五菉硝基苯和枯草芽孢杆菌菌落形态能一起使用吗

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枯草芽孢杆菌液体培养条件的研究
时间： 01:28:19&&来源：&&作者：
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&吴青录，秦秀丽*（吉林农业科技学院生物工程系，吉林 吉林 132101）&&& 摘要：对枯草芽孢杆菌液体培养条件进行了优化，通过单因素试验及正交试验，优化出液体培养条件为：枯草芽孢杆菌最适生长温度为32℃,PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，芽孢率生长最适温度36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min，最适接种量为9%，温度对枯草芽孢杆菌的生长量及芽孢率影响最大。&& 关键词：枯草芽孢杆菌；液体培养；生长量；芽孢率中图分类号：S823.5&　文献标识码：Ａ　文章编号：（2012）-04-&&& 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种好氧性产芽孢杆状细菌(G+)，其生理特征多样，在自然界中分布广泛，极易分离培养，在食品工业、饲料工业、农业、石油工业、基因工程、洗涤、皮革和医药等领域都有广泛的应用[1]。枯草芽孢杆菌在培养过程中，由于培养条件掌握不好，常出现活菌数量低、芽孢形成率低等问题。拟通过本试验优化该菌株液体培养条件，确定该菌株在液体培养条件下菌体和芽孢形成的适宜条件，提高芽孢得率及枯草芽孢杆菌的产量。1 材料与方法1.1 材料1.1.1&枯草芽孢杆菌 由吉林农业科技学院生物工程学院微生物实验室提供。1.1.2&液体培养基1.1.2.1 菌种培养液&牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10ml，氯化钠5g，水1000ml[2、3]。1.1.2.2 试验所用培养液 牛肉膏3g，蛋白胨10g，葡萄糖10ml，NaCl 5g，淀粉30g，3.08%浓度的MgSO410ml，水1000ml[4、5]。1.1.3&主要仪器设备电热恒温培养箱、显微镜、电热鼓风干燥箱、无菌超净工作台、722型可见分光光度仪、高压蒸汽灭菌锅等。1.2 试验方法1.2.1&菌种活化 将枯草芽孢杆菌转接灭菌的装有100mL菌种培养液的三角瓶（250mL）中，在37℃培养36小时备用[6、7]。1.2.2&培养方法将试验所用培养液装入300mL三角瓶中，装量为100mL，经高压蒸汽灭菌后，在无菌条件下接入2mL的菌液进行培养。1.3 试验设计1.3.1&单因素试验1.3.1.1 温度对枯草芽孢杆菌生长量的影响 28303234363862pH7.0140rmin48hOD血球计数板法计算芽孢率1.3.1.2 起始pH值对枯草芽孢杆菌生长量的影响 将培养基的初始pH调至5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0，在接种量2％，以上所得最适温度 ，转速140r／min条件下培养48h，测定OD值，选出最适PH，一周后采用血球计数板法计算芽孢率。1.3.1.3 转速对枯草芽孢杆菌生长量的影响 选取110、120、140、160、180、200r／min 6个转速，以上所得最适温度和PH条件下培养48h，测定OD值，选出最适转速，一周后采用血球计数板法计算芽孢率。1.3.1.4 接种量对枯草芽孢杆菌生长量的影响 选取接种量2％、3％、5％、7％、9％、11％，在以上所得最适温度、转速和PH条件下培养48h，测定OD值，选出最适接种量，一周后采用血球计数板法计算芽孢率。1.3.2&正交试验将上述所获得最适条件下进行L9（34）正交试验，试验设计见表1、2，进一步确定其最适菌体生长和芽孢形成条件。表1 枯草芽孢杆菌生长量因素水平对照表 &水平&A ：温度(℃) &B:PH C：转速(r/min)&D:接种量(％)1316.813082327.014093337.215010表2& 枯草芽孢杆菌芽孢率因素水平对照表&水平&A ：温度(℃) &B:PH C：转速(r/min)&D:接种量(％)1356.811082367.012093377.2130101.3.3&用722型可见分光光度仪测枯草芽孢杆菌生长量OD值以OD值大小为指标确定最佳芽孢杆菌生长量，利用血球计数板在400倍光学显微镜下，查出芽孢个数，再用公式计算出1克样品中含芽孢个数，并计算枯草芽孢杆菌芽孢率[8]。　2 结果与分析2.1 不同温度对枯草芽孢杆菌生长量的影响 由图1可见，在温度为32℃时枯草芽孢杆菌的吸光度值最大，说明此时枯草芽孢杆菌生长量最大，即32℃为枯草芽孢杆菌最适温度。