Thp-1细胞转染实验经验分享,转染Thp-1细胞如何提高转染效率
来源:蜘蛛抓取(WebSpider)
时间:2020-09-27 09:48
标签:
细胞转染实验
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FNDC5)基因的慢病毒载体获得稳定轉染FNDC5的THP-1细胞系。方法:PCR扩增目的基因FNDC5将目的基因构建入pLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro慢病毒载体中,在DH5α感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后利用四质粒包装系统转染293T细胞包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度。Western
blot检测重组慢病毒中FNDC5的表达情况后将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系,荧光显微鏡观察并计算其转染效率经嘌呤霉素筛选建立FNDC5过表达的稳转细胞系后,将细胞分为3组分别为空白组、空载组和FNDC5组,用Western
blot及RT-PCR检测其FNDC5的表达凊况通过油红O染色后观察FNDC5过表达对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。结果:PCR产物鉴定及测序结果显示成功构建FNDC5过表达慢病毒载体;转染293T细胞后可检测到绿色荧光Western blot检测FNDC5-Flag标签有表达,包装后病毒的滴度为1.32×109
mRNA表达水平明显增加[(228.5±3.4)%]有统计学意义(P=0.000)。FNDC5过表达转染THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积减少结论:本实验成功构建了FNDC5基因的过表达慢病毒载体,通过FNDC5过表达慢病毒感染建立了FNDC5稳转的THP-1细胞系证明FNDC5可明显减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的脂质蓄积,为后续研究奠定基础
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