pcr扩增仪8000bp怎么办

请问各位大虾,PCR时,72℃延伸1min,能延伸多少碱基对?扩增1300bp的长度,一分钟够吗?
延伸时间取决于目的片段的长度和所使用的DNA聚合酶的催化效率.按最常用的Taq酶看,其催化效率约为1200bp/min.扩增1300bp的片段,1分钟不够.如果留点余量的话,可设置为80秒.
为您推荐:
其他类似问题
扫描下载二维码做PCR扩增时,总是出现一条大于100bp的杂带,个别带强度甚至强于目标带.请问是怎么回事,比如我扩500bp 的带时,总在600bp 左右出现一个杂带,而扩600时,又在700左右出现一个杂带,虽然弱一点,但仍明显.我一般同时扩多个样品,同一种引物,杂带在不同样品间是一样的.甚至阴性对照中都有.
裙子TA0468
隐形对照也有就是实验室气溶胶污染了,换一个没有污染的环境加样
为您推荐:
其他类似问题
扫描下载二维码关注今日:29 | 主题:300197
微信扫一扫
扫一扫,下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】PCR扩增1000bp的片段,会容易突变吗?
页码直达:
这个帖子发布于4年零277天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位学长,我想从质粒上扩增1000bp的片段,用TAQ酶,请问有人这样做过吗?我现在就担心突变的问题,不知道用TAQ酶扩增32个循环,得到的片段是很亮准备连接到T载体,但是这样的话片段是否容易产生突变呢?
请有过类似经历的朋友告知,遇到的突变的可能性大吗?
不知道邀请谁?试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
用PFU的酶先扩增,扩增完了再用taq加个A
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
现在很多改良的Taq酶, 随便哪个公司都有的,我们用的一款能保到10kb呢,1000不算长,别担心.另外循环数二十五六次就足够了,没必要那么多次,循环数约多,突变几率越大,况且连T不用浓度太高的.Take it easy! & Good Luck!
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
突变的概率不会太大,其实用普通的taq酶就差不多,你要是再不放心,用高保真酶吧,有很多的,30K的都能扩出来,你的区区1000bp应该没问题了,多试几次,测序的时候多测几个样
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我本来也是准备用PFU扩增加A处理的,可是不知道为什么这一批的连T载体,都没有阳性菌落,所以想直接就用TAQ处理了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
vaccine917125 我本来也是准备用PFU扩增加A处理的,可是不知道为什么这一批的连T载体,都没有阳性菌落,所以想直接就用TAQ处理了没有阳性菌落,最大的可能性就是加A效率太低了,可能循环不够/时间不够。现在好多公司都有可以连接平端的克隆载体,PFU扩增的片段,回收后直接连接平端载体,再转化。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
用带点保真度的EX TAQ,1000BP突变还是很低的,这样扩出来直接加A的,也不用担心加A的效率问题
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主循环数太多了,从质粒上往下p,10个循环就可以了,不用那么多,会增加突变的概率
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
就用选择保真性好的酶来扩,没有问题的,就1kb, QQ
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
& 问题详情
问个您可能认为很简单的问题。假如我在NCBI检索到X66870. Reports R.norvegicus mRNA...[gi:56550] Links LOCUS RNLAMA 3091 bp mRNA linear ROD 18-APR-2005该基因的mRNA为 3091 bp ,凭此序列设计引物后,经RT-PCR扩增,产物大概多少 bp ?
分享此答案至:
回答问题,有机会获得丁当奖励。还没有账号?
您可以同时批量上传5个附件,单个附件最大允许上传20MB
谁做这个实验?
不难,但必学
做过,根据老师写的一步步来就行
引物设计很重要,内参我选择GAPDH
丁香通采购热线:400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
&&查看话题
较长片段PCR扩增总是失败,怎么解决?
DNA片段的扩增,500bp左右的片段可以扩增出来,但是800左右的就不行。为什么呢?目前有提高过循环次数,也降低过退火温度。但是都不行。有没有比较好的方案。谢啦!!!
哦,还要看看你自己的引物设计,用软件检测检测吧,看看是不是有二聚体等等的东东产生。
应该不是体系问题,我师哥之前也用的这个体系,成功率很高。
调整退火温度,最好能做个温度梯度。此外,你用的是什么酶,扩增速度如何,PCR的延伸时间是否根据酶和片段大小做了调整?
个人觉得 主要两个方面:1是 提取的DNA是不是过关,这也很关键。如果每次提取得DNA量都很少的话,一般不好成功。在PCR时加的模板DNA的量也很重要,一般50ng/ul的模板1ul就可以。2就是引物。设计的引物不合适
大神,我现在在P一个3000bp的片段,死活p不出来,我是95解链5min,后解链30S,42,45,48,51°梯度退火1分钟,72°延伸4分钟,重复30次,最后72°延伸10分钟,这样有问题吗?楼主好人,谢谢了!;););)
我觉得可以考虑把达片段截成换成小片段扩增,只要各片段之间有重叠的就能最后得到全片段了,就是看你会不会设计引物了
研究生必备与500万研究生在线互动!
扫描下载送金币
浏览器进程
打开微信扫一扫
随时随地聊科研

我要回帖

更多关于 pcr扩增 的文章

 

随机推荐