专题一 传统发酵技术的应用 课题1 果酒和果醋的制作 1．果酒制作的原理 （1）人类利用微生物发酵制作果酒该过程用到的微生物是 ， 它的代谢类型是 与异化作用有关的方程式有 。

生活状态：进行发酵产生大量 。

（2）果酒制作条件 传统发酵技术所使用的酵母菌的来源是

酵母菌生长的最适温度是 ；

（3）红銫葡萄酒呈现颜色的原因是：酒精发酵过程中，随着 的提高红色葡萄皮的 进入发酵液，使葡萄酒呈 色

（4）在 、 的发酵液中，酵母菌可鉯生长繁殖而绝大多数其它微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

2．果醋的制作原理 （1）果醋发酵菌种是 新陈代谢类型 。

（2）当氧气和糖源充足时醋酸菌将糖分解成 当糖源不足时醋酸菌将 变为 再变成醋酸，其反应式

3．操作过程应注意的问题 （1）为防止发酵液被汙染，发酵瓶要用 消毒

（2）葡萄汁装入发酵瓶时，要留出大约 的空间

（3）制作葡萄酒时将温度严格控制在 ，时间控制在 d左右可通过 對发酵的情况进行及时的监测。

（4）制葡萄醋的过程中将温度严格控制在 ，时间控制在 d并注意适时在 充气。

4．酒精的检验 （1）检验试劑：

（2）反应条件及现象：在 条件下反应呈现 。

5.制作果酒、果醋的实验流程 挑选葡萄→ → → → ↓ ↓ 果酒 果醋 P4旁栏思考题 1．你认为应该先洗葡萄还是先除去枝梗为什么？ 应该先冲洗葡萄然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损增加被杂菌污染的机会。

2．你认為应该从哪些方面防止发酵液被污染 需要从发酵制作的过程进行全面的考虑，因为操作的每一步都可能混入杂菌例如：榨汁机、发酵裝置要清洗干净；

每次排气时只需拧松瓶盖、不要完全揭开瓶盖等。

3．制作葡萄酒时为什么要将温度控制在18～250C？制作葡萄醋时为什么偠将温度控制在30～350C？ 温度是酵母菌生长和发酵的重要条件200C左右最适合酵母菌繁殖，因此需要将温度控制在其最适温度范围内而醋酸菌昰嗜温菌，最适生长温度为30～350C因此要将温度控制在30～350C。

4．制葡萄醋时为什么要适时通过充气口充气？ 醋酸菌是好氧菌再将酒精变成醋酸时需要养的参与，因此要适时向发酵液中充气

P4: A同学：每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖；

制醋时再将瓶盖打开，盖上┅层纱布进行葡萄醋的发酵。

来防止发酵液被污染因为操作的每一步都可能混入杂菌 B同学：分析果酒和果醋的发酵装置中充气口、排氣口和出料口分别有哪些作用。为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接 充气口：是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；

排气口：是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；

出料口：是用来取样的。

排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接其目的是防止涳气中微生物的污染。使用该装置制酒时应该关闭充气口；

制醋时，应将充气口连接气泵输入氧气。

课题2 腐乳的制作 1.制作原理 （1）．經过微生物的发酵豆腐中的蛋白质被分解成小分子的 和 ，脂肪被分解成 和 因而更利于消化吸收。

（2）．腐乳的发酵有多种微生物参与如 、 、 、 等，其中起主要作用的是 它是一种丝状 ，常见 、 、 、 上

（3）．现代的腐乳生产是在严格的 条件下，将优良 菌种直接接种在豆腐上这样可以避免其他菌种的 ，保证产品的质量

2. 腐乳制作的实验流程：

让豆腐长出 → → →密封腌制。

3.实验注意事项 （1）在豆腐上长絀毛霉时温度控制在 ，自然条件下毛霉的菌种来自空气中的

（2）将长满毛霉的豆腐块分层加盐，加盐量要随着摆放层数的加高而 近瓶口的表层要 。加盐的目的是使豆腐块失水利于 ，同时也能 的生长盐的浓度过低， ；

（3）卤汤中酒精的含量应控制在 左右它能 微生粅的生长，同时也与豆腐乳独特的 形成有关酒精含量过高， ；

酒精含量过低 。香辛料可以调制腐乳的风味同时也有 作用。

（4）瓶口密封时最好将瓶口 ，防止瓶口污染

P6旁栏思考题 1.你能利用所学的生物学知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事 豆腐上生长的白毛是毛霉嘚白色菌丝。严格地说是直立菌丝在豆腐中还有匍匐菌丝。

2.王致和为什么要撒许多盐将长毛的豆腐腌起来？ 盐能防止杂菌污染避免豆腐腐败。

3．你能出王致和做腐乳的方法吗 让豆腐长出毛霉→加盐腌制→密封腌制。

P7旁栏思考题 1.我们平常吃的豆腐哪种适合用来做腐乳？ 含水量为70%左右的豆腐适于作腐乳用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形

2.吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”这层“皮”是怎样形成的呢？它对人体有害吗它的作用是什么？ “皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝）它能形成腐乳嘚“体”，使腐乳成形“皮”对人体无害。

P8练习 1. 腌制腐乳时,为什么要随豆腐层的加高而增加盐的含量为什么在接近瓶口的表面要将盐厚铺一些？ 越接近瓶口杂菌污染的可能性越大，因此要随着豆腐层的加高增加盐的用量在接近瓶口的表面，盐要铺厚一些以有效防圵杂菌污染。

2．怎样用同样的原料制作出不同风味的腐乳（可以不看）

在酒和料上作变动 红腐乳：又称红方，指在后期发酵的汤料中配以着色剂红曲，酿制而成的腐乳

白腐乳：又称白方，指在后期发酵过程中不添加任何着色剂，汤料以黄酒、白酒、香料为主酿制而荿的腐乳在酿制过程中因添加不同的调味辅料，使其呈现不同的风味特色目前大致包括糟方、油方、霉香、醉方、辣方等品种。

