如何选择qpcr内参选择预混液

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-28 11:38 标签： qpcr内参选择
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&&YZY qPCR 预混液（SYBR Green）
YZY qPCR 预混液（SYBR Green）
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成立时间：2011年
入驻丁香通年限：5年
商家等级：普通客户
产品信息完整度：63%
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产品简介 YZY qPCR Premix是一种采用SYBR Green染料法进行荧光定量PCR扩增反应的预混系统。该试剂为2×浓度的预混液，进行实验时仅需要添加引物和模板，反应液的配制和操作方便简单。该系统采用热启动Taq酶，与优化的PCR缓冲液组合，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，增强PCR的特异性和扩增效率，进行高灵敏度的荧光定量PCR反应。 YZY qPCR Premix可对基因组、质粒、病毒和cDNA模板在较宽的浓度范围内进行可重复的、灵敏和特异的定量检测。
产品特点 采用热启动Taq酶，具有高扩增效率、高灵敏度、高特异性的特点； 优化的PCR缓冲体系，在较宽的线性范围内可进行准确的检测和定量； 良好的扩增均一性，对2倍浓度差异的模板可进行准确区分； 2×浓度的预混系统，仅需加入引物和模板即可进行反应，操作简单方便； 可适用于不同类型的荧光定量PCR仪。
保存条件 -20℃避光保存； 使用时应尽量减少试剂的冻融次数。
产品规格 1.25 ml×4管（25μl×400次/50μl×200次）
在较宽的模板浓度范围内有较高的扩增效率，并有较宽的线性范围 定量的质粒DNA模板按10倍浓度梯度进行稀释，最高浓度为4×108 copies，最低浓度为4 copies。在该浓度范围内可进行准确定量。
扩增均一性和高灵敏度、特异性 低至10 copies的质粒DNA模板重复检测10次，扩增的均一性好，Ct值的变异系数小（CV%=1.4%），且均为特异性扩增产物。
精确且可重复的高区分度 定量的质粒DNA模板按2倍浓度梯度进行稀释，每个反应3个重复。2倍浓度差异的DNA模板可完全重复并进行精确的区分。
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qPCR SYBR Green supermix
反转录步骤
效率低，后续扩增Ct值滞后
后续qPCR非特异性扩增
配反应体系时移液多个组份麻烦
同一个基因各样品间反转录效率
不一致，结果重现性差
样品太多，加样加到眼花，不知道
哪些孔加好了还是漏加了
尤其是使用384孔板的时候
扩增效率偏离正常值（90
非特异性扩增
线性范围窄得到的Ct值不可靠
需要做很多优化来摸索条件
试剂不能通用所有仪器
反应需要近2小时太长
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Synthesis kit用过就会喜欢上！
推荐专为Real-time RT-PCR而优化的反转录试剂盒iScript Kit，热销近10年：
2 管装预混液
只需加入RNA模板即可，移液步骤少，减少误差，提高重复性
使用Oligo-dT和随机引物的混合物
RNA序列全覆盖，不用担心离3’端较远区域cDNA产量低
灵敏度极高
RNA上样量最低至100 fg, 能用于microRNA研究*
反转录效率线性范围广（100 fg C 1 ug）
同一个基因不同样品间无论表达量高低，转录效率一致，这样qPCR的结果才能真正反映RNA的水平
不用2小时，不用1小时，只需45分钟即可，且不用中途拿出来再加任何组分
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无缝匹配Bio-Rad及其它无需ROX校正的仪器
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经实验验证通用于各品牌仪器，无需单独加入ROX染料
伯乐公司中国呼叫中心：800
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HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品报价：询价
更新时间： 13:56:20
产地：江苏
品牌：Vazyme
型号：R211-01
厂商性质：生产商
公司名称：
南京厚百电子商务有限公司
产品关键词：
Vazyme,反转录酶,RT-PCR/qPCR
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预混液形式的两步法RT-PCR/qPCR首选试剂HiScript?&II 1st Strand cDNA Synthesis Kit&&?&基于高效的HiScript?&II Reverse Transcriptase?&针对RT-PCR及RT-qPCR均有不同的kit可供选择?&即用型的SuperMix预混液使用非常方便?&gDNA wiper Mix可迅速彻底去除基因组污染&&&&&&HiScript?&II两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒以高性能的HiScript?&II Reverse Transcriptase为基础，对反应体系进行了大幅简化，特别是即用型的SuperMix系列产品，将合成高质量第一链cDNA所需的所有成分合并为一管5 × Mix，只需加入RNA和水即可进行逆转录反应，且RNA体积最多可加至反应总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应，且SuperMix在-20℃不会冻结，使用方便。RNA模板中的基因组污染往往会对后续的定量PCR结果造成很大干扰，而现有的RNA提取方法难以彻底避免基因组污染。我们建议您选择+gDNA wiper的HiScript?&II QRT SuperMix for qPCR (R223)和HiScript?&II Select Q RT SuperMix for qPCR (R233)。RNA 模板首先用4 × gDNA wiper Mix短暂处理，可彻底去除高达100 ng/sample的基因组DNA污染，保证后续的定量结果更加可靠，并且无需跨外显子/内含子设计引物；随后直接加入5 × qRT SuperMix II，即可立即进行逆转录。5 × qRT SuperMix II中含有逆转录反应所需的所有组分，并可同时终止4 × gDNA wiper Mix，保证cDNA的完整性。
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