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【分享】罗氏荧光定量PCR Lightcycler 480 仪器介绍及使用
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这个帖子发布于4年零143天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
生命科学领域越来越多人开始使用荧光定量PCR，罗氏的荧光定量PCR仪算是这个仪器领域的翘楚。当年罗氏把PCR专利卖给了PE,后者之后被ABI收购，这也造成了ABI在该领域的雄起。当罗氏公司开始重视这个领域发展时，德国人在机械制造领域的功底就大放异彩。目前Lightcycler 480 算是罗氏在该领域对抗ABI最好的武器，之前在学校一直用ABI，最近由于工作在一些医院和CDC接触到了这款仪器，感觉真的是一分价钱一分货。原来听朋友说罗氏耗材贵，现在医院他们基本都用的是开放试剂和耗材。前两天去医院做了EV71和CA16的检测，曲线很漂亮，刚好那里老师有些当地代理商给的资料，就拷贝回来了，传上来，有需要的朋友可以看看。还有他们的分析软件，如果有需要朋友们留邮箱我发给你们。
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谢谢楼主了，我最近正计划做real-time PCR.用的仪器正式罗氏的，能不能麻烦楼主发个分析软件给我，谢谢啊
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我邮箱，麻烦发个分析软件，谢谢！
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以上两个朋友，已经将软件发到你们邮箱，请查收！
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我也要软件，正准备做呢，谢谢~~~~~
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我邮箱f8_，也麻烦发我个分析软件，谢谢！
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正好要开始做呢，能不能麻烦楼主发软件给我呢？ 感激不尽！
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我也想要分析软件， 谢谢楼主
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麻烦楼主给我发份分析软件吧，不胜感激！！
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麻烦楼主给我也发一个吧，不胜感激
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麻烦楼主也给我发一份分析软件吧，邮箱是.谢谢
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楼主，你好，麻烦你给我发一份，邮箱： 万分感谢
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麻烦也给我发一份 谢谢 ！
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麻烦楼主发我一份分析软件吧，谢谢
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谢谢给个分析软件吧great-
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楼主好心人啊，发一份给我吧，.cn，多谢了。
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楼主好心人啊，发一份给我吧，，多谢了。
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我们也是这个仪器，现在有个问题，这个仪器配套使用的是96孔板，请问开放如果用八连管，怎么能实现呢？
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我用480，用八连管一样的，也是放在架子上。
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做HRM效果最好的仪器 rotor gene 6000（目前已被QIAGEN收购）；罗氏 这台480；推荐使用Biotium的饱和染料EvaGreen；高灵敏度，高强信号，对qPCR过程抑制极小；目前德国QIAGEN和 BIO-RAD也使用biotium专利产品EvaGreen生产HRM试剂盒；
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楼主，多谢分享啊。我也要一份！.com
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maybegood 我们也是这个仪器，现在有个问题，这个仪器配套使用的是96孔板，请问开放如果用八连管，怎么能实现呢？买个适配器放上面就可以呢！