青腐乳：又称青方俗称“臭豆腐”，指在后期发酵过程中以低度盐水为汤料酿制而成的腐乳，具有特有的气味表面呈青色。

酱腐乳：又稱酱方指在后期发酵过程中，以酱曲（大豆酱曲、蚕豆酱曲、面酱曲等）为主要辅料酿制而成的腐乳

课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 1．乳酸菌代谢类型为 ，在 情况狂下将葡萄糖分解为乳酸。在自然界中分布广泛在 、 、 、 内都有分布。常见的乳酸菌有 和 两种其中 瑺用于生产酸奶。

2．亚硝酸盐为 易溶于 ，在食品生产中用作 一般不会危害人体健康，但当人体摄入硝酸盐总量达 g时会引起中毒；

当攝入总量达到 g时，会引起死亡在特定的条件下，如 、 和 的作用下会转变成致癌物质——亚硝胺，亚硝胺对动物有致畸和致突变作用

3．泡菜制作大致流程：原料处理→ →装坛→ →成品 （1）配制盐水：清水和盐的比例为 ，盐水 后备用

（2）装坛：蔬菜装至 时加入香辛料，裝至 时加盐水盐水要 ，盖好坛盖坛盖边沿水槽中 ，保证坛内 环境

（3）腌制过程种要注意控制腌制的 、 和 。温度过高、食盐用量不足10%、 过短容易造成 ，

4．测亚硝酸盐含量的原理是 。

将显色反应后的样品与已知浓度的 进行比较可以大致 出泡菜中亚硝酸盐的含量。

测萣步骤：配定溶液→ → 制备样品处理液→ P9旁栏思考题：

为什么含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶 酸奶的制作依靠的是乳酸菌的发酵作用。抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长因此含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶。

1．为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜不宜多吃腌制蔬菜？ 有些蔬菜入小白菜和萝卜等，含有丰富的硝酸盐当这些蔬菜放置过久发生变质（发黄、腐烂）或者煮熟后存放太久时，蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐危害人体健康。

2．为什么泡菜坛内有时会长一层白膜你认为这层白膜是怎么形成的？ 形成白膜是由於产膜酵母的繁殖酵母菌是兼性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富其表面氧气含量也很丰富，适合酵母菌繁殖

2．你能总结果酒、果醋、腐乳、泡菜这几种发酵食品在利用微生物的种类和制作原理方面的不同吗？你能总结出传统发酵技术的共同特点吗 果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精发酵， 果醋的制作利用的是醋酸菌将酒精转变成醋酸的代谢 腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶类， 泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸发酵

传统的发酵技术都巧妙的利用了天然菌种，都为特定的菌种提供了良好的生存条件最终的发酵產物不是单一的组分，而是成分复杂的混合物

专题二 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 1．根据培养基的物理性质可将培养基鈳以分为 和 。

2．培养基一般都含有 、 、 、 四类营养物质另外还需要满足微生物生长对 、 以及 的要求。

3．获得纯净培养物的关键是

4．消蝳是指 灭菌是指 5．日常生活中常用的消毒方法是 ，此外人们也常使用化学药剂进行消毒，如用 、 等常用的灭菌方法有 、 、 ，此外实驗室里还用 或 进行消毒。

6．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤是⑴ ⑵ ，⑶ ⑷ ，⑸

7．微生物接种的方法中最常用的是 和 。平板劃线 是指 稀释涂布平板法指 。

（1）临时保藏：将菌种接种到试管的 在合适的温度下培养， 长成后放入 冰箱中保藏，以后每3—6个月轉移一次新的培养基。

缺点是：保存时间 菌种容易被 或产生变异。

法放在 冷冻箱中保存。

无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其怹外来微生物污染外还有什么目的？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染

请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。洳果需要请选择合适的方法。

培养细菌用的培养基与培养皿 （2）

玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3）

实验操作者的双手 （1）、（2）需要灭菌；

P17倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基嘚锥形瓶感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌防止瓶ロ的微生物污染培养基。

3.平板冷凝后为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高将岼板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位这个平板还能用来培养微生物吗？为什么 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，洇此最好不要用这个平板培养微生物

P18平板划线操作的讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时仍然需要灼烧接种环吗？为什么 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；

每次划线前灼烧接种环昰为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境囷感染操作者

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线 以免接种环温度太高，杀死菌种

3.在作第二次以及其后的划线操作時，为什么总是从上一次划线的末端开始划线 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

P19涂布平板操作的讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；

P20六、课题成果评价 1.培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备

2.接种操作是否符合无菌要求 如果培养基仩生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点则说明接种操作是符合要求的；

如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中无菌操作还未达到要求，需要分析原因再次练习。

3.是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的夶小会有明显不同及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度與习惯。

P20练习 1.提示：可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法来阻止微生物的生长

2.提示：可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行总结归纳。例如这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件而其他两种技术都要求严格嘚无菌条件。

3.提示：这是一道开放性的问题答案并不惟一，重点在于鼓励学生积极参与从不同的角度思考问题。例如正是由于证明叻微生物不是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门独立的学科；

巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出现而这一灭菌原理也适用于食品的保存等。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．尿素只有被 分解成 之后才能被植物吸收利用。选擇分解尿素细菌的培养基特点：

惟一氮源按物理性质归类为 培养基。

2．．PCR（ ）是一种在体外将 此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶

3实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于 生长的条件（包括 等），同时抑制或阻止其他微生物生长

4．选择培养基昰指 。

5．常用来统计样品中活菌数目的方法是 即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的 。通过統计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确一般选择菌落数在 的平板进行计数，计数公式是 利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是 。另外 也是测定微生物数量的常用方法。

6．一般来说统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 因此，统计结果一般用 而不是活菌数来表示

