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【求教】脐血间充质干细胞培养
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这个帖子发布于11年零149天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
求助原因：实验需要（开题、答辩、朋友需要等）希望和DXY的战友共同学习最近开始养脐血MSC,大家有养过的吗?有文献说只有约25%才养的出来,还有关于原代第一次换液时间也不一致,有人比较过差别吗?还有要裂解红细胞吗）
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Goodluck_XD edited on
丁香园准中级站友
j敬阅您的帖子，我说两句：比较人中期胚胎脐血、新生儿脐血以及成人骨髓3种来源的间质干细胞（MSC）生物学特性，为临床治疗选择细胞来源提供实验依据。方法： 采用L-DMEM培养液分离培养3种来源MSC，流式细胞仪进行细胞表型、细胞周期、细胞凋亡分析，成骨、成脂诱导液分别诱导细胞分化，携带绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒转染MSC，荧光显微镜和流式细胞仪检测3种细胞表达外源基因特性。诱导细胞分化，携带绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒转染MSC，荧光显微镜和流式细胞仪检测3种细胞表达外源基因特性。3种来源标本中均可分离培养出MSC，但新生儿脐血中阳性获得率最低，为29.17%，比您说的较高一点；3者细胞形态、表面抗原表达、体外分化特性相似，但2种脐血MSC原代培养时间长达30d左右，处于G0/G1期细胞百分比大于成人骨髓；3者均能转染表达外源基因，但胚胎脐血MSC中表达率最高，达（56.32±3.28）%
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关于丁香园原代细胞培养
联系方式：
原代细胞专用培养基：
Specialty Media特殊培养基
Low Serum 　低血清 　 　
1001 ECM 内皮细胞培养基 Endothelial Cell Medium
1101 SMCM 平滑肌细胞培养基 Smooth Muscle Cell Medium
1201 PM 周边细胞培养基 Pericyte Medium
1401 MenCM 脑膜细胞培养基 Meningeal Cell Medium
1621 OM 少突胶质细胞培养基& Oligodendrocyte Medium
1631 OPCDM 少突胶质前体细胞培培养基 Oligodendrocyte Precursor Cell
Differentiation Medium
1701 SCM 雪旺细胞培养基 Schwann Cell Medium
1801 AM 星形胶质细胞培养基 Astrocyte Medium
1811 ACM 星形胶质细胞培养基 Astrocyte Conditioned Medium
1901 MM 小胶质细胞培养基 Microglia Medium
2201 MelM& 黑色素细胞培养基 Melanocyte Medium
2211 MelM-2& 黑色素细胞培养基-2 Melanocyte Medium-2
2301 FM 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium
2331 FM-2 成纤维细胞培养基-2& Fibroblast Medium-2
3201 AEpiCM 肺泡上皮细胞培养基 Alveolar Epithelial Cell Medium
3501 SkMCM& 骨骼肌细胞培养基 Skeletal Muscle Cell
4101 EpiCM& 上皮细胞培养基 Epithelial Cell Medium
4131 EpiCM-a& 动物上皮细胞培养基 Epithelial Cell
Medium-animal
4201 MCM& 肾系膜细胞培养基 Mesangial Cell Medium
4601 ObM& 成骨细胞培养基 Osteoblast Medium
4701 SM& 滑膜细胞培养基 Synoviocyte Medium
4801 NPCM& 髓核细胞培养基 Nucleus Pulposus Cell
5201 HM& 肝细胞培养基 Hepatocyte Medium
5301 SteCM& 星形细胞培养基 Stellate Cell Medium
6201 CMM& 心肌细胞培养基 Cardiac Myocyte Medium
7121 TM& 滋养层细胞培养基 Trophoblast Medium
7211 PAM& 前脂肪细胞培养基 Preadipocyte Medium
7501 MSCM& 间充质干细胞培养基 Mesenchymal Stem Cell
