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传染复习题
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传染复习题
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【整理总结】关于细胞培养中的污染
有关细胞技术的热门话题――细胞培养中的污染细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作 3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。感谢你的辛勤劳动！以上均源自上相关贴子,然后加以总结希望对大家有用!!正愁分不清各种细菌呢，真是及时雨啊污染是细胞培养第一大害！不过好像一般普通培养真菌污染的概率比较大些，因为培养基中常会加入细菌抗生素非常谢谢!我们实验估计是黑胶虫污染.很好！我培养的细胞，个别孔已发现霉菌，正在处理中。感谢，，，现在细胞老污染，，多了点知识。。谢谢，我们实验室也经常看到黑胶虫，有人总认为是细菌，结果细菌培养是阴性。更换血清就可以了吗？原来看到的心肌细胞培养专栏哪去了？有谁知道?非常感谢!有哪些老师有好的图片也传上来就好了.我的细胞死完了还找不到很确定的原因.thanks,your suggestion and manmaps is very idealty.关于“黑胶虫”或“黑蛟虫”或“黑焦虫”的性质或本质，有谁能提供点资料么？比如生物学分类，生活习性，结构形态，高倍镜或电镜图片。另外，有英文相关文献么？至少名字有英文的么？有人研究这种“虫子”或“微生物”或“纳米级细菌”么？我们实验室这段时间经常污染。在低倍镜下观察，是很多黑色的小点，在 高倍镜下，发现黑色小点在原地轻微的颤动，这是黑胶虫吗我的细胞也怀疑是黑胶虫污染,但是否经空气传播?因为同一培养箱中有的细胞中,高倍镜下可见小黑点游动,有的就没有,且黑点会长成黑虫关于黑胶虫：根据平时的操作，我觉得“黑胶虫”有没有可能是以下操作细节方面的问题导致的呢？1、有时候血清瓶或者培养瓶上用标记笔写的字没有擦掉就直接泡酸，字迹溶解后沉积在酸缸中浸泡的瓶子里冲洗不净。2、过火的时候不小心碰到酒精灯的灯芯，粉尘飞进培养液内。3、有的同学习惯将移液管塞棉花的一端在酒精灯上焚烧一下，灰烬飞进培养液内。请教！我们实验室就曾经利用制霉菌素制服过真菌污染，拯救了细胞，回想起来真是＂惊心动魄＂啊！看贴后,我怀疑我的杂交瘤被霉菌污染了.
24孔板中央老是有絮状物,细胞没死,但生长不佳.将絮状物吸出后,第二天又有.并且将细胞裹在里面生长.请问这样的瘤细胞能不能上腹水.我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。谢谢！（我养的都是肿瘤细胞）很好，要是有污染的照片就更直观！！谢谢 lz经验很好建议附上图片，将此帖置顶！“黑胶虫”=子虚乌有我正在找这方面的资料,谢谢了!污染后，培养液味道变臭了是什么污染。zhyy_ping :培养液味道变臭了应该是厌养菌污染.我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。我也有同样问题，malone2001 wrote:我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。我也有同样问题，我现在也出现了类似的情况有可能是支原体污染曾经做单抗铺巨噬细胞，铺好发现细胞全是会动的，跑的还挺快！！仔细一看，全是滴虫。感情这只老鼠感染了滴虫！！！！我那个郁闷阿！太有用了,谢谢!太好了，很全，楼主辛苦我的细胞污染探索某天打开孵箱，看到我的L1210的培养瓶培养液又是黄黄的，觉得很不错，今天又可以传代了，可是在镜下一看，细胞虽然明显增加了，但并没有象以前那样长满，而且更让我心惊的是怎么出现了许多黑色的小点，杆状，而且好像在动来动去，翻转，旋转，在细胞很多的地方小点就少，而在细胞较少的地方小点就多，细胞的活力也没有以前好了，第一反应细菌污染，请实验室老师过来看，说不是细菌污染，这个点要比细菌的小黑点大的多，也好象不是霉菌，没有菌丝，没有常见的团壮的生长，肯定不对劲，但到底是什么，说不上来。最后，决定换液、洗涤、离心，换瓶，操作结束后镜下看黑点几乎看不到了，有点放下心来。隔天后去看，培养液还和上面的一样，但镜下，那种东西又出来了，在细胞少的地方，几乎呈现出粗砂粒样，我欲哭无泪，知道可能不行了，郁闷的换液后，回家上网?搜，一个名词跳了出来：黑胶虫。黑色、杆状、运动、细胞不会很快死亡，这些描述简直惊人的一致，我确定了，我受到了黑胶虫的袭击。但黑胶虫是什么，由于网上说法不一，我决定探究一下。这是我的探究过程：首先，培养液略黄，稍有浑浊，镜下观察，细胞还没有死，但是已经不长了，那种东西已经是铺天盖地了，满眼望去，尽是粗砂粒样，细胞好像成了一个个汪洋中的小岛。细胞涂片，送到化验室，革兰氏染色，不久电话回报怀疑－－真菌。第一反应不可能，亲自去了化验室，看到了片上一个个瓜子样的小点，染色呈黑色。看我还有些怀疑，化验室的同事又作了滴片，镜下暗视野40倍可见一个个亮白色芝麻样的东西在游来游去，再次涂片染色仍和以前一样，并且可以见到芽孢样的形状，他们确定无疑是真菌，但不是常见的念珠军、霉菌，具体是什么，也说不上来。由于已经盖棺定论，计划的HE染色、支原体没有进行。已经将污染的细胞扔掉了。休整几天。附照片。1、这是未污染时的细胞1、这是未污染时的细胞
（缩略图，点击图片链接看原图）2、这是污染后的
（缩略图，点击图片链接看原图）另一张
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细胞培养污染