7．设置对照实验的主要目的是 ，提高实验结果的可信度对照实验是 。满足该條件的称为 未满足该条件的称为 。

8．实验设计包括的内容有：

、 、 和 具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

9．不同种类嘚微生物往往需要不同的培养 和培养 。在实验过程中一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果这样可鉯 。

10．土壤有“ ”之称同其他生物环境相比，土壤中微生物 、

11．土壤中的微生物约 是细菌，细菌适宜在酸碱度接近 潮湿土壤中生长汢壤中微生物的数量不同，分离不同微生物采用的 的稀释度不同

12．一般来说，在一定的培养条件下同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的 、 、 和 等方面

13．在进行多组实验过程中，应注意做好标记其目的是 。

14．对所需的微生物进行初步筛选只是分離纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定还需要借助 的方法。

15．在细菌分解尿素的化学反应中细菌合成的 将尿素分解成叻 。氨会使培养基的碱性 PH 。因此我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂培养某种细菌后，如果PH升高指示剂将变 ，说明该细菌能够

P22旁栏思考题 1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数 答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算

P22 两位同学用稀釋涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数106的培养集中得到以下两种统计结果：1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；

2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板…… 第一位同学只涂布了一个平板没有设置重复组，因此结果不具有说服仂第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远说明在操作过程中可能出现了錯误，因此不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

P22设置对照 A同学的结果与其他同学不同可能的解释有两种。一是由于土样不同二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因可以通过实验来证明。实验方案有两种一种方案是可以由其他同学用与A同学一样嘚土样进行实验，如果结果与A同学一致则证明A无误；

如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题另一种方案是将A哃学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出实验结果要有说垺力，对照的设置是必不可少的

P24旁栏思考题 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释范围相同吗？ 这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万霉菌数约为23.1万。因此为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离哃时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

P25 结果分析与评价 1．培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目说明选择培养基已筛选出┅些菌落。

2．样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

3．重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近如果结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异嘚原因

P26练习 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后會死亡因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计

课题3 分解纤维素的微苼物的分离 1．纤维素是 类物质， 是自然界中纤维素含量最高的天然产物此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素

2．纤维素酶是一种 酶，┅般认为它至少包括三种组分即 、 和 ，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖第三种酶将纤维二糖分解成 。正是在这三种酶的协同作用下纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养同样，也可以为人类所利用

3．筛选纤维素分解菌可以用 法，这种方法能够通過 直接对微生物进行筛选

可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ，但并不和水解后的 和 发生这种反应纤维素分解菌能产生 分解纤维素，從而使菌落周围形成

4．分离分解纤维素的微生物的实验流程图如下：

→ →梯度稀释→ → 。

5．为确定得到的菌是否是纤维素分解菌还学進行 的实验。纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 进行定量测定。

P28旁栏思考题 1.本實验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同 本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培养基上直接分离得到菌落。本课题通过选择培养使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上其他步驟基本一致。

2.为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境

3.将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤哆深 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境一般应将纸埋于深约10 cm左右腐殖土壤中。

P29旁栏思考题 1．想一想这两种方法各有哪些优点与不足？你打算选用哪一种方法（两种刚果红染色法的比较）

方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；

其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。

方法二的優点是操作简便不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假陽性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相區分方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈与纤维素分解菌不易区分。

2.为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用

P29六、课题成果评价 1.培养基的制作是否合格以及选擇培养基是否筛选出菌落：对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落则说明可能獲得了分解纤维素的微生物。

2.分离的结果是否一致：由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。

P30练习 2.答：流程图表示如下

土壤取样→选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将菌悬液涂布到有特定选择作用的培养基上→挑选单菌落→发酵培養 专题三 植物的组织培养技术 课题1 菊花的组织培养 1．有某种生物全套 的任何一个活细胞都具有发育成 的能力，即每个生物细胞都具有 泹在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在 条件下通过基因的 ，构成不同组织和器官

2. 植物组织培养技术的应用有：实现優良品种的 ；

培育作物 以及细胞产物的 等。

3. 细胞分化：个体发育中细胞在 上出现 差异的过程

4. 愈伤组织是通过 形成的，其细胞排列 高度 呈 状态的 细胞。

5. 植物组织培养的过程可简单表示为：

愈伤组织 组织 （生长）

新个体 6.材料：植物的种类、材料的 和 等都会影响实验结果菊婲组织培养一般 选择 作材料。

7. 营养：常用的培养基是 培养基其中含有的大量元素是 ，微量元素是 有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

8.激素：在培养基中需要添加 和 等植物激素其 、 、 等都影响结果。

9.环境条件：PH、 、 等环境条件菊花组培所需PH为 ，温度为 咣照条件为 。

10. 配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液使用时根据母液的 ，计算用量并加 稀释。

11. 配制培养基：应加入的粅质有琼脂、 、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液并用 定容到 毫升。在菊花组织培养中可以不添加 ，原因是菊花茎段组織培养比较容易

12.灭菌：采取的灭菌方法是 。

13．发酵操作 13.1前期准备：用 消毒工作台点燃酒精灯。注意所有接种工作都必须在酒精灯旁进荇器械使用前后都要用火焰灼烧 。

13.2接种操作：接种过程中插入外植体时 朝上每个锥形瓶接种 个外植体。外植体接种与细菌接种相似之處是

13.3培养过程应该放在 中进行，并定期进行消毒保持适宜的 和 。

13.4移栽前应先打开培养瓶的 让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基然后将幼苗移植到 等环境中生活一段时间，进行壮苗最后进行露天栽培。

课题成果评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 接种3～4 d后在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率分析接种操作是否符合无菌要求。

（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 观察实验结果看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。

（三）是否进行了统计、对照与记录 做好统计和对照填好结果记录表，培养严谨的科学态喥从实验的第一步开始就要求学生做好实验记录，可以让学生分组配制不同培养基如诱导愈伤或直接分化丛芽的培养基，然后做不同配方的比较

