细胞内钙—缝隙连接因子在针刺预治疗改善缺血性心律失常中的作用 - 中国优秀硕士学位论文全文数据库
中国优秀硕士学位论文全文数据库
细胞内钙—缝隙连接因子在针刺预治疗改善缺血性心律失常中的作用
【作者基本信息】
中西医结合基础，
【摘要】 冠心病心肌缺血是世界范围内死亡率最高的疾病之一。而缺血性心律失常,尤其是室性纤颤是大多数病例心脏停跳而猝死的原因。针刺可以改善缺血性心律失常,本研究室最近的工作表明,电针预处理能够抑制心肌缺血再灌注导致的心律失常。而有关针刺预处理抗缺血性心律失常的机制,迄今无人涉足。已知心肌细胞间存在缝隙连接,它是心肌细胞间通讯的主要结构,是由两个相邻的心肌细胞各出一个Cx共同组成一个共享通道,进而完成细胞间的通讯功能。Cx是一种跨膜蛋白,是缝隙连接的重要通道蛋白。最近几年有关缝隙连接及连接因子与心律失常关系的研究已经成为一个备受关注的国际性热点问题。研究证明,心肌缺血引起的心律失常,尤其是致命性的室速或心房纤颤与心室肌的Cx43的重塑,包括Cx43的数量减少、磷酸化状态的改变[磷酸化（激活状态）的Cx43数量减少,而非磷酸化的Cx43增多]以及重新分布有关。已知Cx43是一个钙相关的功能蛋白。而这种心肌缺血所致的Cx43的重塑可能与缺血时的细胞内钙超载有关。而心肌缺血时的钙超载,主要是由于缺血心肌内交感神经递质的释放增加,通过心肌细胞beta-肾上腺素受体的信号传导路径而引起。另外,在细胞内钙[Ca2+]i增加的同时,会出现钙振荡现象,而钙振荡与心律失常的发生有关。可见,心肌细胞内钙振荡和钙相关的Cx43乃是缺血性室性心律失常发生的关键点。最近几年有关缺血预处理的机制研究也逐步转移到缝隙连接及其连接因子方面。缺血预处理的保护作用可能与预处理使儿茶酚胺释放减少而降低细胞内钙,从而抑制缺血引起的Cx43去磷酸化和细胞内重新分布。另外,如前述,心肌缺血时由于交感神经兴奋、儿茶酚胺释放,经激动心肌beta-受体信号通路而导致钙超载。采用激动该信号通路不同站点（如采用异丙肾上腺素激动beta-受体、采用Forskolin激动腺苷酸环化酶以及采用细胞外高钙或钙通道激动剂打开钙通道）的方法都成功模拟了缺血预处理对心肌缺血的保护作用。由于针刺可以影响交感神经的功能,因此针刺预处理就极有可能通过心肌beta-受体及其受体后的传导通路,像缺血预处理一样,改善心肌细胞钙超载、进而改善钙相关的Cx43的重塑过程,包括Cx43的数量、磷酸化的程度以及Cx43重新分布,最终降低因缺血再灌注导致的心律失常。本项研究采用结扎和再灌大鼠左冠状动脉前降支的方法建立实验性心肌局部缺血模型和离体心脏模拟全心缺血（低灌流）模型,首先确定电针预处理对缺血性心律失常的疗效,并在此基础上探讨细胞内钙—缝隙连接因子Cx43在介导电针预治疗改善缺血性心律失常中的作用,为针刺改善缺血性心律失常提供分子水平的科学依据。此外,针刺预处理机制的阐明,也将有助于为采用针灸疗法防治该病开辟一条新的途径。实验选用雄性成年大鼠Sprague-Dawley（SD）130只,体重215±35g,随机分为正常对照组（NC组）、心肌缺血组（IR组）、电针预治疗+心肌缺血组（EA组）、电针预治疗+心肌缺血+Cx43拮抗剂18 beta-glycyrrhetinic acid（EAG）组以及电针预治疗+心肌缺血+钙通道激动剂Bay K8644（EAB）组。EA组于每次麻醉后电针内关30min（电针参数:强度1-3mA,频率2/15Hz变频）,连续三天;EAG组和EAB组分别于每次麻醉后先腹腔注射18 beta-glycyrrhetinic acid（160ug/kg）或Bay Kug/kg）,30min后再电针内关30min,连续三天。NC组、IR组仅于每次麻醉后捆绑30min,不做其他处理,连续三天。实验包括三部分内容:1电针预治疗对缺血性心律失常疗效的确定;2探讨心肌细胞内钙在电针预治疗改善心肌缺血性心律失常中的作用;3探讨缝隙连接因子Cx43重塑机制在电针预治疗改善心肌缺血性心律失常中的作用。具体结果如下:1电针预治疗对缺血性心律失常疗效的确定采用Cuitis’s Scoring System对各组的心律失常发生情况进行评定。NC组心律失常评分为0分,表明NC组在再灌注10min内没有心律失常发生;IR组于再灌注10min内出现了不同的房性和室性的心律失常,其评分为3.75±0.25,明显高于NC组（P＜0.05）;经电针治疗后,EA组评分为0.75±0.25,与IR组比较,其心律失常发生率明显下降（P＜0.05）。2心肌细胞内钙在电针预治疗改善心肌缺血性心律失常中的作用2.1电针预治疗对模拟全心缺血大鼠单个心肌细胞内静息钙水平的影响NC组单个心肌细胞内静息钙离子浓度均值是73.67±1.08 nmol/L,而IR组单个心肌细胞内静息钙离子浓度均值为110.42±1.49 nmol/L,明显高于NC组（P＜0.01）;EA组单个心肌细胞内静息钙离子浓度均值为85.42±1.56 nmol/L,与IR组比较,其钙离子浓度显著下降（P＜0.01）;而当每次电针预治疗前给予Cx43拮抗剂—18beta-glycyrrhetinic acid或者钙通道激动剂—Bay K8644时,EAG,EAB两组单个心肌细胞内静息钙离子浓度均值分别为110.42±1.64 nmol/L,110.833±1.41 nmol/L,均明显高于EA组（P＜0.01）,说明Cx43拮抗剂和钙通道激动剂均可以抑制电针预治疗的保护作用。