MODM-500& 间充质干细胞-成骨细胞分化培养基 Mesenchymal
Stem Cell Oseogenic Differentiation Medium
MODM-250 Mesenchymal Stem Cell Oseogenic Differentiation
MADM-500 间充质干细胞-脂肪细胞分化培养基 Mesenchymal Stem Cell Adipogenic
Differentiation Medium
MADM-250 Mesenchymal Stem Cell Adipogenic Differentiation
三、无血清培养基 　 Serum Free
1111 SMCM-sf 平滑肌细胞培养基 Smooth Muscle Cell Medium- serum free
1521 NM& 神经细胞培养基 Neuronal Medium
1601 OPCM& 少突胶质前体细胞培养基 Oligodendrocyte Precursor
Cell Medium
1611 OsM& 球状少突细胞培养基 Oligosphere Medium
2101 KM& 角质细胞培养基 Keratinocyte Medium
2111 KM-d& 角质细胞培养基（待定） Keratinocyte
Medium-defined
2311 FM-sf 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium-serum free
2611 OKM& 口腔角质细胞培养基 Oral Keratinocyte Medium
3211 BEpiCM& 支气管上皮细胞培养基 Bronchial Epithelial Cell
3231 SAEpiCM& 气管上皮细胞培养基 Small Airway Epithelial
Cell Medium
4121 EpiCM-2& 上皮细胞培养基-2 Epithelial Cell
4321 UCM& 尿道上皮细胞培养基 Urothelial Cell Medium
4411 PEpiCM& 前列腺上皮细胞培养基 Prostate Epithelial Cell
6511 CEpiCM& 角膜上皮细胞培养基 Corneal Epithelial Cell
7311 OEpiCM& 卵巢上皮细胞培养基 Ovarian Epithelial Cell
7511 MSCM-sf& 间充质干细胞培养基 Mesenchymal Stem Cell
Medium-serum free
7611 MEpiCM& 乳腺上皮细胞培养基 Mammary Epithelial Cell
　 　 　 　
Animal Component
Free&& 无动物成分　 　
2121 KM-acf& 角质细胞培养基 Keratinocyte Medium-animal
component free
2321 FM-acf& 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium-animal
component free
&四、低血清无酚红培养基(包含：500ml基础液，血清，5ml生长因子和5ml双抗)
prf1001 内皮细胞培养基 (ECM-prf)
prf1101 平滑肌细胞培养基 (SMCM-prf)
prf1201 周边细胞培养基 (PM-prf) 500ml
prf1401 脑膜细胞培养基& (MenCM-prf) 500ml
prf1621 少突胶质细胞培养基& (OM-prf) 500ml
prf1631 少突胶质前体细胞分化培养基(OPCDM-prf) 500ml
prf1701 雪旺细胞培养基 (SCM-prf) 500ml
prf1801 星形胶质细胞培养基 (AM-prf) 500ml
prf1811 星形胶质细胞条件培养基 (ACM-prf) 500ml
prf1901 小胶质细胞培养基 (MM-prf) 500ml
prf3201 肺泡上皮细胞培养基 (AEpiCM-prf) 500ml
prf3501 骨骼肌细胞培养基 (SkMCM-prf) 500ml
prf4101 上皮细胞培养基 (EpiCM-prf) 500ml
prf4201 肾系膜细胞培养基 (MCM-prf) 500ml
prf4601 成骨细胞培养基& (ObM-prf) 500ml
prf4701 滑膜细胞培养基 (SM-prf) 500ml
prf4801 髓核细胞培养基& (NPCM-prf) 500ml
prf5201 肝细胞培养基& (HM-prf) 500ml
prf5301 星形细胞培养基(SteCM-prf) 500ml
prf6201 心肌细胞培养基 (CMM-prf) 500ml
prf7121 滋养层细胞培养基(TM-prf) 500ml
prf7211 前脂肪细胞培养基 (PAM-prf) 500ml
prf7501 间充质干细胞培养基& (MSCM-prf)