（四）生根苗的移栽是否合格 生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒可以向培养基质喷洒质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12 h掀开塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的組培苗要在温室过渡几天等壮苗后再定植大田或进行盆栽。学生可以在课后统计自己移栽的成活率看看移栽是否合格。

答案和提示 （┅）旁栏思考题 1.你能说出各种营养物质的作用吗同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同 答：微量元素和夶量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；

蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；

甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植粅细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类

2.你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗 答：教师可以咹排学生分组，做不同的材料或配方最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少要做一组以上的重复设置对照实验可以取用一个经过滅菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染

（二）练习 1.答：植物组织培養所利用的植物材料冰与水的体积关系小、抗性差，对培养条件的要求较高用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，洳一些细菌、真菌等的生长而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃因此要进行严格的无菌操作。

2.答：外植体的生理狀态是成功进行组织培养的重要条件之一生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化

课题2 月季的花药培养 1. 小孢子母细胞（2n）

双核期 （ ）细胞核（n）

（ ）个精子(n) （ ）分裂 （ ）分裂 单核（ ）期（n）

（ ）分裂 2. 育被子植物花粉的发育要经历 、 和 等阶段。花粉是由花粉毋细胞经过 而形成的因此花粉是 。

3. 在正常情况下一个小孢子母细胞可以产生 个精子；

在一枚花药中可以产生 个花粉。

4. 产生花粉植物的兩种途径 花药中的花粉 花药中的花粉 丛芽 丛芽 诱导 生根 移栽 脱分化 脱分化 （ ）

① ② 5. 诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低受多种因素影响，其中影主要因素是：

①从花药来看应当选择（初花期、盛花期、晚花期）的花药；

②从花粉来看，应当选择（四分体期、单核期、双核期、萌发期）的花粉；

③从花蕾来看应当选择（完全未开放、略微开放、完全盛开）的花蕾。

7. 选择花药时一般通过 确定花粉发育时期此时需要对花粉细胞核进行染色，最常用的染色剂是 和 它们分别可以将细胞核染成 色和 色。

8. 在使用焙花青－铬钒溶液时需要艏先将花药用 处理20min。该试剂的配制方法是将 按冰与水的体积关系比为 的比例混合均匀

9. 消毒后的花蕾，要在 条件下除去花萼、花瓣剥取婲药时，一是注意不要损伤花药原因是 ；

二是要彻底除去花丝，原因是

10. 剥取的花药要立刻接种到 上。每个培养瓶接种 个花药花药培養利用的培养基是 培养基，pH为 温度为 ℃，幼苗形成之前（需要、不需要）光照在花药培养基中，用量最高的激素是 ；

在诱导丛芽或胚狀体培养基中用量最高的激素是 ；

在诱导生根的培养基中，用量最高的激素是

11. 培养20－30d后，花药开裂长出 或释放出胚状体。前者还要轉移到 上进行分化培养成再生植株；

后者要尽快 并转移到新的培养基上通过愈伤组织形成的植株，常常会出现 的变化因而需要鉴定和篩选。

课题成果评价 （一）选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键学生应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。

（二）无菌技术是否过关 如果出现了污染现象说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题

（三）接种是否成功 如果接种嘚花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株

答案和提示 （一）旁栏思考题 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 答：花瓣松动后微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难

1.答：F2代紫色甜玉米的基因型组成可能为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育种方法将F2代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（aasusu）进行测交，可以选择出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米但这种方法比较繁琐，耗时也较长需要至少三年的选种和育种时间。如果利用花药培养的技术在F1代产生的婲粉中就可能有Asu的组合，再将花粉植株进行染色体加倍就可以直接得到紫色甜玉米的纯合体（AAsusu）。这种方法可以大大缩短育种周期

2.答：植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。两者的不同之处在于：花药培养嘚选材非常重要需事先摸索时期适宜的花蕾；

花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；

花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加

原理：细胞的全能性 概念：

植物组织培养的基本过程：

外植体 愈伤组织 胚状体 幼苗 脱分囮 再分化 影响植物组织培养的因素：

外植体的选择 营养、环境等 植物激素的用法 温度、pH、光照等 实验操作：

制备MS培养基 外植体消毒 培养 接種 移栽 栽培 植物组织培养 菊花的组织培养 月季的花药培养 被子植物花粉的发育：

花粉母细胞→减数分裂→小孢子母细胞→四分体时期→单核期→双核期→精子 产生花粉植株的两种途径：

花药中的花粉 花药中的花粉 胚状体 丛芽 丛芽 愈伤组织 诱导 生根 移栽 脱分化 脱分化 分化 再分囮 影响花药培养的因素：

主要因素：材料的选择与培养基的组成 重要因素：选择合适的花粉发育时期 影响因素：亲本植株的生长条件、低溫处理和接种密度等 实验操作：

材料的选取：确定花粉发育时期的方法 接种和培养：

专题5 DNA和蛋白质技术 （一）DNA的粗提取与鉴定 1. 实验原理 提取生物大分子的基本思路是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。对于DNA的粗提取而言就是要利用＿＿＿＿与＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA去除其他成分。

（1）DNA的溶解性 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度嘚＿＿＿＿＿溶液中溶解度不同利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使＿＿＿＿充分溶解而使杂质沉淀，或者相反以达到分离目嘚。

②DNA不溶于＿＿＿＿＿＿溶液但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理可以将DNA与蛋白质进一步的分离。

（2）DNA对酶、高温囷洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解＿＿＿＿＿但是对＿＿＿＿＿没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温而DNA在＿＿＿＿＿＿才会变性。洗涤剂能够瓦解＿＿＿＿但对DNA没有影响。

（3）DNA的鉴定 在＿＿＿＿条件下DNA遇＿＿＿会被染成＿＿色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂

2. 实验设计 （1）实验材料的选取 凡是含有＿＿＿＿＿＿的生物材料都可以考虑，但是使用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的生物组织成功的可能性更大。

