阿霉素作用后小鼠心脏HE染色求分析(阿霉素,心脏,小鼠,石蜡切片,切片) - 动物实验 - 生物秀
标题: 阿霉素作用后小鼠心脏HE染色求分析(阿霉素,心脏,小鼠,石蜡切片,切片)
摘要: [阿霉素作用后小鼠心脏HE染色求分析(阿霉素,心脏,小鼠,石蜡切片,切片)] 最近在做阿霉素的抑瘤实验，取出心脏组织后石蜡切片、HE染色，然后就凌乱了。不会分析结果，求指导，越详细越好。谢谢~~~新人，丁当有限，望见谅PBS作用心肌切片：阿霉素作用（挑了2张我觉得有毒性的，但不确定）：12 这张是PEG-PCL DOX作用的心肌细胞，正常否？ 关键词:[阿霉素 心脏 小鼠 石蜡切片 切片 心肌细胞 心肌]……
最近在做阿霉素的抑瘤实验，取出心脏组织后石蜡切片、HE染色，然后就凌乱了。不会分析结果，求指导，越详细越好。谢谢~~~新人，丁当有限，望见谅PBS作用心肌切片：阿霉素作用（挑了2张我觉得有毒性的，但不确定）：12 这张是PEG-PCL/DOX作用的心肌细胞，正常否？
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【求助】为什么我的小鼠肝脏ＨＥ染色如此奇怪？急救！
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这个帖子发布于4年零297天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
诸位高手，　　我最近在作小鼠的组织切片，protocol 如下：肝脏标本：1)
１０％中性福尔马林固定三日左右
2) 流水清洗标本半小时至１小时脱水：　　70%酒精　２小时
　　80%酒精　１小时　　95% ethanol
95% ethanol
100% ethanol
100% ethanol
二甲苯xylene
　　　Xylene
石蜡　paraffin plus
　　　paraffin plus
1hr　以上脱水透明浸蜡液体温度均为６０度水浴箱中进行。
包埋　embeding 切片　４４度水浴展片　　　　４０度烤片４小时ＨＥ染色：脱蜡至水后，
用Mayer's Hemotoxylin 染核　１０ｍｉｎ，流水洗１０ｍｉｎ返蓝。无分化过程。　　醇性eosin
染胞浆　　９５％，１００％ethanol, xylene透明后封片。问题：肝细胞核周胞浆仿佛脱失一样，无法着色。类似空泡变性？让人无法理解。尝试过更长时间的脱水透明等，均无明显改善？　　问题出在：切片前的脱水透明出了问题？ＨＥ染色有问题？十分苦恼！已经一个多月了，尝试过很多方案均无明显改善。恳请各位高人献计献策！祝各位新年如意！　　
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please help me!
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你老人家二甲苯时间短，脱蜡效果不好，组织上色能力就差。QQ
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Thank you very much! would you like to let me know your protocol?
How can I control the time for xylene?
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我的固定是超出1:4比例的固定。因为常常仅能获得小鼠肝脏的一半甚或四分之一，所以每个样品均是固定于２０ｍｌ１０％中性福尔马林液中的小杯中的。组织是一旦获得，立即投放于固定液中的，但是作石蜡块时常延后至半月以后，大多是在固定半月以上才来作石蜡切片的。但是新鲜的标本也不行。不知道为何？？胃肠要好些，组织胞浆脱失失色的现象少见。我作了７个批次，每次近乎１５个蜡块，仅有一个批次的蜡块效果较好。不知道是什么原因？？为此多次延长固定脱水时间均　不见效。唯一作的不大到位的是烤片。我的烤片时间大多十分不规律，多数３７度１～４小时，也试过６０烤片，发现片子上的石蜡几乎完全融化，不知道是否对组织着色以及后续的免疫组化有影响。肯定大家再次指点。
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有没有病理高手出手相助？多谢！
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我的最近也出现类似问题了，不知道楼主的问题解决了么？
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是不是染色前脱蜡时间短啊？制片应该没问题。我们这边实际操作脱水时间比你的都要短，HE染色后的切片很好啊。对于你说的温度高烤片时间长我们这边50度通常2-3h，没问题。
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一点建议：讨论形态，提供的图片一定要高质量，不失真的。作者提供的图像，不仅仅是切片制作问题，图没有照好可能影响观察和分析。看图知道这照片是在显微镜的状态没有完全调整好的状态下照的，首先是照明光不匀，中心亮，边缘暗，其次是白平衡没有调适当，有明显的偏色，三是对比度和明度不适当，下面是稍作处理的图，效果好一点，但不会达到正确技术获得的原图好！建议加放大比例尺，讨论图最好同时有低放大和高放大的！供参考。
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这个空泡不是空泡变性，你的老鼠可能没有禁食。
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sad_surgery 诸位高手，　　我最近在作小鼠的组织切片，protocol 如下：肝脏标本：1)
１０％中性福尔马林固定三日左右
2) 流水清洗标本半小时至１小时脱水：　　70%酒精　２小时
　　80%酒精　１小时　　95% ethanol
95% ethanol
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二甲苯xylene
　　　Xylene
石蜡　paraffin plus
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1hr　以上脱水透明浸蜡液体温度均为６０度水浴箱中进行。