五．无血清无酚红培养基(包含：500ml基础液,5ml生长因子和5ml双抗)
神经细胞培养基& (NM-prf) 500ml
prf1601 少突胶质前体细胞培养基 (OPCM-prf) 500ml
prf1611 球状少突细胞培养基 (OsM-prf) 500ml
prf2101 角质细胞培养基 (KM-prf) 500ml
prf2111 角质细胞培养基(特定)& (KM-d-prf) 500ml
prf2611 口腔角质细胞培养基 (OKM-prf) 500ml
prf3211 支气管上皮细胞培养基& (BEpiCM-prf) 500ml
prf3231 小气道上皮细胞培养基& (SAEpiCM-prf) 500ml
prf4121 上皮细胞培养基-2& (EpiCM-2-prf) 500ml
prf4321 尿道上皮细胞培养基 (UCM-prf) 500ml
prf4411 前列腺上皮细胞培养基& (PEpiCM-prf) 500ml
prf6511 角膜上皮细胞培养基 (CEpiCM-prf) 500ml
prf7311 卵巢上皮细胞培养基 (OEpiCM-prf) 500m
六、Sciencell干细胞培养基 ：
&（一）、人胚胎干细胞培养基（无血清无异源）（STEMium& Human Pluripotent Stem Cell
Growth Medium）
货号：5801
（二）：间充质干细胞培养基（无血清）（Mesenchymal Stem Cell Medium-serum free）
货号：<font COLOR="#11（三）：间充质干细胞培养基（低血清）（Mesenchymal Stem Cell
货号：7501
（四）：间充质干细胞-成骨细胞分化培养基（低血清）（Mesenchymal Stem Cell Oseogenic
Differentiation Medium）
货号：7531
（五）：间充质干细胞-脂肪细胞分化培养基（低血清）（Mesenchymal Stem Cell Adipogenic
Differentiation Medium）
货号：7541
七、细胞转染试剂盒
0903 内皮细胞转染试剂盒 250transfections
0913 成纤维细胞转染试剂盒 200transfections
0923 上皮细胞转染试剂盒 100transfections
0933 间充质干细胞转染试剂盒 250transfections
0943 星形细胞转染试剂盒 250transfections
0953 平滑肌细胞转染试剂盒 250transfections
0963 角质细胞转染试剂盒 250transfections
0973 上皮细胞转染试剂盒II 200transfections
八：试剂(Reagent)0010 FBS& 胎牛血清 10ml
0025 FBS& 胎牛血清 25ml
0500 FBS& 胎牛血清 500ml
0103 T/E& 胰酶EDTA消化液 100ml
0113 TNS& 胰酶中和液 100ml
0123 ECDS 非酶细胞裂解物 100ml
0133 CFM& 细胞冻存液 50ml
0143 SFCFM& 无血清细胞冻存培养基 50ml
0203 TB& 台肦篮(0.4%) 50ml
0303 DPBS& 磷酸盐缓冲液 500ml
0313 HBSS& 平衡盐溶液 500ml
0403 PLL&& 多聚赖氨酸1 mg/ml (500X)
0413 PLL&& 多聚赖氨酸10 mg/ml
0503 P/S&& 青霉素/链霉素溶液 5ml
0513 CCGW& 细胞培养超纯水 500ml
0703 BPE& 牛脑垂体提取物 25mg
0713 BPE& 牛脑垂体提取物 100mg
0803 ITS&& 胰岛素铁硒传递蛋白(100X)
0813 L-GLu& 左旋谷氨酰胺溶液 (200mM)
九、细胞检测试剂盒货号8008 I型胶原细胞检测试剂盒(Col)
8018 纤维母细胞粘附检测试剂盒(Fibro)
8028 MTT细胞活力和增殖检测试剂盒(MTT)
8038 WST-1细胞活力和增殖检测试剂盒(WST)
8058 细胞衰老检测试剂盒(CSA)
8068 β-半乳糖苷酶比色检测试剂盒(GalC)
&8078 LDH细胞毒性检测试剂盒(LDH)
8088 TUNEL色标法细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL )
8098 一氧化氮色标法检测试剂盒(NO)
8108 硝基苯磷酸钠（pNPP）磷酸酶检测试剂盒(NPP)
8118 孔雀绿磷酸盐检测试剂盒(MGPA)
8128 比色法钙分析试剂盒(CCA)
8138 活/死 细胞染色试剂盒(CSK)
8148 比色法GAPDH分析试剂盒(GAPDH)
8158 体外管腔形成分析试剂盒(IVTFA)
8168 总抗氧化能力检测试剂盒(TACA)
8178 胶原I-3D凝胶试剂盒(C3DGK)
8188 胶原I-细胞培养表面包被试剂盒(CCCSCK)
8198 超氧化物歧化酶分析试剂盒(SOD)