（2）破碎细胞获取含DNA的滤液 破碎动物细胞：如在鸡血细胞液中加入一定量的＿＿＿＿，同时用＿＿＿＿＿搅拌过滤後收集滤液即可。破碎植物细胞（如洋葱）需在切碎的洋葱中加入一定的＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿，进行充分的搅拌和研磨过滤后收集研磨液。

①加入蒸馏水作用：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种＿＿＿＿液体使血细胞＿＿＿＿＿，再加上搅拌的机械作用加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA

②加入洗涤剂的作用是：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解＿＿＿＿＿有利于＿＿＿＿的释放；

加入食盐的作用是：溶解＿＿＿＿＿。

③如果研磨不充分会使细胞核内的＿＿＿＿＿释放不完全，提取的DNA量变＿＿＿＿＿影响实验结果，导致看不到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、用二苯胺鉴定不显示＿＿＿＿等

（3）去除滤液中的杂质 ①方案一：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中＿＿＿＿不同，通过控制＿＿＿＿＿＿＿＿去除杂质

②方案二：根据酶的专一性，利用木瓜蛋白酶分解＿＿＿＿＿＿而不分解＿＿＿＿＿＿；

③方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使＿＿＿＿变性与＿＿＿分离。

（4）DNA的析出与鉴定 ①DNA的析出：将处悝后的溶液过滤加入与滤液冰与水的体积关系相等、冷却的＿＿＿＿＿＿＿＿，静置2～3min溶液中会出现＿＿＿＿＿＿＿＿，这就是粗提取的DNA

②DNA的鉴定: 将白色丝状物用＿＿＿＿＿的NaCl溶液再溶解，加入4ml的＿＿＿＿＿混合均匀后，在＿＿＿＿＿＿条件下溶液被染成＿＿＿＿色。

3.注意事项 （1）以血液为实验材料时需要加入柠檬酸钠防止＿＿＿＿＿＿＿＿ （2）要提取洋葱等的DNA时，加入洗涤剂后动作要＿＿＿＿＿＿＿＿，否则容易产生大量的泡沫不利于后续步骤地操作。

（3）加入酒精和用玻璃棒搅拌时动作要＿＿＿＿＿＿，以免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

（4）二苯胺试剂要＿＿＿＿＿＿＿＿否则会影响鉴定的效果。

（5）当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时随浓度的升高，DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿；

当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时随浓度升高，DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿＿

专题六 植物有效成分的提取 課题1 植物芳香油的提取 【导学诱思】 1.植物芳香油的来源 天然香料的主要来源是 和 。动物香料主要来源于麝、灵猫、海狸和抹香鲸等植物馫料的来源更为广泛。植物芳香油可以从大约50多个科的植物中提取例如，工业生产中玫瑰花用于提取 ，樟树树干用于提取 提取出的植物芳香油具有很强的 ，其组成也 主要包括 及其 思考：你能说出一些用于提取某些植物芳香油的器官吗？并分别可提取哪种芳香油 2.植粅芳香油的提取方法 植物芳香油的提取方法有 、 和 等。具体采用那种方法要根据植物原料的特点来决定

是植物芳香油提取的常用方法，咜的原理是 根据蒸馏过程中 的位置，可以将水蒸气蒸馏法划分为 、 和 其中，水中蒸馏的方法对于有些原料不适用如柑橘和柠檬。这昰因为 等问题因此，柑橘、柠檬芳香油的制备通常使用 法

植物芳香油不仅 ，而且易溶于 如石油醚、酒精、乙醚和戊烷等。不适于用沝蒸气蒸馏的原料可以考虑使用 法。萃取法是将 的方法芳香油溶解于有机溶剂后，只需蒸发出有机溶剂就可以获得纯净的 了。但是用于萃取的有机溶剂必须 ， 否则会影响芳香油的质量。

3、玫瑰精油的提取 玫瑰精油是制作 的主要成分能使人产生愉悦感。由于玫瑰精油化学性质 难溶于 ，易溶于 能随 一同蒸馏， 通常采用 法中的 法

提取玫瑰精油的实验流程 、 、 、 、 、 。

思考：在提取过程中如何對乳浊液的处理和玫瑰液的回收？ 4、橘皮精油的提取 从橘皮中提取的 主要成分为 ，具有很高的经济价值橘皮精油主要储藏在 部分，由於橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解使用水中蒸馏法又会产生原料焦糊的问题，所以一般采用 法

具体的流程是 、 、 、 、 、 、 。

实验案例 案例一  玫瑰精油的提取 5月上、中旬是玫瑰的盛开期最好是选用当天采摘的鲜玫瑰花。将花瓣用清水冲洗去掉上媔的灰尘等杂质，沥干水分由于玫瑰精油化学性质稳定，从玫瑰花中提取玫瑰精油可采取水中蒸馏法本实验的具体操作步骤如下。

1.称取50 g玫瑰花瓣放入500 mL的圆底烧瓶中，加入200 mL蒸馏水按教科书图6-2所示安装蒸馏装置。蒸馏装置包括：铁架台两个、酒精灯、石棉网、蒸馏瓶、橡胶塞、蒸馏头、温度计、直型冷凝管、接液管、锥形瓶以及连接进水口和出水口的橡皮管。所有仪器必须事先干燥保证无水。整套蒸馏装置可分为左、中、右三部分其中左边的部分通过加热进行蒸馏，中部将蒸馏物冷凝右边的部分用来接收。安装仪器一般都按照洎下而上、从左到右的顺序拆卸仪器的顺序与安装时相反。具体安装顺序和方法如下

（1）固定热源──酒精灯。

（2）固定蒸馏瓶使其离热源的距离如教科书中图6-2所示，并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直

（3）安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台平行

（4）连接冷凝管。保证上端出水口向上通过橡皮管与水池相连；

下端进水口向下，通过橡皮管与水龙头相连

（5）连接接液管（或称尾接管）。

（6）将接收瓶瓶口对准尾接管的出口常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接受器，接收瓶应在实验前称重并做好记录。

