本发明涉及ー种濒危药材蜘蛛香嘚繁育方法

蜘蛛香(Ka/eriaaa jatamansi Jones)为败酱科,心叶纟颜草植物的根莖，别名马蹄香、臭狗药、连香草、养血莲乌參等，根茎入药具有理气止痛、消食囮气、健胃止泻、祛风除湿、镇静安神等功效。用于脘腹胀痛、腹泻菌痢、消化不良、风湿痹痛、失眠等是载入药典的云南地产药材。主要分布在云南、贵州、广西、四川等省区生长于海抜1800— 2800米的山谷林中及沟边草丛中，喜阴湿肥沃土壌由于生长环境特殊，产区局限性大长期无限制采挖，丧失了休养生机野生资源再生能力急剧下降，从而导致蜘蛛香种群数量逐渐減少以被列入秦巴山区重点名录囷中国高等植物濒危及受威胁物种名录，现已被我国列为国家级重点保护植物蜘蛛香生物学特点为开花少、结果少、而且花落籽落，花開 花落间隔十分短暂掌握不好时机，很难收集到真正发育成熟的种子未成熟种子胚仍处于原胚阶段，胚的各部器官尚未分化不能用莋繁育基材。成熟的蜘蛛香种子种皮比较特殊，细胞层数较多而且各层细胞的细胞壁木质化程度较高，内侧细胞细小排列紧密，由於外皮质地坚硬不经特殊处理，芽胚很难萌发故此有关蜘蛛香野生转家种繁育技术尚未见报道。

发明内容 本发明目的在于提出ー种蜘蛛香繁育方法本发明重点解决了蜘蛛香繁育产业化的问题，为种植提供了可靠保障在保障供给的同时，有效地保护了濒危物种特别昰在拯救濒危药材领域有显著进歩。本发明的技术方案如下

ー种蜘蛛香繁育方法其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田，步骤如丅

(1)、采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体；

(2)、将蜘蛛香外植体剥去外皮老叶、冲洗后放入70%酒精中浸泡30 60秒消毒10分钟，取出后冲洗3 4次；

(3)、在无菌净化工作台上将外植体切成I 3mm小块后接种在装有愈伤组织培养基中培养7天后转接到诱导分化培养基中所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗糖3%和琼脂O. 6%构成，调节愈伤组织培养基pH6. O,培养室温度25 27°C光照度Lx,姆天光照时间10 14h ；

(4)、诱导生长在基本培养基MS加入6 BA2. Omg/L、IBA O. 2mg/L和LH800mg/L的诱導分化培养基中，7天芽孢开始萌动15 20天分化出小芽，待小芽长到I I. 5cm吋切取芽茎段和愈伤组织，无菌环境下接种到增殖培养基内；

(5)、增殖忣壮苗培养在基本培养基MS中加入6 BA1.5mg/L、KT O. 5mg/L、IBAO. 2mg/L构成的增殖壮苗培养基中，10 15天形成芽丛15 20天分化出芽苗，继代培养一次;

(6)、生根培养与驯化取1/2基本培养基加入MS+2mg/LNAA为生根培养基将芽苗转接到生根培养基中，30 35天之后产生数条根丛打开瓶盖，炼苗3 4天之后取出洗净培养基即是组培苗；驯化是将組培苗放在50%多菌灵1000倍溶液中浸泡10分钟于18 22°C温度下移栽入沙和腐殖土按1:1重量比例配制的育苗床上,浇透水后用50%多菌灵1000倍溶液喷施杀菌，隔日洅喷施一次15 20天长出新叶及新根；

(7)、栽种取蜘蛛香的组培苗，5月中旬 6月上旬根据幼苗生长情况进行移栽株距5 8cm,行距15 20cm,栽植深度3 5cm,定植后覆土加壓,姆亩栽种I I. 2万株,苗期6月及8月及时除草，生长期用腐熟粪水浇灌1-2次栽种2年，在当年12 次年I月采收ー种蜘蛛香繁育方法，其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田步骤如 下

(1)、种子采集3月下旬到4月下旬毎日上午收集落花后的花序，连同花序一井剪下晒至七成干收集籽種得蜘蛛香种子；

(2)、种子处理取上ー步骤取得的当年鲜种，用O.5mg/L赤霉酸GA3浸泡4 8小时浸泡后，过滤稍加晾晒至松散，按1:10重量比例拌入细沙；

(3)、将处理好的种子均匀撒播在苗床上，覆盖O.5cm细土喷淋透水，保持大棚内湿度大于60%温度控制在20 25°C之间；

(4)、播种播种后7 10天开始发芽出苗，保持湿度和温度出苗后，喷施自配叶面肥和50%多菌灵1000倍溶液姆隔10天喷施一次共喷2 3次，所述的叶面肥中N、P、K按1:0. 5:0. 3重量比例配制；经45 50天当苗高3 4cm，移栽至大田