2.2电针预治疗对模拟全心缺血大鼠单个心肌细胞静息状态下钙振荡的影响NC组单个心肌细胞发生钙振荡的次数为0次,表明NC组在静息状态下10min内没有钙振荡发生,而IR组于静息状态下10min内出现了较为频繁的钙振荡,其次数为43.83±2.68次,明显高于NC组（P＜0.01）;经电针预治疗后,EA组静息状态下发生钙振荡的次数明显下降,其次数为8.33±1.58次,明显低于IR组（P＜0.01）。而当每次电针预治疗前给予Cx43拮抗剂—18 beta-glycyrrhetinic acid或者钙通道激动剂—Bay K8644时,EAG组和EAB组于静息状态下发生钙振荡的次数分别为:34±2.11次和48.75±3.34次,此二组发生钙振荡的次数均显著高于EA组（P值均＜0.01）。其结果表明Cx43拮抗剂和钙通道激动剂均抑制了电针预治疗的保护作用。2.3电针预治疗对模拟全心缺血大鼠单个心肌细胞在电刺激下钙振荡的影响NC组单个心肌细胞在电刺激下10分钟内发生钙振荡的次数为0次,表明NC组单个心肌细胞可以在电场刺激下随着电刺激的频率有规律地收缩,没有钙振荡的发生。而IR组单个心肌细胞在电场刺激下出现了较为频繁的钙振荡,其次数为189.42±29.38次,明显高于NC组（P＜0.01）;经电针预治疗后,EA组单个心肌细胞在电场刺激下钙振荡的次数明显下降,其次数为10.08±3.09次,明显低于IR组（P＜0.01）。与静息状态下类似,当每次电针预治疗前给予Cx43拮抗剂—18 beta-glycyrrhetinic acid或者钙通道激动剂—Bay K8644时,EAG组和EAB组单个心肌细胞在电场刺激下亦出现了较为频繁的钙振荡,其次数分别为:125.25±17.24次和289.83±25.98次,均明显高于EA组（P值均＜0.01）。结果表明,18 beta-glycyrrhetinic acid和Bay K8644抑制了电针预治疗的保护作用。3缝隙连接因子Cx43重塑机制在电针预治疗改善心肌缺血性心律失常中的作用3.1电针预治疗对模拟全心缺血大鼠心肌细胞膜Cx43蛋白总含量的影响以NC组大鼠心肌细胞膜上Cx43蛋白总含量作为100%,得到的各组心肌细胞膜上Cx43蛋白总含量的百分比分别为:IR组82.25±0.02%,EA组83.99±0.02%,EAG组80.52±0.01%,EAB组86.14±0.01%,表明IR、EA、EAG和EAB各组与NC组比较Cx43蛋白总含量有所降低。而IR、EA、EAG和EAB各组大鼠心肌细胞膜上Cx43蛋白总含量无明显变化（P值均＞0.05）,表明Cx43蛋白含量没有参与介导针刺预治疗抗缺血性心律失常的作用。以下需要进一步分析Cx43磷酸化状态在介导针刺预治疗抗缺血性心律失常的作用。3.2电针预治疗对模拟全心缺血大鼠心肌细胞膜Cx43蛋白磷酸化状态的影响以NC组为100%进行比较,IR组非磷酸化的Cx43的含量的百分比为238±0.33%,明显高于NC组（P＜0.05）;其相应的磷酸化的Cx43的含量的百分比为42.26±0.03%,明显低于NC组（P＜0.05）,经电针预治疗后:EA组非磷酸化的Cx43的含量的百分比为108±0.06%,明显低于IR组（P＜0.05）;其相应的磷酸化的Cx43的含量的百分比为89.21±0.25%,明显高于IR组（P＜0.05）。而EAG组和EAB组与IR组情况类似,两组非磷酸化的Cx43的含量的百分比分别为:246±0.18%,253±0.16%,均明显高于EA组（P值均＜0.05）,此二组相应的磷酸化的Cx43的含量百分比分别为:39.26±0.01%和29.28±0.02%:均明显低于EA组（P值均＜0.05）。上述结果表明,电针预治疗可以减低缺血引起的非磷酸化的Cx43的含量的异常增高,增加相应的磷酸化的Cx43的含量,而预先给予Cx43拮抗剂和钙通道激动剂均可以抑制电针预治疗的保护作用。结论:电针预治疗具有抗缺血性心律失常的保护作用。它可能是通过抑制心肌细胞内钙超载、抑制钙振荡的发生,并改善钙相关的Cx43蛋白磷酸化的状态,最终降低缺血性心律失常的发生。
【关键词】 ；
【网络出版投稿人】
【分类号】R246.1
【下载频次】230
本文链接的文献网络图示:
本文的引文网络Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用--《海南医学院学报》1997年04期
Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用
【摘要】：Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R738.1【正文快照】：
Forskolin（FSK）是一种植物二览类化合物，是腺着酸环化酶的特异激活剂。鉴于腺着酸环化酶的产物是CAMP，细胞内高水平的CAMP常导致细胞增殖的抑制，因而自1993年开始，Sevetson氏等“’注意到它对与增殖有关的促分裂原活化蛋白激酶（Mitogen－“”ti”atedProteinkinase，MA
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式，仅支持PDF格式
【引证文献】
中国期刊全文数据库
