提取的酵母rna的提取总RNA要怎样

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-04 14:39 标签： 酵母菌溶胞物提取物
苯酚法提取酵母RNA
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提示： （一）原理 细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在.因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质.分离并除去.将细胞置于含
（一）原理
&&& 细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在.因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质.分离并除去.将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相.核酸溶于水相,被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相,或者在两相界面处形成凝胶层.
&&& 本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离,而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性,在低温条件下从水相中除去,这样得到的RNA 制品中混杂的DNA 极少.用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品,可进一步除去其中少量的蛋白质.最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来.本法得到的RNA 不仅纯度高,而且多呈自然状态,可供继续研究之用.
（二）主要仪器和试剂
（1）台式高速离心机（10 000r/min）
（3）Eppendorf 管（1.5mL）
（4）紫外可见分光光度计
（5）冰箱或冷柜（0~4℃）
（6）振荡器
（7）分析天平（精确至0.1mg）
（8）真空干燥器
2、试剂（均为分析纯）
（1）SDS-缓冲液：0.3% SDS,0.1mol/L NaCl,0.05mol/L 乙酸钠,用乙酸调到pH5.0.
（2）饱和酚液：重蒸苯酚用（1）溶液饱和.
（3）氯仿-异戊醇液：24﹕1（V/V）.
（4）含2%乙酸钾的95%乙醇溶液.
（5）无水乙醇
（7）溶菌酶（B.R.）（1mg/mL）
（三）操作步骤
1、取1g 活性干酵母在研钵中研碎,加10mL SDS-缓冲液使成匀浆,洗入各Eppendorf管（略少于管容积的一半）,加溶菌酶0.1mL,混匀,室温静置10min,再加等体积饱和酚液,室温下剧烈振荡5min.
2、置冰浴中分层,在0~4℃低温环境下,10 000r/min 离心10min.吸出上层清液,转入新的Eppendorf 管,加等体积氯仿-异戊醇,室温下剧烈振荡2.5min,然后10 000r/min 离心5min.
3、吸出上层清液,转入另一新Eppendorf 管,加2 倍体积95%乙醇（含2%乙酸钾）,在冰浴中放置30min,使RNA 沉淀.
4、再以10 000r/min 离心5min,弃上清液,沉淀用少许无水乙醇和乙醚各洗一次,即加乙醇或乙醚,迅速离心各1min,保留沉淀.
5、倾去乙醚后,减压真空干燥,准确称重,记录.
6、RNA 制品纯度的测定及RNA 提取率的计算与浓盐法相同.
（责任编辑: 佚名 ）
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新闻热点排行酵母rna提取时用的稀碱法为何提取的多是rna而非dna
心系冬季25957
1.如你所问,既然是RNA的提取方法,自然提取的就是RNA,否则方法就有问题了；2.提取RNA和DNA的区别主要表现在提取试剂的pH值,提取DNA的试剂可以同时提出RNA,所以在提DNA的步骤里一般都要有加RNase的步骤,而在适宜提RNA的试剂pH条件下（<7）,DNA和蛋白都会被析出,只保留RNA在溶液里.3.其实不管什么提RNA的方法,最后产物中或多或少的还是有少量或微量的DNA的.
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原因是DNA和RNA的结构不一样。RNA的戊糖上2位和3位都有羟基，在稀碱作用下形成2,3-环核苷酸而水解，溶解在提取液中，而DNA很稳定，戊糖2位上没有羟基，不能形成环状物，不被水解成单核苷酸，离心后位于沉淀中，所以稀碱法提取的多是RNA而非DNA。
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酵母总RNA提取方法
问：&请问大家提取酵母的总RNA都用什么方法？有好用的试剂盒吗？酵母总RNA提取应该注意什么？答：使用热酚法抽提酵母RNA,很好用，至今没有失败过。(1)&&将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。(2)&&稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。(3)&&OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min,弃培养基。(4)&&将细胞悬浮于400&l AE缓冲液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2）。(5)&&加入1/10体积的10% SDS，充分混合。&(6)&&加入等体积在65℃预热的酸性酚（pH4.5），混合。(7)&&65℃加热5min，冰上放置10min。(8) &在室温下8000rpm/min离心10min。(9)&&取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min离心8min。(10)& 取水相，加入等体积氯仿/异戊醇（49∶1）10000rpm/min离心8min。(11)& 加入1/10体积3M pH5.2的醋酸钠，2.5倍体积的纯乙醇，-20℃过夜沉淀。(12)& 沉淀样品于4℃离心5min，去除液体。(13)& 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用适量DEPC水溶解RNA。&
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