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麻烦给我发个吧，谢谢！
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楼主，我也求一份分析软件，不胜感激！！
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刚看到楼主的帖子，麻烦您发个分析软件给我好么?谢谢
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亲,也给俺一份吧, ,多谢噢！
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好心的楼主,也给俺一份分析软件吧, ,多谢多谢！
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楼主好心人，你好，麻烦你给我发一份，邮箱： 万分感谢
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楼主老师您好，我也是最近刚开始做荧光定量PCR，一头雾水啊，麻烦您也把分析软件发给我一份吧，我的邮箱是 .万分谢谢！
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楼主 你好,我现在也打算做荧光定量PCR， 麻烦也给我发一份 谢谢 ！如果好的话我们实验室也打算进一台。
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我正在做荧光定量PCR，请楼主发个分析软件，邮箱，谢谢！
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感谢楼主的分享啊，好东西。
楼主可以给我也发一份分析软件吗？ 不胜感激啊！
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楼主还在不在，求个分析软件，，谢谢了~~~
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楼主，求分析软件，，谢谢了~~~
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官方公共微信High Resolution Melt
High Resolution Melt - High Resolution Melting (HRM) is a novel, homogeneous, close-tube, post-PCR method, enabling genomic researchers to analyze genetic variations (SNPs, mutations, methylations) in PCR amplicons. -生意宝检测通，检测认证一站式平台！
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最新HRM技术——SNP、突变或甲基化检测方法
来源：苏州为真生物医药科技有限公司 时间：
高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法
&&HRM技术应用
HRM技术是high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术，是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。
因操作简便快速，使用成本低，结果准确，实现了真正的闭管操作，HRM技术受到普遍关注。
HRM的主要原理是根据DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性差异，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，极高的温度均一性和温度分辨率使分辨精度达到对单个碱基差异的区分。随着高精度PCR仪（LightCycler& 480和Rotor-Gene 6000）和饱和染料（LC Green、Eva Green等）的出现，HRM技术的普及使用成为可能。
l SNP（单核苷酸多态性）的筛查。
l 基因突变扫描，包括缺失、重复、点突变。
l 新突变的筛查。
l 甲基化的筛查。
l 遗传育种中特定突变的筛查、未知突变的发现。
l HLA基因组配型、等位基因频率分析、物种鉴定、品种鉴定、甲基化研究。
l 法医学鉴定、亲子鉴定。
l 动植物品质相关多态性位点的研究等。植物抗逆性，突变与性状关联性研究。
l 高通量：1次可同时检测10-384样本，适合大样本、多SNP、多突变位点及多位点甲基化的扫描。
l 高敏度：肿瘤研究中低突变率样品基因突变检测，最低检测到0.1%的突变样品基因突变，即检测到1000个正常细胞中1个突变细胞，适用于手术和其它微量组织中突变检测。检测灵敏性远高于&PCR+测序&的25%，即100个正常细胞中至少有25个突变细胞，测序仅适用手术组织。
l 特异性好：PCR产物无需后续处理，特异性高达100%。直接未知杂合突变鉴定准确性100%，特异性100%。直接未知纯合突变鉴定准确性96%， 利用非标记探针快速基因分型法直接未知纯合子鉴定准确性100%。