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我养的是c2c12细胞 养了半年，前几个月养的好好地，也没有污染情况，自从五月底以来，细胞就频繁的污染，都是细菌污染，这期间唯一不同的是细胞间的操作台换了一个新的，空调也打开了（空调带有滤膜），有同学开始养鸡的睾丸细胞（原代），不光是我的细胞污染，师姐的胚胎也频繁污染.实验根本进行不下去，求大神赐教!!!!
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元代不应该和你们在一个超净台进行实验啊
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以前也是用同一个台子，问题应该不大
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天气炎热，环境中的细菌非常容易滋生。所以控制环境就显得非常重要了。平时做好清理吧。没有被细菌折磨过，就不是一个合格的细胞培养者，慢慢改进培养手法吧~
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我们 实验室是分开的，要是频繁污染，不只是你自己的话，建议培养箱进行消毒，以免耽误实验
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指尖的格桑花
我们每次进行细胞操作之前都会用新洁尔灭拖地，擦桌子 哪都擦 然后照半个小时紫外的环境是外部因素，还有很多内部因素，比如操作手法、习惯等等，哪一步疏忽，细菌都会找你麻烦
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嗯，能分开养就分开养，能分开操作就分开操作。没条件的话就多做好消毒准备，细胞状态好的时候多冻存一些细胞~
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我们实验室有三组人养，我和我师姐的污染了 但是有一组人的没事儿，培养箱是分开用的 我的这个细胞刚开始复苏的时候都没有什么事儿，穿了三代之后就全部污染了
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真是找不出啥原因了，只能以后再认真打扫，注意细节了，明年就毕业了，连最基本的细胞都没有养出来我真是太愁了
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外部和内部环境都注意的话只能降低污染，还有就是如果实在不行只能加抗生素了，全世界培养细胞的人，应该没有人能完全保证细胞就不被污染的，只能尽可能的去减少细胞污染的可能性，你们两个用同一个培养箱同一个超净台，而且两个培养的习惯和小细节肯定会有不一样的，这样污染的可能性又会增加一点，还是建议多做好无菌准备
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是不是因为支原体感染引起的，建议楼主先进行支原体的pcr检测，如果真的是支原体污染再购买清除试剂吧。 如果要买的话建议买汉恒生物的抗支原体试剂，我曾经申请过他们家的免费试用装，感觉还不错，可以尝试。 最近他们家好像在做活动，你可以关注一下 给你个链接吧，请叫我活雷锋~
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可以去看看的支原体清除试剂，能免费申领，说不定有用
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支原体简介 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。支原体是在1898年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的&油煎蛋&状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。
关于细胞（特别是传代细胞）在培养过程中被支原体污染，这是一个世界性的问题。国内外研究表明，95%以上污染细胞的支原体属于以下四种类型：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii，此种支原体为牛源性）。这是四种最常见的污染细胞的支原体菌群，但实际中能够污染细胞的支原体的种类是很多的。国外的调查证明，有二十多种支原体可以污染细胞，并且有的细胞可以同时被两种以上的支原体污染。
支原体是最小的可体外生长的微生物,可长期与宿主细胞共同生长,不产生急性细胞毒作用,在实验中容易被忽视。目前在细胞培养过程中有70%以上都存在支原体污染的情况。细胞受到支原体污染后不仅会影响细胞内某些基因的表达，也会在一定程度上影响细胞的生长状态。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。 在细胞培养过程中应当定期做支原体检测，万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。但是若受污染的细胞比较珍贵，必须去除支原体污染，则可以通过混合使用抗生素以达到目的。支原体没有细胞壁的，传统的抗生素一般对其无效。培养细胞支原体污染虽然不对细胞产生急性毒性作用,但可使细胞性状发生改变而影响细胞脂质体的转染和病毒对靶细胞的感染。包装细胞与靶细胞支原体污染的有效清除能明显改善病毒包装时的转染效率及靶细胞感染效率。
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我养的是C1C12细胞，细胞复苏后，第一天还是正常的，换液后培养液就开始变浑浊，培养液中有很多悬浮的黑色物质，培养瓶壁上还有一些亮色的物质，不知道是支原体污染还是白念珠菌污染，请大神支招