由图2可见在温度为36℃时枯草芽孢杆菌的芽孢率最大，说明此时枯草芽孢杆菌芽孢最多，即36℃为枯草芽孢杆菌形成芽孢最适温度。 2.2 起始pH值对生长量的影响 由图3可见，在PH=7.0时枯草芽孢杆菌的吸光度值最大，说明此时枯草芽孢杆菌生长量最大，即PH=7.0为枯草芽孢杆菌最适PH。由图4可见在PH=7.0时枯草芽孢杆菌的芽孢率最大，说明此时枯草芽孢杆菌芽孢最多，即PH=7.0为枯草芽孢杆菌形成芽孢最适PH。 2.3 不同转速对生长量的影响 由图5可见，在140r/min时枯草芽孢杆菌的吸光度值最大，说明此时枯草芽孢杆菌生长量最大，即140r/min为枯草芽孢杆菌生长最适转速。由图6可见在120r/min时枯草芽孢杆菌的芽孢率最大，说明此时枯草芽孢杆菌芽孢最多，即120r/min为枯草芽孢杆菌形成芽孢最适转速。 2.4 接种量对生长量的影响 由图7可见，在接种量为9%时枯草芽孢杆菌的吸光度值最大，说明此时枯草芽孢杆菌生长量最大，即接种量9%为枯草芽孢杆菌最适接种量。由图8可见在接种量为9%时枯草芽孢杆菌的芽孢率最大，说明此时枯草芽孢杆菌芽孢最多，即接种量9%为枯草芽孢杆菌形成芽孢最适接种量。 2.5 正交试验枯草芽孢杆菌的最佳培养条件由正交试验的结果可知，不同组合之间枯草芽孢杆菌生长量及芽孢率是不同的，以A2B3C2D2组合的生长量最高，以A2B3C3D2组合的芽孢率最大。从极差分析结果可以看出，温度对枯草芽孢杆菌生长量及芽孢率影响最大。试验结果表明，枯草芽孢杆菌生长量最适合组合为A2B3C2D2，即最适生长温度为32℃，PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，枯草芽孢杆菌芽孢率最适合组合为A2B3C3D2，即芽孢率生长最适温度为36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min，最适接种量为9%。&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 表3 正交试验比较处理ABCD吸光值111112.012212222.483313332.232421232.932522312.654623123.143731321.934832131.835933212.134K16.7276.8786.9906.800&K28.7296.9727.5497.560&K35.9037.5096.8206.999&R12.8260.6310.7290.760&表4 正交试验比较处理ABCD芽孢率(％)1111179.332122288.693133389.344212382.365223192.736231294.287313284.478321380.109332177.92I1257.36246.16253.71249.98&I2269.37261.52248.97267.44&I3242.49261.54266.54251.80&R226.8815.3817.5717.46&&3 结论由试验得出枯草芽孢杆菌最适生长温度为32℃，PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，由表4得出芽孢率生长最适温度36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min，最适接种量为9%，在此条件下将提高芽孢得率及枯草芽孢杆菌的产量，将为生产提供理论和借鉴。参考文献[1] 李佳.枯草杆菌特征和应用现状[J].西南大学,食品科学学院,):18-21. [2] 徐唠,马放,代阳,等.O／W 型乳化液破乳茵发酵条件优化及破乳研究[J].哈尔滨商业大学学报(自然科学版),):23-25.[3] 吴俊罡,张秉胜,刘吉华,等.枯草芽孢杆菌发酵培养基优化培养实验[J].国外畜牧学―猪与禽,):182-193.[4] 刘辉,魏祥法,井庆川,等.一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[J].山东:山东省农业科学院家禽研究所,):18-21.[5] 刘晓鸥,乔长晟,李睿颖，等.枯草芽孢杆菌TKPGOI I聚谷氨酸发酵培养基的优化[J]. 现代食品科技,):253-255.[6] 张秀玉,孔凡玉,王静,等.枯草芽孢杆菌SH7抑菌蛋白产生的最佳发酵条件及温室预防[J].中国烟草科学,):45-48. [7] 张敏,胡晓,万津瑜,等.高产几丁质酶的枯草芽孢杆菌诱变育种及发酵条件研究[J].中国农学通报,):279-283.[8] 翟秋梅,薛卫巍,薛永常,等.枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化[J].大连工业大学学报,):94-97.
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