l 重复性好：重复性100%
l 使用范围广：不受碱基位点局限，除可检出已知突变外，也能检测出未知突变。
l 重复性好：样品PCR和HRM分析直接在同一管内进行，实现闭管操作，避免交叉污染。
l 操作简便：只需设计特异引物，无需序列特异性探针，无需测序，也不受突变碱基位点与类型的局限。
l 成本低：简化操作时间和步骤，大大降低成本，检测费用远少于测序、Taqman探针技术。
l 标本范围广：可用于新鲜或酒精固定、石蜡包埋的手术标本，也可用于微量的穿刺或活检标本、血液标本、粪便标本等非手术标本的检测。传统& PCR+测序&方法难以检测大部分不能手术的患者。
l 其它：只检测PCR样品中荧光强度的变化，不消耗任何PCR样品，无污染，PCR产物可以进行下游分析，非常适合于测序前的SNP、甲基化等预扫描筛查。
HRM应用举例
单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs），指单个核苷酸碱基的改变，包括置换、颠换、缺失和插入，导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中，绝大多数核苷酸序列一致而只有一个碱基不同的现象，这就是SNP。SNP在人类基因组中数量较多，发生频率较高，因此被认为是继微卫星之后的新一代遗传学标记。
HRM检测SNP技术是依据在一定的温度范围内将PCR扩增的产物进行变性，期间实时检测体系内荧光信号。荧光值随着温度变化，可绘制溶解曲线。每一段DNA都有其独特的序列，因而也就有了独特的熔解曲线形状，如同DNA指纹图谱一样，具有很高的特异性、稳定性和重复性。根据曲线准确区分野生型纯合子、杂合子和突变性纯合子（下图）。
检测SNP的方法有很多种。成本较低、通量较大的方法大都局限于已知、特定位点，如Taqman探针法。既要对已知位点分析又要查找未知位点，一般采用PCR+测序的方法，成本高、操作繁复较低。
HRM技术是一种低成本、高通量、快速，且不受位点局限的检测方法，是SNP筛查的最佳选择。
基于罗氏LightCyclerTM 480HRM技术
高通量、简单、快速、低成本、高灵敏度。闭管检测，避免假阳性；检测已知和未知SNP；灵敏度和精确度达近100%；HRM分析和PCR是同时进行，无需另外仪器，相比MS等减少了额外仪器，成本更低、特异性和精确度更好。须用罗氏LightCyclerTM 480 PCR仪，或LightScannerTM等仪器，专业技术要求高，需要专业人员操作。
苏州为真生物医药科技有限公司在SNP位点分析和研究方面积累了丰富的经验，拥有开展SNP研究的先进仪器设备，具有自己独到的研究策略和方法，能有效挖掘资源，为你提供高效快速的SNP分型服务。
l 甲基化检测
DNA甲基化是DNA碱基序列CpG岛上常发生的一种共价修饰，使基因表达受抑制，可以遗传。在肿瘤等病理组织中，特异基因的特征性甲基化状态可以作为早期诊断的重要标志物。甲基化检测包括特异性PCR、Northern印迹法、芯片等，测序是&金标准&，但这些方法低通量、成本高、花费大量时间且难以标准化。
高分辨率熔解（High Resolution Melt' HRM）是一种最新的在表观遗传学中检测CpG位点的一种新技术，可区别单个碱基的甲基化差异（下图）。
HRM检测甲基化的方法具有高通量、操作简单、灵敏高、重复性高、成本低、不受检测位点的局限高度等优势，将对于遗传学、肿瘤学等方面的研究和临床应用提供更大的帮助。
苏州为真生物科技有限公司在HRM分析和研究甲基化方面已经积累了丰富的经验，建立了完善的技术路线，拥有开展HRM研究的先进仪器设备，具有自己独到的研究策略和方法。本公司可为你高效快速的进行HRM分析甲基化位点，找出有意义的CpG甲基化位点。
l 突变筛查
HRM的特点是高特异性和高灵敏度，检测灵敏度可以达到1%-0.1%。在大量样本、多个突变位点的筛查上，比传统的非均一性方法（如dHPLC）更方便、性价比更高，因为后者需要将扩增产物转移到另一台仪器上进行突变分析。
HRM可对任何扩增子上的未知突变进行筛查，不需要识别不同等位形式的引物或探针，不受突变碱基位点和种类的局限，既可以对未知突变进行筛查、扫描，又可以对已知突变进行分析。所以，相比定量探针法的突变分析和其它类型的快速突变分析法，应用面大大拓展，成本也大大降低，成为近年来国外新兴的遗传学、方法学研究和应用热点。
图：HRM分析219bp的人类MBL-2基因片段（384个样本），结果显示了四种主要的基因类型（蓝色、红色、绿色和橄榄绿色）和两个少数样本的基因型（橙色和红紫色）。
苏州为真生物科技有限公司在HRM分析和研究各种突变，包括缺失、插入、碱基变化等方面积累了丰富的经验，拥有开展HRM技术的先进仪器设备，具有自己独到的研究策略和方法，能为你高效快速的进行突变筛查分析，找出与疾病密切相关的突变位点。
苏州为真生物科技有限公司在利用HRM高通量进行基因型分型等方面具有丰富的经验，能为你的研究工作提供高效快速的进行筛查分析。
湖南省有色地质勘查研究院位于长沙市劳动西路256号,隶属于湖南省有色地质勘查局，是具
　　山东省生物传感器重点实验室的前身为山东省科学院生物研究所生化研究室，自1983年
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