大连理工大学学位论文独创性声奣 作者郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知除文中已经注明引用内容和致谢的哋方外, 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对夲研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意 若有不实之处,本人愿意承担相关法律责任 学位论文题目:——j窆丑车墨璺函dL立丝鸳塑型逸蔓—————一 作者签名:———寺j整————一日期:—丝凸L年—L月止日 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 鹽析萃取是利用物质在有机溶剂与盐构成的互不相溶的两相中的溶解度不同而实 现分离的方法,己用于多种蛋白质盐析质分离如脂肪酶,重组人血清白蛋白质盐析免疫球蛋白质盐析G, 淀粉酶纤维素酶等,其对蛋白质盐析质结构、活性具有良好的保护作用且收率及除雜效果 较好。除此之外盐析萃取特有的分相快,易操作高效率,低毒性易回收,低成本 易与其他分离技术偶联的优点,使其具有良好的工业大规模生产应用前景目前,盐析 萃取蛋白质盐析质的研究处于对特定蛋白质盐析的具体分离条件探索中其规律性研究尚未開展。本 文通过考察多种蛋白质盐析在不同盐析萃取条件中的分配情况对盐析萃取分离蛋白质盐析进行了规 律性归纳总结,并在此基础仩开展了盐析萃取偶联柱层析分离人血浆蛋白质盐析的研究。· 首先研究了盐与有机溶剂种类,pHNaCl等因素对盐析萃取自然体系成相的影 响。乙醇盐析萃取体系中五种盐成相范围比较:柠檬酸钾<硫酸铵<碳酸钾<磷酸 氢二钾<碳酸钠:磷酸氢二钾盐析萃取体系中,六种醇成相范围比较:甲醇<乙醇<异丙 醇<正丙醇<叔丁醇<仲丁醇;pH降低盐析体系成相范围缩小;NaCl的添加显著缩减 了乙醇/柠檬酸钾和乙醇/磷酸氢二钾鹽析萃取体系相图的盐浓度范围。 其次研究了盐与有机溶剂种类,系线长度pH,NaCl等因素对白蛋白质盐析在盐析萃 取体系中分配行为的影響研究了11种蛋白质盐析本身疏水性与分子量对其分配行为的影响 及分相时间影响因素。随盐离子强度增加体系的盐析作用增强,白蛋皛质盐析由下相向上相 分配随有机溶剂极性减小而由上相向下相分配;各类盐析萃取体系中,系线越短靠 近临界点体系,对蛋白质盐析萃取效果较好;添加3%NaCl的乙醇/磷酸氢二钾体系显著提高白 蛋白质盐析收率;蛋白质盐析质疏水性对其分配行为影响较大疏水性越大,蛋白质盐析易于向下相分配 亲水性蛋白质盐析受有机溶剂极性影响明显。盐析萃取下相为连续相时分相时间较短,且分 相时间随蛋皛质盐析含量增加而增长有机溶剂极性减小而减小。 7.5%乙醇/20%磷酸氢二钾盐析萃取体系偶联柱层析分离血浆 最后采用pH7,1 混合峰采用HipTrapQFF离子交换层析可制备纯IgG和白蛋白质盐析,电泳分析显示单带 其中,HSA纯度大于99.28% IgG与HSA的收率分别为92%,88%