包埋　embeding 切片　４４度水浴展片　　　　４０度烤片４小时ＨＥ染色：脱蜡至水后，
用Mayer's Hemotoxylin 染核　１０ｍｉｎ，流水洗１０ｍｉｎ返蓝。无分化过程。　　醇性eosin
染胞浆　　９５％，１００％ethanol, xylene透明后封片。问题：肝细胞核周胞浆仿佛脱失一样，无法着色。类似空泡变性？让人无法理解。尝试过更长时间的脱水透明等，均无明显改善？　　问题出在：切片前的脱水透明出了问题？ＨＥ染色有问题？十分苦恼！已经一个多月了，尝试过很多方案均无明显改善。恳请各位高人献计献策！祝各位新年如意！　　
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无双吕布 你的酒精和二甲苯都过了劲儿了
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请问楼主发现原因了吗？能否跟大家分享一下，非常感谢！
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后来发现实验室用的二甲苯和乙醇已被多次使用，效果可能变得很差
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关于丁香园【图文】石蜡切片的制作及HE染色_百度文库
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评价文档：
石蜡切片的制作及HE染色
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你可能喜欢为什么在HE染色标本上脂滴被溶去?苏木精和伊红到底是什么?如题,谢谢~~
HE标本一般是针对石蜡标本,脂滴和石蜡都是的有机物,都具有非极性,脂滴应该可以溶解石蜡的.HE染色就是用苏木精和伊红对细胞内的核糖体和细胞质染色的方法.H：Hematoxylin,苏木精E：Eosin,伊红苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性.伊红(,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性.染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色.--------------------------------------------------------------HE染色石蜡切片制作基本过程 1、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构.2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份.再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋.3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温.待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中.冷却凝固成块即成.包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片.4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚.切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干.5、脱蜡染色：常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察.苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性.伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性.染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色.HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟.②酸水及氨水中分色,各数秒钟.③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻.④入70％和90％酒精中脱水各10分钟.⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟.6、脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明.7、封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固.待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用.
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我做大鼠脑损伤模型的脑组织石蜡切片，HE染色后观察如图片结果，大家帮我分析原因，谢谢！
粗修没修好。。。
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谢谢指点。
回复 1# 的帖子
和粗修没有关系，可能是脱水的时候在酒精中的时间太长或者是解剖的时候出现的人工损伤
UID21285&帖子394&精华&积分1514&阅读权限50&在线时间679 小时&注册时间&最后登录&
大小鼠脑对外伤、缺血、缺氧等损伤因素的代偿能力很强。在大鼠的脑损伤模型中会出现脑血管的扩张，做出来的切片就是这样。
重新修片后的切片还是有孔
遇硬化过度的肝、脑、脾等组织时，应轻轻切削，防止组织由于震动产生空洞现象。
[quote]原帖由 dahhs 于
16:48 发表
大小鼠脑对外伤、缺血、缺氧等损伤因素的代偿能力很强。在大鼠的脑损伤模型中会出现脑血管的扩张，做出来的切片就是这样。 [/quote ]同意
本人观点纯属个人偏见，希望大家独立判断，正确引用！
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