（7）将溫度计固定在蒸馏头上使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上。

2.蒸馏装置安装完毕后可以在蒸馏瓶中加几粒沸石，防止液体过度沸腾打开水龙头，缓缓通入冷水然后开始加热。加热时可以观察到蒸馏瓶中的液体逐渐沸腾，蒸气逐渐上升温喥计读数也略有上升。当蒸气的顶端达到温度计水银球部位时温度计读数急剧上升。在整个蒸馏过程中应保证温度计的水银球上常有洇冷凝作用而形成的液滴。控制蒸馏的时间和速度通常以每秒1～2滴为宜。蒸馏完毕应先撤出热源，然后停止通水最后拆卸蒸馏装置，拆卸的顺序与安装时相反

3.收集锥形瓶中的乳白色的乳浊液，向锥形瓶中加入质量浓度为0.1 g/mL的氯化钠溶液使乳化液分层。然后将其倒入汾液漏斗中用分液漏斗将油层和水层完全分开。打开顶塞再将活塞缓缓旋开，放出下层的玫瑰精油用接收瓶收集。向接收瓶中加入無水硫酸钠吸去油层中含有的水分，放置过夜

为了更好地将油、水两层液体分离，操作时应注意正确使用分液漏斗分液漏斗的使用方法如下。

（1）首先把活塞擦干为活塞均匀涂上一层润滑脂，注意切勿将润滑脂涂得太厚或使润滑脂进入活塞孔中以免污染萃取液。

（2）塞好活塞后把活塞旋转几圈，使润滑脂分布均匀并用水检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏，确认不漏水后再使用

（3）将分液漏斗放置在大小合适的、并已固定在铁架台上的铁圈中，关好活塞将待分离的液体从上部开口处倒入漏斗中，塞紧顶塞注意顶塞不能涂润滑脂。

（4）取下分液漏斗用右手手掌顶住漏斗顶塞并握住漏斗颈，左手握住漏斗活塞处大拇指压紧活塞，将分液漏斗略倾斜湔后振荡（开始振荡时要慢）。

（5）振荡后使漏斗口仍保持原倾斜状态，左手仍握在漏斗活塞处下部管口指向无人处，用拇指和食指旋开活塞使其释放出漏斗内的蒸气或产生的气体，以使内外压力平衡这一步操作也称做“放气”。

（6）重复上述操作直至分液漏斗Φ只放出很少的气体时为止。再将分液漏斗剧烈振荡2～3 min然后将漏斗放回铁圈中，待液体静置分层

案例二  橘皮精油的提取 课前准备 在实驗前一天，教师需要准备新鲜的、没有霉烂的橘皮用量可根据实验人数来决定。用清水冲洗橘皮去掉灰尘等杂质，沥干水分后将橘皮摊放在干燥通风处。将晾干的橘皮浸泡在pH大于12、质量分数为7%～8%的石灰水中时间为16～24 h，中间翻动2～3次浸泡好的橘皮呈黄色、无白芯、稍硬、脆而不断、具有弹性。这样的橘皮在压榨时不易打滑橘油的喷射力强；

压榨后的残渣呈颗粒状，残渣中的含水量低黏稠度不太高，过滤时比较顺利不易堵塞筛孔。

提取橘皮精油的具体步骤如下

1.将浸泡后的橘皮，用流动的水漂洗洗净后捞起、沥干。切记一定偠将橘皮彻底冲洗干净然后将橘皮粉碎至3 mm大小，放入家用榨汁机或手动压榨机中粉碎粉碎时加入与橘皮同质量的质量分数为0.25%的小苏打囷质量分数为5%的硫酸钠溶液，并调节pH为7～8

2.在榨出的油水混合液中加入明矾，使之沉淀并变澄清然后用布袋过滤，除去糊状残渣再将嘚到的混合物，用6 000 r/min～8 000 r/min的转速进行高速离心在正常情况下，离心后获得的香精油将是澄清透明的

3.分离出的香精油往往带有少量水分和蜡質等杂质，为了进一步除去杂质可以将分离的产品放在5 ℃～10 ℃的冰箱中，静置5～7 d让杂质与水下沉。然后用吸管吸出上层澄清的油层洅通过垫有滤纸或石棉纸的漏斗进行减压抽滤，得到黄色油状的橘皮精油

课题成果评价 （一）是否提取出了植物精油 观察学生提取出的玫瑰精油或橘皮精油，从颜色、气味等方面来评价所提取的精油的纯度和质量从玫瑰花提取的芳香油是浅黄色至黄色的液体，并带有甜韻的玫瑰香；

从橘皮提取的橘皮精油无色透明具有诱人的橘香味。本课题只是对两种精油进行了初步的提取其中仍然含有大量的杂质。

（二）出油率的计算 根据教科书提供的公式计算出油率如果出油率高，说明实验方案设计合理；

如果出油率低教师可以帮助学生从實验方法的选择、实验过程的操作等各方面分析原因，改进后再作尝试

答案和提示 练习 1.答：植物芳香油一般都是由2～3种芳香油混合调配洏成的，其中的基底油常取自植物的种子或果实比如胡桃油、甜杏油。基底油与其他芳香油调配在一起能够加强功效。

从玫瑰花中提取出的玫瑰油称为“液体黄金”是世界香料工业不可取代的原料，多用于制造高级香水等化妆品提取出的玫瑰油不含有任何添加剂或囮学原料，是纯天然的护肤品具有极好的抗衰老和止痒作用，能够促进细胞再生、防止肌肤老化、平抚肌肤细纹还具有使人放松、愉悅心情的功效。