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细胞培养12h之后，培养液中会有很多黑色的微小物质，培养瓶底部也有一些，不知道是什么东东，用PBS清洗几遍之后，培养瓶底部有一些小亮点不知道是什么物质，哪位大神帮忙看看是那种污染啊
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不知道你的是什么细胞 我养的是c2c12细胞 没有出现过这种情况 如果没有影响你的细胞生长就应该没有污染吧 会不会是培养瓶外部的
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我养的是C1C12细胞,这是用PBS清洗之后的图片，细胞换液后一段时间，培养液就会变浑浊
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液变浑浊就是污染了 我只看到过细菌污染 细菌污染在镜下看是细沙状的，更严重点培养液会变成乳粉色。如果你觉得培养液不对劲儿 最好尽快处理掉细胞 以免培养箱也污染了。
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@指尖的格桑花细胞培养液变浑浊还变黄，不知道是不是黑焦虫污染
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你可以镜下看看液的状态 我的那个是细菌污染 培养液也是变浑浊 变黄 听说黑胶虫会动的
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求一株状态可以的c2c12
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支原体简介 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。支原体是在1898年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的&油煎蛋&状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。
关于细胞（特别是传代细胞）在培养过程中被支原体污染，这是一个世界性的问题。国内外研究表明，95%以上污染细胞的支原体属于以下四种类型：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii，此种支原体为牛源性）。这是四种最常见的污染细胞的支原体菌群，但实际中能够污染细胞的支原体的种类是很多的。国外的调查证明，有二十多种支原体可以污染细胞，并且有的细胞可以同时被两种以上的支原体污染。
支原体是最小的可体外生长的微生物,可长期与宿主细胞共同生长,不产生急性细胞毒作用,在实验中容易被忽视。目前在细胞培养过程中有70%以上都存在支原体污染的情况。细胞受到支原体污染后不仅会影响细胞内某些基因的表达，也会在一定程度上影响细胞的生长状态。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。 在细胞培养过程中应当定期做支原体检测，万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。但是若受污染的细胞比较珍贵，必须去除支原体污染，则可以通过混合使用抗生素以达到目的。支原体没有细胞壁的，传统的抗生素一般对其无效。培养细胞支原体污染虽然不对细胞产生急性毒性作用,但可使细胞性状发生改变而影响细胞脂质体的转染和病毒对靶细胞的感染。包装细胞与靶细胞支原体污染的有效清除能明显改善病毒包装时的转染效率及靶细胞感染效率。
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我养的是C1C12细胞，细胞复苏后，第一天还是正常的，换液后培养液就开始变浑浊，培养液中有很多悬浮的黑色物质，培养瓶壁上还有一些亮色的物质，不知道是支原体污染还是白念珠菌污染，请大神支招
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细胞培养12h之后，培养液中会有很多黑色的微小物质，培养瓶底部也有一些，不知道是什么东东，用PBS清洗几遍之后，培养瓶底部有一些小亮点不知道是什么物质，哪位大神帮忙看看是那种污染啊
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不知道你的是什么细胞 我养的是c2c12细胞 没有出现过这种情况 如果没有影响你的细胞生长就应该没有污染吧 会不会是培养瓶外部的
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我养的是C1C12细胞,这是用PBS清洗之后的图片，细胞换液后一段时间，培养液就会变浑浊
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液变浑浊就是污染了 我只看到过细菌污染 细菌污染在镜下看是细沙状的，更严重点培养液会变成乳粉色。如果你觉得培养液不对劲儿 最好尽快处理掉细胞 以免培养箱也污染了。
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@指尖的格桑花细胞培养液变浑浊还变黄，不知道是不是黑焦虫污染
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你可以镜下看看液的状态 我的那个是细菌污染 培养液也是变浑浊 变黄 听说黑胶虫会动的
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求一株状态可以的c2c12
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