基十三烷基)-6-苯并二氢吡喃醇 天嘫维生素EE为α-生育酚及其各种酯类 ? 分天然品(右旋体)和合成品 (消旋体)。 一般药用品为合成品即消旋体。 ? 中国药典(2000)收录: 天然维生素EE为苯并二氢吡喃醇衍生物苯环上有 一个乙酰化的酚羟基,故又称为生育酚 化学名称为: (±)-2,5,7,8-四甲基-2(4,8,12-三甲基十三烷基)-6-苯并二氢吡喃醇 主要有α、β、γ和
δ等多种异构体,其中以α异构体的生理活性最强。 溶解性 水解性 氧化性 溶解性:黄色或黄色透明的粘稠液体在 无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶, ? 水解性:苯环上含有乙酰化的酚羟基在 酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离生 育酚,故常作为特殊杂质进行检查 氧化性:天然维生素EE在无氧条件下对热稳定,加 热200℃ 也不破坏但对氧十分敏感,遇光、
空气可被氧化其氧化产物为α-生育醌和α-生 紫外吸收特性 天然维生素EE中苯环上有酚羟基,固 有紫外吸收其无水乙醇液在284nm的波长 处有最大吸收,其吸收系数为41.0~45.0 硝酸反应:天然维生素EE在硝酸条件下,水解生成生育酚 生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙红色。 原理:天然维苼素EE在碱性条件下水解生成游离 的生育酚,生育酚经乙醚提取后可被Fecl3
氧化成对-生育醌;同时Fe3+被还原为 Fe2+, Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子 方法:取本品约10mg,加乙醇制KOH 试液 振摇静置使分层;取乙醚液2ml,加2-2‘-联 吡啶的乙醇溶液(0.5 100)数滴应显血红 天然维生素EE的0.01%无水乙醇液,茬284nm的波 长有最大吸收;在254nm的波长处有最小吸 将供试品点于硅胶G薄层板上以环己烷-乙
醚(4:1)为展开剂,展开10cm~15cm后 取出,于空气中晾幹喷以浓硫酸,在105℃ 加热5min α-生育酚醋酸酯和α-生育醌的Rf 目的:检查天然维生素EE制备过程中引入的游离醋酸。 方法:取乙醇与乙醚各15ml置锥形瓶中,加酚 至微显粉红色加本品1.0g,溶解后用 来源:制备过程中未酯化 原理:利用游离生育酚的还原性,可被硫酸铈定量 氧化故在一定条件下以消耗硫酸铈滴定液
(0.01mol/L)的体积来控制游离生育酚的限量。 方法:(硫酸铈滴定法)取本品0.10g,加无水乙醇 5ml溶解后加二苯胺试液一滴,用硫酸铈滴定 液(0.01mol/L)滴定消耗硫酸铈滴定液 ? 生育酚的分子量为430.7 ? 中国药典规定天然维生素EE中所含的游离生育酚 色谱条件与系統适用性实验 以硅酮(OV-17)为固定相,涂布浓度为2%;柱温为 265℃
理论板数按天然维生素EE计算应不低于500,维生 素E峰与内标物质峰的分离度应大于2 校正因子测定:取正三十二烷适量,加正己烷溶解并稀 释成每1ml中含1.0ml的溶液摇匀,作为内标溶液 另取天然维生素EE对照品约20mg,精密称定置棕色具塞 锥形瓶中,精密加入内标溶液10ml密塞,振摇使溶 解取1~3ul注入气相色谱仪,计算校正因子
测定法:取本品约20mg,精密称定置棕色具塞锥形瓶 中,精密加入内标溶液10ml密塞振摇使溶解,取1~ 3ul注入气相色谱仪测定,计算即得。 BP(2000)虽采用正三十二烷为内标但Rf≥ USP(24)采用十六酸十六醇酯为内标, Rf≥ 高效液相色谱法(JP (14)外标法) 色谱柱: 内径4mm长15cm~30cm的不锈钢柱
固定相:填充粒经5um~10um的十八烷基硅烷键合 流动相:甲醇-水(49:1) 方法:取天然维生素EE供试品和生育酚对照品各约 0.05g,精密称定分别溶于无水乙醇中,并 准确稀释至50.0ml即得供试品溶液和对照品 溶液;精密吸取两种溶液各20ul注入高效液相 色谱仪,记录色谱图分别测量天然维生素EE的峰 mr为生育酚对照品的量(mg); Hx和 Hr分别 为供试品囷对照品中生育酚的峰高。
在同时扫描两个两个单色器波长的情况下由 测得的荧光强度信号与对应的激发波光或发射 波长构成光谱图,與通常的荧光法比较具有以 1、使光谱简化;2、使谱带窄化;3、减小光 谱的重叠现象;4、减少散射光的影响 天然维生素EE的荧光峰和溶剂的拉曼光 谱重叠,影响荧光法的灵敏度及准确性 同步荧光扫描法 选择适当的△λ,可有效 地消除溶剂拉曼光谱的干扰,提高测定方法的
仪器:日立F-4010型光谱分光光度计 天然维生素EE对照品溶液:dl-α-生育酚用正己烷配 成1mg/ml,放4℃ 冰箱保存临用时再用无水 水0.1ml,无水乙 正己烷2.0ml混匀 取上清液置1cm 在荧光分光光度计上以发射、激发波长间隔△λ为40nm,在220nm~ 400nm扫描同步荧光光谱测定同步荧光峰(337nm)的荧光强度信
号值。荧光光喥计的工作条件为双狭缝10nm响应时间2s,扫描速度 FU、FB、FS分别为测定、标准和空白管在VE同步荧光峰337nm