⑥生出的后代,那么⑦的遗传性状和&&&&最相似(填序号)如果②的数量太少常用&&&&来扩增。要实现⑦批量生产血清白蛋白,则要求③的性染色体是&&&&,利用该方法得到的动物叫做&&&&。(2分)(4)用这种方法生产药物与工厂化生产药物的优越性在于节约资源、降低成本等。⑦和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物,这类的转基因动物被称为&&&&。(2分)&&&&
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活细胞死细胞的染色方法
贝博专业提供细胞分析试剂盒、蛋白提取试剂...|
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&&活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/PI双染细胞的方法染色活细胞和死细胞。
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Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 (主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种
hoechsts33258,hoechst33342二者区别不大,但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些,所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色,而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色! 染色步骤
PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色: 是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料(红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够!
annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。
JC-1染色 JC-1是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer)存在,发射光以绿光(~525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation),发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization),其外膜为负极,内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少,因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时,线粒内JC-l的浓度较高,多以多聚体的形式存在,绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关,因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性,因此,JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。 JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1~5mg/ml),储存于-20℃,用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液,漂洗细胞后直接加入染色液,10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主,当红光信号增强时,红绿相叠,以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测,收集红/绿信号强度,计算其强度比。
钙黄绿素-AM(Calcein-AM):Calcein -AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein -AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光(激发:490 nm,发射:515 nm)。因此Calcein -AM仅对活细胞染色
细胞活力鉴定――台盼蓝染色法
原理: 细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
用品: 1. 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。 2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤: 1、制备单细胞悬液。并作适当稀释(106 细胞/ml) 2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。 3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞
结果统计: 镜下观察,死细胞被染成淡蓝色,而活细胞拒染。 根据下式求细胞活力: 活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100
注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
台盼蓝染色原理 通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。 试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理,试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因
死细胞的细胞膜无屏障作用,台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性,对台盼蓝的透性小,进入细胞慢。若染色时间过长,台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。 方法
Hoechst染色 PI染色 annexin-v染色 染细胞类型 染色部位 激发光 颜色 意义 活细胞(主要是早期凋亡细胞) 坏死细胞或凋亡晚期细胞 细胞核 紫外激发 核染蓝色 检测早期凋亡 细胞核 绿光激发!
核染红色 检测死细胞或凋亡晚期细胞 早期凋亡细胞 早期凋亡细胞 死细胞 活细胞 细胞膜 不定 不定 功能好的细胞绿色为主反之红为主 JC-1染色 台盼蓝染色 Calcein-AM染色 线粒体膜 绿光为主 降解DNA 早期凋亡灵敏指标 早期凋亡 细胞存活率 ? ? 绿荧光光 蓝色 黄绿色 活细胞数
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