细胞凋亡检测试剂盒发生的基本过程

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-09-23 08:01 标签： tunel法检测细胞凋亡
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求助 关于应用透射电镜观察细胞凋亡 的实验详细步骤
我以前是搞医学检验的&&没涉及到这方面的知识
现在做细胞衰老的课题，要观察2BS细胞凋亡的形态&&，谁能告诉下聚体的实验步骤，
2bs细胞是贴壁培养好的，我打算用H2O2诱导凋亡&&然后进行观察 ，但是透射电镜的使用和细胞的制备都不会 :cry:
你留下邮箱把 我已经找到决解办法了 看到我会给你发过去
好的，谢谢你啦！
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＞＞＞下列关于细胞凋亡和细胞坏死的叙述，不正确的是[]A．细胞凋亡是一..
下列关于细胞凋亡和细胞坏死的叙述，不正确的是
A．细胞凋亡是一种自然的生理过程B．细胞坏死是一种病理性变化C．蝌蚪尾的消失，是由基因决定的细胞自动结束生命的过程D．被病原体感染的细胞是通过细胞坏死来清除的
题型：单选题难度：偏易来源：同步题
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据魔方格专家权威分析，试题“下列关于细胞凋亡和细胞坏死的叙述，不正确的是[]A．细胞凋亡是一..”主要考查你对&&细胞凋亡与细胞坏死&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
细胞凋亡与细胞坏死
细胞凋亡：由基因决定的细胞自动结束生命的过程。也常被称为细胞编程性死亡。是一种自然现象。细胞凋亡的意义：完成正常发育，维持内部环境的稳定，抵御外界各种因素的干扰。细胞坏死：在不利因素的影响下，由于细胞正常代谢活动受阻或中断引起的细胞损伤和死亡。细胞凋亡与细胞坏死的区别：
表解细胞衰老、凋亡、坏死与癌变的不同：
知识拓展：1、正常的细胞凋亡对人体是有益的，如胎儿发育中手指的形成、蝌蚪尾的消失等。2、细胞凋亡不足会出现肿瘤、自身免疫病等疾病；细胞凋亡过度会出现心肌缺血、心力衰竭等病症。
发现相似题
与“下列关于细胞凋亡和细胞坏死的叙述，不正确的是[]A．细胞凋亡是一..”考查相似的试题有：
8155576181961467890310460586066细胞凋亡的发生机制
Mechanism of apoptosis
细胞凋亡的发生机制（Mechanism of apoptosis ） 细胞凋亡的发生机制（ 1．氧化损伤（Oxidation damage ） ．氧化损伤（Oxidation 氧自由基破坏了机体正常的氧化/还原动态平衡...
基于3个网页-
目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。
Objective To explore the mechanism of human osteosarcoma U-2OS cell line apoptosis induced by diosgenin.
探讨益气养阴活血化瘀法诱导微小残留白血病细胞凋亡的发生机制。
To discuss the mechanism of Yiqi Yangyin and Huoxue Huayu (tonifying Qi, nourishing Yin and promoting blood circulation) in treating apoptosis revealed in minimal residual leukemia in rate.
因此，深入研究细胞凋亡信号的转导途径，不仅对认识细胞凋亡的发生机制有积极意义，而且对认识肿瘤的发病原因及其治疗也有重要意义。
Thus, the study on signal transduction pathway of cell apoptosis may provide data for elucidating the mechanism of cell apoptosis, tumouregenesis and may have significance for tumour therapy.
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感谢您的反馈，我们会尽快进行适当修改！细胞凋亡的主要特征
细胞凋亡具有以下特征：①由于细胞核酸内切酶激活,使DNA特征性荧光染色减少；②细胞质膜完整；③线粒体仍有跨膜电位；④保留了AIP依赖的溶酶体质子泵；⑤蛋白含量明显减少,因为内源性蛋白酶被激活；⑥在胸腺细胞,凋亡发生在G0 期；⑦前进光散射减少和直角散射不变（HL-60细胞）或增加（胸腺细胞）.
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& 流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin V 法)
流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin V 法)
Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白，可以与早期凋亡细胞的胞膜结合，而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。由于在发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变，因此，与DNA碎片检测比较，使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用，来区分凋亡细胞(Annexin V /核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V /核酸染料 )。
1. PBS缓冲液：含0.1%NaN3，过滤后2-8&C保存。
2. Annexin V Binding Buffer缓冲液(Cat. No. 66121E)：浓度为10&，使用时，用稀释为1&浓度的应用液。
3. Annexin V试剂与核酸染料：
Annexin V&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 核酸染料
Annexin V-Biotin(Cat. No. 65872X)&&&&&&&&& PI(Cat. No. 66211E)或
Streptavidin-FITC(Cat. No. 13024D)&&&&&&&&& 7-AAD(Cat. No. 34321X)
Annexin V-FITC(Cat. No. 65874X)&&&&&&&&&&& PI(Cat. No. 66211E)
Annexin V-PE(Cat. No. 65875X)&&&&&&&&&&&&&& &7-AAD(Cat. No. 34321X)
1. 一次性12&75mm Falcon试管。
2. 微量加样器和加样头。
3. FACS流式细胞仪：上样检测。
4. CELLQuest软件：获取和分析试验数据。
5. Annexin V检测对照管：
Annexin V&&& A-阴性对照&&& B-补偿1&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&& C-补偿2
Biotin&&&&&&&&&& SAv-FITC&&&&&& Annexin V-Biotin和SAv-FITC&&& PI和SAv-FITC
PE&&&&&&&&&&&&&&& 未染色细胞&&&& Annexin V-PE&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 7-AAD
FITC&&&&&&&&&& 未染色细胞&&&&& Annexin V-FITC&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& PI&
1. 取Falcon试管，按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。
2. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次，再用1& Binding Buffer缓冲液制成1&106细胞/ml的悬液。
3. Falcon试管中加入100 &l细胞悬液。
4. 按以下体积加入Annexin V与核酸染料：
&&& 管号 &名称&&&&&&& 荧光标记Annexin V& 核酸染料
&&& 1&&&& 阴性对照&&& &-&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& -
&&& 2&&&& 单阳1&&&&&&& AV-FITC&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& -
&&& 3&&&& 单阳2&&&&&&&& &-&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& PI
&&& 4&&&& 样本&&&&&&&&& AV-FITC&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& PI
5. 轻轻混匀，室温(20&C ~25&C)避光处放置15分钟。
6. *使用Annexin V-Biotin试剂进行检测时：
1&Binding Buffer缓冲液洗细胞一次，去上清。
1&Binding Buffer缓冲液100&l溶解SAv-FITC试剂0.5&g，加入到细胞管中。
轻轻混匀。
加入5&l PI，室温(20-25&C)避光处放置15分钟。
7. 各试验管中分别加入1&Binding Buffer缓冲液400&l。
8. 1小时内上流式细胞仪测定结果。
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