8208 支原体PCR检测试剂盒(MYCO)
8218 过氧化氢酶活性分析试剂盒(CAT)
8228 细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒(CAS)
十、重组人生长因子2012 rhEGF 重组人表皮生长因子
2032 rhEGF 重组人表皮生长因子
2052 rhFGF-b 重组人成纤维细胞生长因子
2062 rhFGF-b 重组人成纤维细胞生 长因子
十一、细胞生长因子1052 内皮细胞生长因子ECGS
1152 平滑肌细胞生长因子
1162 平滑肌细胞生长因子(不含血清) SMCGS
1252 周细胞生长因子PGS&
1452 脑膜细胞生长因子 MenCGS 1562 神经元生长因子 NGS
1652 少突胶质前体细胞生长因子OPCGS&
1662 少突胶质细胞生长因子 OGS
1672 少突胶质前体分化生长因子 OPCDS
1752 雪旺细胞生长因子SCGS&&
1852 星形细胞生长因子AGS& 1952
小胶质细胞生长因子MGS&
2152 角质细胞生长因子KGS&&
2162 角质细胞生长因子(不含BPE)KGS-2&
2172 角质细胞生长因子(不含动物成分) KGS-acf
2252 黑色素细胞生长生长因子MelGS&
2262 黑色素细胞生长因子(不含TPA) MelGS-2
2352 成纤维细胞生长因子FGS&
2362 成纤维细胞生长因子-2 FGS-2
2652 口腔角质细胞生长因子 OKGS
2372 成纤维细胞生长因子(不含动物成分)FGS-acf
2652 口腔角质细胞生长因子OKGS&
3262 支气管上皮细胞生长因子 BEpiCGS
3272 小气道上皮细胞生长因子 SAEpiCGS
3552& 骨骼肌细胞生长因子 SkMCGS
4152 上皮细胞生长因子 EpiCGS
4162 上皮细胞生长因子-2 EpiCGS-2
4182 动物上皮细胞生长因子EpiCGS-a&
4252 肾系膜细胞生长因子 MCGS
4352 尿道上皮细胞生长因子UCGS&
4452 前列腺上皮细胞生长因子PEpiCGS
4652 成骨细胞生长因子ObGS&
4752 滑膜细胞生长因子SGS&
4852 髓核细胞生长因子 NPCGS
5252 肝细胞生长因子 HGS
5352 星形细胞生长因子 SteCGS
6252 心肌细胞生长因子 CMGS
6552 角膜上皮细胞生长因子 CEpiCGS
7152 滋养层细胞生长因子 TGS
7252 前脂肪细胞生长因子 PAGS
7352 卵巢上皮细胞生长因子 OEpiCGS
7552 间充质干细胞生长因子 MSCGS
7562 间充质干细胞生长因子(不含血清) MSCGS-2
7652 乳腺上皮细胞生长因子MEpiCGS
以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。关注今日：2 | 主题：482828
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【求助】我的人骨髓MSC状态如何
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这个帖子发布于2年零48天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位师兄师姐，麻烦帮忙看一下培养了5天的第四代人骨髓MSC状态如何，同一培养瓶照的相片显示有的MSC细胞形态呈比较典型的梭形，有的呈不规则，变大变宽了，第一次养MSC，不知道什么形态才是正常的，麻烦大家看下吧，谢谢了这是中倍镜的
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这是第六天的，细胞怎么成这种形态了啊，用的是高糖DMEM+10%FBS
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这是第7天的，低倍镜，感觉细胞不是那种梭形的了
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你看下你的跟我们的是一样的吗
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谢谢前辈的回帖，请问下你们的这个是正常细胞形态吗？
我找老师看了下，他说细胞正常应该是 梭形，细长的，如果又宽又扁那就是分化了，你们的这个如果是正常细胞的话，以后我就拿你们这张图做参照了，求帮助，求解答
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最近看到一篇文章，技术细节可能对你有帮助Horn, P., et al., Isolation of human mesenchymal stromal cells is more efficient by red blood cell lysis. Cytotherapy, ): p. 676-85.