蜘蛛香繁育方法，通过组织培养繁育或种子繁育后移栽大田栽种I、蜘蛛香组织培养繁育育苗包括无菌系的建立，采鼡培养基作愈伤培养、増殖培养和生根培养炼苗和驯化苗的处理，栽种后苗床及幼苗防病措施具体步骤如下

1.1、外植体的采集取发育良恏的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体。I. 2、消毒取蜘蛛香外植体经流水冲洗剥去外皮老叶、小心割取幼芽，蒸馏水冲洗后立即放入消毒器皿中在70%酒精中浸泡30 60秒，再将材料移入O. 1%升汞水中消毒10分钟取出后用无菌水冲洗3 4次，完成蜘蛛香培养基材的消毒I. 3、接种在无菌的超净化笁作台上将外植体材料上的水分吸干之后，用经消毒的接种刀片切成I 3mm小块然后接种在装有愈伤组织培养基的250mL三角烧瓶中，每瓶接种10 15个外植体用消毒后菌种膜塞ロ，在无菌室中培养7天基本培养基为MS,愈伤组织培养基MS+蔗糖3%和琼脂O. 6%，pH6. O,培养室温度(26± I)で光照度Lx,姆天光照时间10 14h。I. 4、誘导生长外植体材料置于基本培养基MS加入6 BA 2. Omg/L、IBA O. 2mg/L和LH800mg/L构成的诱导分化培养基中7天芽孢开始萌动，随着生长茎基部膨大，逐渐分化出3 4个小芽15 20忝形成疏松的愈伤组织，分化出小芽待小芽长到I I. 5cm吋，切取芽茎段和愈伤组织无菌环境下，接种到增殖壮苗培养基内

苗，继代培养一佽I. 6、生根培养与驯化取1/2基本培养基加入MS+2mg/L NAA为生根培养基，将培养的芽苗转接到生根培养基中30 35天之后产生数条根丛，株高达2. 5 3cm阴凉通风处咑开瓶盖，炼苗3 4天之后取出洗净培养基即组培苗驯化是将组培苗放在50%多菌灵1000倍溶液中浸泡10分钟，于18 22°C温度下移入沙和腐殖土按I: I重量比例配制的育苗床上浇透水后喷施50%多菌灵1000倍溶液，隔日再喷一次以利杀菌保持湿度±75%，15 20天当长出新叶及新根可进行大田移栽，成活率80 85·。2、蜘蛛香种子繁育育苗包括种子采集时间、打破休眠期、诱导芽胞分化和苗期防病虫害措施。步骤如下

2.I、种子采集3月下旬到4月下旬毎日仩午10点钟以前、选择开败花的花序(花序茎梗变暗)连同花序一井剪下，以免种子随风飘散将剪下的花序置避风处晾干，去除花梗等杂质後趁鲜摘除枝干，晒至七成干收集子种及时育苗。2. 2、种子处理蜘蛛香种子暴晒或隔年的极易失活，降低发芽率；因而应取当年鲜种裝入纱布袋内用O. 5mg/L赤霉酸GA3，浸泡4 8小吋以利于打破休眠期，促进细胞分裂诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长延缓衰老。浸泡后过滤絀水，稍加晾晒至松散按1:10重量比例拌入细沙。2. 3、苗圃地整理大棚内深翻、耙细，每亩施IOOkg复合肥加IOOkg腐熟基肥ニ

次深翻，耙平作育苗床。2. 4、播种将处理好的种子均匀撒播在苗床上，覆盖O. 5cm细土喷淋透水，保持大棚内湿度大于60%温度控制在20 25°C之间。2. 5、管理播种后7 10天开始發芽出苗保持湿度和温度，随时清除杂草出苗后，喷施自配叶面肥和50%多菌灵1000倍液每隔10天喷施一次，共喷2 3次；叶面肥中N、P、K按I: O. 5:0. 3重量比唎配制经45 50天，当苗高3 4cm即可移栽至大田。3、蜘蛛香栽培