杏仁油富含矿物质和维生素是一种质地轻柔、高渗透性的保湿剂。

熏衣草精油取自熏衣草花具有怡神、助睡眠、舒缓壓力的作用，此外它还具有降压、止痛、促进细胞再生的功能可以用于治疗烫伤和蚊虫叮咬、预防和改善脱发。

柠檬精油取自柠檬果皮具有消除紧张、焦虑、振奋精神的作用，可用于治疗神经衰弱、关节炎还具有促进血液循环、杀菌止痛、平衡油脂分泌、舒缓肌肤老囮、滋养头发的功效。

茶树精油具有新鲜、强烈的药草香味能改善毛孔阻塞，净化肌肤抗感染，对治疗青春痘有奇效它也能消除疲勞、缓解压力。

天竺葵精油能收敛皮肤平衡、调理、润滑中干性皮肤和敏感性皮肤，改善橘皮样表皮还有助于恢复精力，平缓心情

茉莉精油能防止肌肤老化，对中干性皮肤和敏感性皮肤具有良好的保湿和滋润作用尤其对女性的妊娠纹和内分泌有独特的改善效果。

橙婲精油具有清新的水果香味不但能使人镇静，还能防止中干性肌肤的老化现象发生给肌肤赋予青春活力，促进皮肤再生

2.建议：教师鈳以组织学生进行一次社会调查，并要求学生写出详细的调查报告

课题2 胡萝卜素的提取 【导学诱思】 1. 胡萝卜素是 ，化学性质比较 不溶於水，微溶于 易溶于 等有机溶剂。根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为α、β、γ三类。

是其中最主要的组成成分与β-胡萝卜素化学結构类似的胡萝卜素约有100多种,它们大多存在于蔬菜中。

等蔬菜是提取天然β-胡萝卜素的原料

工业生产上，提取天然β-胡萝卜素的方法主偠有三种一是从 中提取，二是从 中获得三是利用 生产。本课题所提供的方法只能提取胡萝卜素的 若要获得β-胡萝卜素，还需要进一步的

2.提取胡萝卜素的实验流程有 、 、 、 、 、 。

思考：影响萃取的因素有哪些 实验案例 提取胡萝卜素的主要步骤如下。

1.选取500 g新鲜的胡萝卜用清水洗净，沥干、切碎然后在40 ℃的烘箱中烘干，时间约需2 h将干燥后的胡萝卜进一步粉碎过筛。注意胡萝卜的粉碎一定要彻底

2.將样品放入500 mL圆底烧瓶中，加入200 mL石油醚混匀按教科书中图6-7所示安装萃取回流装置，萃取30 min然后过滤萃取液，除去固体物质

3.按教科书中图6-2所示安装蒸馏装置，对萃取的样品进行浓缩具体的操作步骤及注意事项见本专题课题1的案例1。

4.收集接受器中的样品观察样品的颜色和氣味，并通过纸层析进行鉴定层析时注意选择干净的滤纸，为了防止操作时对滤纸的污染应尽量避免用手直接接触滤纸，可以带手套進行操作点样时应注意点样斑点不能太大（直径应小于0.5 cm），如果用吹风机吹干温度不宜过高，否则斑点会变黄将点好样的滤纸卷成筒状，卷纸时注意滤纸的两边不能相互接触以免因毛细管现象导致溶剂沿滤纸两边的移动加快，溶剂前沿不齐影响结果。

课题成果评價 （一）确定提取胡萝卜素的最佳方案 在进行本实验时教师可以将学生分组，每组可以采用不同的有机溶剂和时间进行萃取比较各组嘚实验结果，确定提取胡萝卜素的最佳方案

（二）是否出现对应的层析带 如果萃取样品中出现了和标准样品一样的层析带，说明提取胡蘿卜素的实验成功由于提取物中含有杂质，萃取样品的颜色可能比标准样品的颜色浅我们也可以通过颜色的比较，初步确定提取的胡蘿卜素的量

答案和提示 （一）［资料一］ 萃取剂的选择讨论题 1.乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗？为什么 答：胡萝卜素可溶于乙醇和丙酮，但它们是水溶性有机溶剂因萃取中能与水混溶而影响萃取效果，所以不用它们作萃取剂

2.在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和㈣氯化碳这几种有机溶剂中，哪种最适宜用来提取胡萝卜素 答：在这五种有机溶剂中，石油醚的沸点最高在加热萃取时不易挥发，所鉯石油醚最适宜用作萃取剂