孟琨,白秀英,李平风,杜国光;[J];海南医学院学报;1998年01期
中国博士学位论文全文数据库
李定彪;[D];四川大学;2004年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库
周序珑,李涤臣,曹光群;[J];癌症;2000年02期
赵敏,吴晶,姜若兰;[J];癌症;2001年09期
陈军!610041成都,周清华!610041成都,覃扬,孙芝琳,孙泽芳,刘伦旭!610041成都;[J];中国肺癌杂志;2000年01期
周清华,车国卫,覃扬,王艳萍,孙芝琳,孙泽芳,陈小禾,彭玉珍,秦建军,刘伦旭,陈军;[J];中国肺癌杂志;2003年02期
周清华,王艳萍,车国卫,朱文,陈晓禾,陈晓峰,孙芝琳;[J];中国肺癌杂志;2003年06期
孟琨,白秀英,李平风,杜国光;[J];海南医学院学报;1998年01期
陈晓峰,丁嘉安,赵静,李化;[J];临床肺科杂志;2001年02期
余瑞元,王燕峰,徐长法;[J];中国生物工程杂志;2003年01期
周涛,王端顺;[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年01期
张弘,柳惠图;[J];中国生物化学与分子生物学报;1997年04期
【二级引证文献】
中国博士学位论文全文数据库
李定彪;[D];四川大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库
程俊霖;[D];重庆师范大学;2005年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号君，已阅读到文档的结尾了呢~~
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口关注今日：32 | 主题：72754
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】紧急求助：NF-KB和PKA信号通路之间的关系
页码直达：
这个帖子发布于8年零289天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人想做NF-KB和PKA信号通路对变应性鼻炎的调控，请问哪位前辈知道NF-KB和PKA信号通路之间的关系呢？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
PKA对NF-KB通路起抑制作用.....在Jurkat T细胞中, forskolin 对PKA 的活化抑制了NF-κB 二聚体的形成以及它的核转位,从而抑制了IL-2 的基因表达.refer to:Neumann M, Grieshammer T , Chuvpilo S , et al . RelA/ p65 is a molecular target for the mmunosuppressive action of protein kinase A.EMBO J , 1995 , 14 : 欢迎martin4720斑竹常来解答问题!!
by kaige88
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
kaige88 edited on
真是太谢谢您了，
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
hbqh 真是太谢谢您了，不客气,我前段工作和该方面有关系....
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
小弟正在开始学习有关NF-KB的抗炎症介质产生途径的抑制刚好看到一张有关的图表，不知道里面有没有让你更好理解的？鼓励新人参加讨论! by kaige88
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
kaige88 edited on
请问楼主有准备测定PKA吗，现在有什么好的方法了 吗，是做抗体还是试剂盒呢，谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我想用免疫组化和WB ，但是抗体分很多种亚型，不知道怎么选择，不知道你有什么好的办法
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
martin4720 PKA对NF-KB通路起抑制作用.....在Jurkat T细胞中, forskolin 对PKA 的活化抑制了NF-κB 二聚体的形成以及它的核转位,从而抑制了IL-2 的基因表达.refer to:Neumann M, Grieshammer T , Chuvpilo S , et al . RelA/ p65 is a molecular target for the mmunosuppressive action of protein kinase A.EMBO J , 1995 , 14 : 欢迎martin4720斑竹常来解答问题!!
by kaige88正解，我刚才的实验不经意间验证了这个结果，立刻查pubmed,
sigh!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园