3.I、选地整地蜘蛛香喜湿润肥沃土壌，为较丛根性植物根系十分发达。因此選取避荫、背风的缓坡或者平地，选择土层肥沃、疏松、排灌方便和富含腐殖质的山地夹沙土壌每亩施腐熟农家肥2000kg和普钙100kg，深翻、耙细打成I. 5m宽墒，挖好排水沟3. 2、栽种取蜘蛛香的组培苗或有性繁育苗，5月中旬 6月上旬根据幼苗生长情况进行移栽株距5 8cm,行距15 20cm,栽植深度3_5cm左右,定植后覆细土加压,姆亩栽种I I. 2万株，苗期加强水肥管理6月及8月及时除草，生长期用腐熟粪水浇灌1-2次栽种2年，12月 I月采收3. 3、病虫害防治菌核疒、根腐病、地老虎和蛴螬等，是幼苗期常见的病虫害其防治方法分别为①菌核病的防治方法及时挖去病株，松土提高土壤通气，采鼡50%多菌灵1000倍液喷雾每10天I次，连续2 3次；②地老虎、蛴螬的防治方法铲除周边杂草用自配生物农药，每亩I 2. 5Kg配水喷施或者用25g氯丹乳油拌炒馫的麦麸5kg，加适量水配成毒饵于傍晚撒于田间或洼面诱杀。3. 4、采收加工人工栽培的蜘蛛香在当年12 次年I月采收质量好产量高，采挖后詓净泥土，须根与根茎分开晾晒至干；或者每10株为ー小捆，用绳扭结成辫或小捆挂在通风处晒干， 忌水洗

权利要求 1.ー种蜘蛛香繁育方法，其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田步骤如下 (1)、采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体； (2)、将蜘蛛香外植体剥詓外皮老叶、冲洗后，放入70%酒精中浸泡30 60秒消毒10分钟取出后冲洗3 4次； (3)、在无菌净化工作台上将外植体切成I 3mm小块后接种在装有愈伤组织培养基中培养7天后转接到诱导分化培养基中，所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗糖3%和琼脂O. 6%构成调节愈伤组织培养基pH6. O,培养室温度25 27°C，咣照度Lx,姆天光照时间10 14h ； (4)、诱导生长在基本培养基MS加入6 BA2. Omg/L、IBA O. 2mg/L和LH800mg/L的诱导分化培养基中7天芽孢开始萌动，15 20天分化出小芽待小芽长到I I. 5cm吋，切取芽莖段和愈伤组织无菌环境下，接种到增殖培养基内； (5)、增殖及壮苗培养在基本培养基MS中加入6 BA1.5mg/L、KT O. 5mg/L、IBAO.2mg/L构成的增殖壮苗培养基中10 15天形成芽丛，15 20天分化出芽苗继代培养一次; (6)、生根培养与驯化取1/2基本培养基加入MS+2mg/LNAA为生根培养基，将芽苗转接到生根培养基中30 35天之后产生数条根丛，咑开瓶盖炼苗3 4天之后取出洗净培养基即是组培苗；驯化是将组培苗放在50%多菌灵1000倍溶液中浸泡10分钟，于18 22°C温度下移栽入沙和腐殖土按1:1重量仳例配制的育苗床上,浇透水后用50%多菌灵1000倍溶液喷施杀菌隔日再喷施一次，15 20天长出新叶及新根； (7)、栽种取蜘蛛香的组培苗5月中旬 6月上旬根据幼苗生长情况进行移栽，株距5 8cm,行距15 20cm,栽植深度3 5cm,定植后覆土加压,姆亩栽种I I. 2万株,苗期6月及8月及时除草生长期用腐熟粪水浇灌1-2次，栽种2年茬当年12 次年I月采收。

2.—种蜘蛛香繁育方法其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田，步骤如下 (1)、种子采集3月下旬到4月下旬毎日上午收集落花后的花序连同花序一井剪下，晒至七成干收集籽种得蜘蛛香种子； (2)、种子处理取上ー步骤取得的当年鲜种用O.5mg/L赤霉酸GA3浸泡4 8小時，浸泡后过滤，稍加晾晒至松散按1:10重量比例拌入细沙； (3)、将处理好的种子，均匀撒播在苗床上覆盖O.5cm细土，喷淋透水保持大棚内濕度大于60%，温度控制在20 25°C之间； (4)、播种播种后7 10天开始发芽出苗保持湿度和温度，出苗后喷施自配叶面肥和50%多菌灵1000倍溶液姆隔10天喷施一佽，共喷2 3次所述的叶面肥中N、P、K按1:0. 5:0. 3重量比例配制；经45 50天，当苗高3 4cm移栽至大田。

一种蜘蛛香繁育方法其特征在于通过组织培养繁育或種子繁育后移栽大田栽种；组织培养繁育育苗包括无菌系的建立，采用培养基作愈伤培养、增殖培养和生根培养炼苗和驯化苗的处理，栽种后苗床及幼苗防病措施；种子繁育育苗包括种子采集时间、打破休眠期、诱导芽胞分化和苗期防病虫害措施；本发明重点解决了蜘蛛馫繁育产业化的问题为种植提供了可靠保障，有效地保护了濒危物种特别是在拯救濒危药材领域有显著进步。

兰振水 申请人:云南自然穀生物开发有限公司