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为什么附件上传老是失败，PDF格式和zip格式都不行？？？
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colonel100 为什么附件上传老是失败，PDF格式和zip格式都不行？？？ 谢谢前辈，这篇文献对我帮助很大，谢谢！
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1虎皮猫大人1
谢谢前辈，这篇文献对我帮助很大，谢谢！ 客气了我正在做，随手转而已
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最近也在养，说说我的看法。都第五天了，细胞太稀了，增大接种密度。如果是原代细胞，第四代已经有点老了。
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发图的细胞活力不够，一般传代的密度比较大，人的MSCs增殖比大鼠的慢，但是形态很均一的长梭状和透亮的，边角比较清晰，状态好的时候排列很整齐，局部朝向一致。
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关于丁香园我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何(大鼠,骨髓间充质干细胞,培养瓶,不规则) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何(大鼠,骨髓间充质干细胞,培养瓶,不规则)
摘要: [我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何(大鼠,骨髓间充质干细胞,培养瓶,不规则)] 各位战友，麻烦帮我看一下培养了11天的SD大鼠原代MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何，同一培养瓶照的相片显示有的MSC细胞形态呈比较典型的梭形，有的呈不规则形，有的地方细胞相当密集，而有的地方细胞又很稀疏，因为是大鼠MSC培养新手，不知这样的细胞状态如何，能否传代？现上传部分照片求助。
关键词:[大鼠 骨髓间充质干细胞 培养瓶 不规则 传代]……
各位朋友，麻烦帮我看一下培养了11天的SD大鼠原代MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何，同一培养瓶照的相片显示有的MSC细胞形态呈比较典型的梭形，有的呈不规则形，有的地方细胞相当密集，而有的地方细胞又很稀疏，因为是大鼠MSC培养新手，不知这样的细胞状态如何，能否传代？现上传部分照片求助。
回复继续上传 回复再看看这张 回复再看一下这一张 回复真的没有人肯帮助吗？再帮我看一下传代完第二天的照片，怎么都成这种形态了？养了几个月细胞，每次都这样，很无助啊 回复再传一张看看 回复第一张的形态是相符的,但是要经过一些免疫组化排除其他细胞群,骨髓间充质干细胞在生长达70%时就要传代,否则细胞会死亡,你后面的细胞图片就有死亡的细胞回复细胞状态还可以呀。建议先用简单的方法看看，如成骨诱导液诱导后，用ALP或Von Kossa染色看看。回复感谢以上两位朋友的回答，现在我们的MSC已经传到第三代，但是同一批第二代细胞传下来的两瓶第三代细胞形态相差甚大，请各位朋友帮忙看看问题出在哪里，什么原因引起的，有何对策，现在上传第三代第5天的MSC细胞图片回复这是一张细胞呈集落样生长的图片，MSC呈放射状聚集在一起 回复下面一张MSC排列紊乱 回复状态还可以啊！用低糖的培养液，不过到了六代以后形态就有点变了。