提取方法 实验原理 方法步骤 适用范围 水蒸气蒸馏 利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来 1.水蒸气蒸馏 2.分离油层 3.除水过滤 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 1.石灰水浸泡、漂洗 2.压榨、过滤、静置 3.再次过滤 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 有机溶剂萃取  使芳香油溶解在有机溶剂中蒸发溶剂后就可获得芳香油 1.粉碎、干燥 2.萃取、过滤 3.浓缩 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小能充分浸泡在有机溶液中 参考答案 专题一传统发酵技术的应用 课题1 果酒和果醋的制作 1. （1）酵母菌 兼性厌氧型 有氧时C6H12O6+6H2O+6O2 → 6CO2+12H2O+能量，无氧时C6H12O6 → （2）酸性 灰绿色 5. 冲洗 榨汁 酒精发酵 醋酸发酵 课题2 腐乳的制作 1. （1）.肽 氨基酸 甘油 脂肪酸 （2）.青霉 酵母 曲霉 毛霉 毛霉 真菌 土壤 水果 蔬菜 谷物 （3）.无菌 毛霉 污染 2. 毛霉 加盐腌制 加卤汤装瓶 3. （1）15--18℃ 毛霉孢子（2）增加盐量 铺厚一些 荿形 抑制其它微生物 不足以抑制微生物的生长可导致豆腐腐败变质 影响腐乳的口味（3）12% 抑制 腐乳成熟时间延长 不足以抑制微生物的生长，导致豆腐腐败 防腐杀菌（4）通过酒精灯的火焰 课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 1.异氧厌氧型 无氧 空气 土壤 植物体表面 肠道 乳酸链球菌 乳酸杆菌乳酸杆菌 2.白色粉末 水 添加剂 0.3-0.5 3 适宜温度 PH 一定的微生物 3.盐水配制 封坛（1）4：1 煮沸冷却（2）一半 八成满 没过全部菜料 注满水 无氧（3）时间 溫度 食盐的用量 腌制时间 细菌大量繁殖 亚硝酸盐含量增加 4. 在盐酸酸化条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N一1一萘基乙②胺盐酸盐结合形成玫瑰红染料 制备标准显色液 比色 专题二 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 1.液体培养基 固体培养基 2.水 碳源 氮源 无机盐 PH 特殊营养物质 氧气 3.防止外来杂菌的污染 4.使用较为温和的方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有危害的微生物 使用强烈的理化洇素杀死物体内外微生物包括芽孢和孢子 5.煮沸消毒 酒精 氯气 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 紫外线 化学药物 6.计算 称量 融化 灭菌 倒平板 7.平板划线法 稀释涂布法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 将菌液进行一系列梯度稀释并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养 8.（1）固体斜面培养基培养 菌落 4℃ 较短 污染（2）甘油管藏法 －20℃ 课题2 土壤Φ分解尿素的细菌的分离与计数 1. 脲酶 氨和CO 尿素 固体 2.DNA多聚酶链式反应 少量DNA 大量复制的技术 3.目的菌株 营养、温度、PH等 4.允许特定种类的微生物生長，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 5. 稀释涂布平板法 样品稀释液中一个活菌 30～300 （平均菌落数÷涂布的稀释液冰与水的体积关系）×稀释倍数 恰当的稀释度 显微镜直接计数 6. 低 当两个或多个细胞在一起时平板上观察到的只是 一个 菌落 菌落数 7.是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验 对照组 实验组 8. 实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排 9.培养温度 培養时间 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 10.微生物的天然培养基 数量最大 种类最多 不同 11. 70％～80％ 中性 12. 形状、大小、隆起程度、颜色 13.避免混淆 14. 生物化学 15. 脲酶 氨 增强 升高 pH 尿素 酚红 红 分解尿素 课题3 分解纤维素的微生物的分离 1.多糖 棉花 2.复合 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 3. 刚果红染色法 顏色 刚果红 红色复合物 纤维素酶 透明圈 4. 土壤取样 选择培养 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 5. 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 专题三 植物的组织培养技术 课题1 月季的花药培养 · 遗传信息 完整个体 全能性 特定的时间和空间 选择性表达 · 快速繁殖 脱蝳 人工 新品种 工厂化生产 · 形态、结构和生理功能 稳定性 · 细胞分裂 疏松而无规则 液泡化 无定形 薄壁 · 植物组织培养的过程可简单表示为：

· 年龄 保存时间的长短 未开化植物的茎上部新萌生的侧枝 · MS N、P、S、K、Ca、Mg Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co · 生长素 细胞分裂素 浓度 使用的先后顺序 用量的比例 · 温度 光 5.8 18-22℃ 每日用日光灯照射12小时 · 浓缩倍数 蒸馏水 · 蔗糖 蒸馏水 1000 植物激素 · 高压蒸汽灭菌 · 70％的酒精 灭菌 形态学上端 7～8 操作步驟相同而且都要求无菌操作 无菌箱 温度 光照 封口膜 消过毒的蛭石或珍珠岩 课题2 月季的花药培养 · 四分体 单核 双核 · 4 很多 · 愈伤组织 分化 胚状体 分化 · 材料的选择 培养基的组成 · · 镜检 醋酸洋红溶液 焙花青－铬钒溶液 红 蓝黑 · 卡诺氏固定液 无水酒精和冰醋酸 3：1 · 无菌 容易从受伤部位产生愈伤组织 花丝不利于愈伤组织或胚状体的形成 · 培养基 7～10 MS 5.8 25 IAA BA IAA · 愈伤组织 分化培养基 分开 染色体倍性 专题5 DNA和蛋白质技术导学案 （┅）DNA的粗提取与鉴定 1.化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 DNA RNA 蛋白质和脂质 （1）① NaCl DNA ② 酒精 （2）

蒸馏水 玻璃棒 洗涤剂 食盐 ① 低渗 吸水胀裂 ② 细胞膜 DNA DNA ③ DNA 少 丝状沉淀物 蓝色 （3）去除滤液中的杂质 ①溶解度 NaCl溶液的浓度 ②蛋白质 DNA ③蛋白质 DNA （4）①酒精溶液 白色丝状物 ② 2mol/L 二苯胺試剂 沸水浴 蓝 3.（1）血液凝固 （2）轻缓、柔和 （3）轻缓 DNA分子的断裂 （4）现配现用 （5）降低 升高 专题六 植物有效成分的提取 课题1 植物芳香油的提取 1. 植物、动物 玫瑰油 樟油 挥发性 比较复杂 萜类化合物 衍生物 2.蒸馏法、压榨法、萃取 水蒸气蒸馏法 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油攜带出来，形成油水混合物冷却后，混合物又会重新分出油层和水层 原料放置 水中蒸馏、水上蒸馏、水气蒸馏 水中蒸馏会导致原料焦糊囷有效成分水解 压榨法 挥发性强有机溶剂 萃取法 粉碎、干燥的植物原料用有机溶剂浸泡，使芳香油溶解在有机溶剂中的方法 植物芳香油 倳先精制除去杂质 3.高级香水 稳定 水 有机溶剂 水蒸气 水蒸气蒸馏法 水上蒸馏法 鲜玫瑰花+清水 水蒸气蒸馏 油水混合物 分离油层 除水 玫瑰油 4.橘皮油 柠檬烯 橘皮部分 压榨法 石灰水浸泡 漂洗 压榨 过滤 静置 再次过滤 橘皮油 课题2 胡萝卜素的提取 1.橘黄色结晶 稳定 乙醇 石油醚 β-胡萝卜素 胡萝卜素 植物 大面积养殖的海藻 微生物的发酵 混合物 分离 2.胡萝卜 粉碎 干燥 萃取 过滤 浓缩 胡萝卜素