回复这是一张细胞呈集落样生长的图片，MSC呈放射状聚集在一起再上传一张该瓶第三代MSC细胞长到第9天的图片 回复该瓶细胞当天进行传代，再请各位朋友对该细胞状态给与评论回复总体上看，您的细胞状态还是不错的刚开始培养时，细胞有呈聚集样生长是正常的如果有大量圆形折光性强的死细胞，可以半量换液加以去除msc大约经过二到三次传代会达到稳定状态，细胞呈现均匀贴壁生长，与其他种类细胞相比，折光度略低此时如果细胞生长缓慢，可由原来低糖的培养基换成高糖培养基传代七八次以后，由于分化等原因细胞状态可能发生变化，所以试验尽可能采用在此之前细胞完成个人之见祝你成功回复不错的MSC,恭喜!回复我觉得你的细胞长得不错，传代后成为那种样子是因为细胞过少，细胞称为片状生长形态就变了。看看你传代是不是细胞过少或者死亡过多？当然，应该进行鉴定。祝你成功。回复没有养过SD大鼠的原代MSC，倒是养过人的原代MSC，也贡献出来作为参考，希望对F502朋友有帮助！1、培养基是高糖的DMEM+10%FBS，细胞形态似典型间质细胞形态，延长平铺，呈现拉丝状，透光性强。2、考虑到其干细胞的分化潜能，故每次传代都较稀，平均1传3-4，大约4天需传代1次，第2-3代时大量冻存备后用！这是低倍镜下拍的照片，不是很清楚，只能看到轮廓！ 回复这是中倍镜下的，看得比较清楚！形态也比较典型！ 回复这是高倍镜下的，不很清楚，但隐隐约约也能看到轮廓！ 回复我也遇到了一样的情况 PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦 传代 细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了 , 你现在 的还好 吗, /还有你是否也注意 到, RAT 的MSC培养时 会出现 多核的大细胞 里面常包含 好几个 折光度略低的 小细胞 ??/ 我每次 都见得到, 是不是 我还是那里做的 不对???都好久了, 细胞还是养不好 闹心 !!! 就是不知道 错在哪里 ??回复感谢以上几位朋友的热心帮助和悉心指教，现在继续上传第四SD大鼠MSC第三天照片，请各位朋友继续关注我们的帖子，非常感谢大家的支持！ 回复我也遇到了一样的情况 PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦 传代 细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了 考虑可能为细胞老化的缘故，建议：1.培养方法的选择：全骨髓贴壁法方法简便易行。2.培养基的选择：低糖型DMEM或者低糖型DMEM-1640，胎牛建议使用进胎牛口,如Hyclone 或Gibico；浓度为10％。PH值最好在7.2左右，最好稍偏酸。培养基最好是新鲜配置的。3.首次换液的时间：我的是48h后换液。4..首次传代的问题：消化酶用量不要太多，特别是首次消化的时候，以免损伤细胞，影响其活力。消化的时间不能太久。另外首次传代的时间的不要求细胞都长得很满，可能只要是集落长得比较满的话可以传代，一般长满70％左右就可以传代。一般是6-10天左右，传代的时候如果细胞的浓度不够的话可以2：1传代。5..接种细胞的密度问题：细胞接种密度以大于10的五次方为宜。回复谢谢 楼上 的, 我今天 再试一次回复你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激回复你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激我们一般使用100--120g的，股骨比较容易分离，贴壁细胞也更多....你可以试试看回复你好，请问一下楼主，你取原代细胞的时候，是一根大鼠股骨的细胞种到一个25cm^2的里面的吗？我感觉你的细胞养的挺好的，我的里面杂细胞较多，我在想是不是我原代接种密度的问题。非常感谢你的帮助！回复养的挺好的，有一张我觉得密度太大了。回复有没有人养过小鼠的?回复对啊，小鼠的BMSC怎么养啊？
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